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I. INTRODUCCIÓN
La calidad microbioloó gica del agua se evaluó a en todo el mundo para proteger la salud humana y la
biodiversidad en el medio ambiente acuaó tico. La deteccioó n y cuantificacioó n de microorganismos
patoó genos en el agua es importante para reducir los riesgos asociados a la salud puó blica y tomar
las acciones maó s adecuadas para prevenir la transmisioó n de enfermedades debido a que el geó nero
Enterococcus ha cobrado una gran importancia al nivel internacional por su elevada incidencia en
las enfermedades nosocomiales y por la adquisicioó n de resistencia a muchos antimicrobianos.
Varios microorganismos indicadores de la contaminacioó n fecal se utilizan para evaluar la calidad y
la seguridad de los distintos tipos de agua. Enterococcus estaó recibiendo una amplia aceptacioó n
como indicador muy uó til en la determinacioó n de la calidad microbioloó gica
Enterococcus son ceó lulas esfeó ricas u ovoides, de tamanñ o 0,6-2,0 × 0,6-2,5 µm. Son cocos
grampositivos, no formadores de endosporas. Se presentan en forma de pares o de cadenas cortas.
Son no moó tiles, con excepcioó n de las especies E. gallinarum y E. casseliflavus. Son anaerobios
facultativos, quimiorganotrofos, con metabolismo fermentativo. Fermentan un amplio rango de
carbohidratos con produccioó n principalmente de L (+)- aó cido laó ctico, pero no de gas, y producen un
pH final de 4,2-4,6. Presentan requerimientos nutricionales complejos. Son catalasa negativos o,
maó s comuó nmente, deó bilmente positivos. Crecen usualmente en un caldo de cultivo a 10 °C y 45 °C,
aunque el crecimiento oó ptimo es a 37 °C. Pueden crecer a pH 9,6, con 6,5 % de NaCl y con 40 % de
bilis. Usualmente fermentan la lactosa. Portan el antíógeno D del grupo Lancefield y poseen el
carbohidrato C. Sobreviven despueó s del calentamiento a 60 °C durante 30 min.
Enterococcus pueden diseminarse por transmisioó n fecal-oral, por contacto con fluidos de personas
infectadas o por contacto con superficies contaminadas.Existen 33 especies pertenecientes al
geó nero Enterococcus.
Enterococcus es considerado el indicador bacterioloó gico maó s eficiente para evaluar la calidad de
agua de mar para uso recreativo, debido a que es altamente resistente a las condiciones salinas de
este medio y ademaó s estaó relacionado directamente con gastroenteritis, enfermedades
respiratorias, conjuntivitis y dermatitis, entre otras.
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II. OBJETIVOS
MUESTRA:
MATERIALES DE LABORATORIO:
Pipetas
Matraz
Tubos de ensayo
Gradilla
Placas Petri
Mecheros
Agua destilada
EQUIPOS:
Una balanza
Autoclave
Incubadora
Microscopio
Cocina eleó ctrica
MEDIOS DE CULTIVO:
Agar KF
Caldo BHI
Agua peptonada
REACTIVOS:
Peroxido de hidrogeno
MEDIOS DE CULTIVO
A. Agar KF
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% p/v) y posee lactosa en menor proporcioó n (0,1 % p/v). Algunos Enterococcus y Streptococcus
son capaces de fermentar estos azuó cares y crecer en el medio; sin embargo, la intensidad en la
reduccioó n del TTC varíóa entre las diferentes especies. Por ejemplo, E. faecalis produce colonias con
un fuerte color rojo, mientras que otras especies de Enterococcus y Streptococcus producen
colonias maó s pequenñ as y de color rosado brillante. El meó todo de cultivo requiere de un períóodo de
incubacioó n de 48 h a 37ºC
El agar KF son medios para Enterococcus que basan su funcionamiento en la fermentacioó n de
azuó cares contenidos en la formulacioó n, y provocan un cambio de coloracioó n de los indicadores
como resultado de la acidificacioó n que producen algunas especies que pueden metabolizarlas.
IV. PROCEDIMIENTO
A. TOMA DE MUESTRA:
a) Envases:
Realíócese la toma de muestras para el estudio bacterioloó gico del agua de las piscinas en la
forma descrita en la seccioó n 9060ª del libro Apha 1995.
Utilíócense envases con una capacidad de 120-480 ml, en funcioó n de los anaó lisis que vayan a
efectuarse. Anñ aó dase tiosulfato de sodio, Na2S2O3, como neutralizador desinfectante
en una cantidad suficiente como para proporcionar una concentracioó n aproximada a 100
mg/1 en la muestra.
Para ello, anñ aó danse 0,1 ml de una solucioó n de Na 2S2O3 al 10 % a una botella de 120 ml, o 0,4
ml a una botella de 480 ml. Una vez anñ adido el Na 2S2O3, taó pese o cieó rrese la botella y
esterilíócese.
Realíócese la toma de muestras en la zona y durante el períóodo de maó xima densidad de banñ os.
Para la posterior interpretacioó n de los resultados del anaó lisis, tambieó n es importante la
informacioó n sobre dicha densidad.
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B. PRUEBAS PRESUNTAS:
C. PRUEBAS CONFIRMATORIAS:
1) Escoger de 5 a 10 colonias de color purpura en las placas del medio de Packer o un nuó mero
igual de colonias rojas y/o rosa claro de las placas de agar KF. Tomarlas con el asa de
siembra e inocularlas individualmente en tubos de caldo infusioó n cerebro corazoó n, que
seraó n incubados a 35-37ºC durante 18-24 horas o hasta que aparezca turbidez.
2) Hacer una tincioó n de Gram de cada uno de los cultivos y observar la presencia de tíópicos
cocos ovales, Gram positivos en pares o en cortas cadenas
3) Tomar aseó pticamente unos 3ml de cada uno de los cultivos de estreptococos y mezclarlos en
otro tubo con aproximadamente 0,5 ml de peroó xido de hidroó geno al 3 %. El caraó cter
catalasa negativo (ausencia de produccioó n de burbujas) confirma que se trata de
estreptococos.
4) Inocular con cada cultivo confirmado de estreptococos un tubo de caldo infusioó n cerebro
corazoó n. Templar los tubos en banñ o de agua a 44-46 ºC e incubarlos a la misma temperatura
durante 48 horas, observando el crecimiento.
5) Sembrar con cada cultivo confirmado de estreptococos un tubo de caldo infusioó n de cerebro
corazoó n conteniendo 6.5% de NaCl. Incubar a 35-37ºC durante 72 horas y observar el
crecimiento
6) Un estreptococo catalasa negativo que crece a 44-46ºC y tambieó n en presencia de un 6.5 %
de NaCl corresponde a un enterococo. (I.C.M.S.F, 2000)
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REFERENCIAS:
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4. Grupo de Trabajo Federal, P. (1992). Pautas para la calidad del agua recreativa canadiense.
Canada.
5. I.C.M.S.F. (2000). Microorganismos de los alimentos. Vol. I: Su significado y métodos de
enumeración. Espanñ a: Editorial Acriba.
6. Vergaray, G., Mendez, C., Morante, H., Heredia, V., & Bejar, V. (2007). Enterococcus y Escherichia
coli como indicadores de contaminacioó n fecal en playas costeras de Lima. Revista del Instituto
de Investigación de la Facultad de Ingeniería Geológica, Minera, Metalúrgica y Geográfica.