FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

PROCESO DE DISEÑO CURRICULAR

INFORME DE LABORATORIO
Código: FCQ-P05-F06; Versión: 01; 15 de enero de 2017

Informe de laboratorio

Asignatura: Instrumental 1 NOTA

Número de práctica:
Fecha ( día-hora)de 11/12/2019 Fecha de entrega:
realización: 13:00-15:00 18/12/2019
Integrantes / Grupo N°: Caisachana Flores Karla Michelle
Imaicela Maldonado Pamela Alexandra
Mena Olmedo Kevin Sebastián
Oviedo Josua Israel
Rivadeneira Asimbaya Lady Micaela
Simbaña Pablo Alexander

1. Título : Introducción a la espectrofotometría. Control Instrumental

fotométrico.

2. Resumen : En la presente practica se realizó determinaciones

colorimétricas mediante el empleo de tubos de Nessler y el
colorímetro de Doboscq y se obtuvo como resultado que la
longitud de onda de máxima absorbancia del KMnO4 es de
…….. . también se determinó la concentración de una
muestra mediante la grafica resultante de los datos
obtenidos para cada uno de los estándares y la
absorbancia que se midió en el mismo equipo, dando como
resultado el valor de …… M para la muestra.
Explicación breve de lo que se realizó en el laboratorio, con
los resultados obtenidos.)
3. Objetivo/s:  Examinar y operar un espectrofotómetro UV-VIS y
determinar su funcionamiento.
 Conocer los procedimientos para evaluar el
desempeño del espectrofotómetro.
 Determinar las posibles causas de error en una
medición espectrofotométrica.
 Realizar determinaciones colorimétricas mediante el
empleo de tubos de Nessler y el colorímetro de
Duboscq.
 Establecer la longitud de onda de máxima
absorbancia del KMnO4 en solución.

4. Fundamento Teórico Espectrofotometría

La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más

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usados, y se basa en la relación que existe entre la absorción
de luz por parte de un compuesto y su concentración.
Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola
longitud de onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la
luz incidente es absorbida por el medio y otra transmitida, como
consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada
desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la
intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo del
compuesto y el tipo de absorción a medir, la muestra puede
estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles
y ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es
generalmente disuelta para formar una solución.

Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual

es una curva que muestra la cantidad de energía radiante
absorbida, Absorbancia, por la sustancia en cada longitud
de onda del espectro electromagnético, es decir, a una
determinada longitud de onda de la energía radiante, cada
sustancia absorbe una cantidad de radiación que es distinta a la
que absorbe otro compuesto:

Ley de Lambert
Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un
medio homogéneo, la disminución de la intensidad del haz de
luz incidente es proporcional al espesor del medio, lo que
equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida disminuye
exponencialmente al aumentar aritméticamente el espesor del
medio absorbente (Fig. 2):

Ley de Beer
La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye
exponencialmente al aumentar aritméticamente la concentración
de la sustancia adsorbente, cuando este haz pasa a través de
un medio homogéneo (Fig. 3):

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La relación matemática que da cuenta de esta ley se muestra a continuación :

P / P0 = e -k’c
Ambas leyes se combinan en una sola generando la Ley de
Lambert-Beer

log P0 / P = a b c ó A=abc
A = log P0 / P = - log T

Transmitancia (T): Es la razón entre la luz monocromática

transmitida (P) por una muestra y la energía o luz
incidente (Po) sobre ella. Tanto la energía radiante
incidente como la transmitida deben ser medidas a la
misma longitud de onda:

T = P / P0 = 10-abc ó %T = 100 P / P0

Se acostumbra a considerar la transmitida como la razón de

la luz transmitida por la muestra y la luz transmitida por un
estándar arbitrario. Este estándar puede ser el liquido
(solvente) en que esta disuelta la muestra, aire, blanco
analítico (solución que contiene todos los componentes de
la solución problema menos la sustancia problema) u otra
sustancia elegida arbitrariamente. Debido a que la
transmitancia de este estándar no es necesariamente
100%, es necesario especificar el estándar con el cual la
muestra es comparada.

Absorbancia(A): Se define como la cantidad de energía

radiante absorbida por una sustancia pura o en solución.
Matemáticamente, corresponde al logaritmo negativo de
la transmitancia.T, transmitancia expresada como
fracción decimal %T, transmitancia expresada como
porcentaje.

A = - log T = 2 – log %T

T = P / P0 = 10-abc

A = - log ( P / P0 ) = - log 10-abc

A = abc

Esta ecuación indica que la absorbancia es una función

lineal de la concentración, donde a es una constante de
proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a
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depende de las unidades de b y c. Si la concentración c
está expresada en moles por litro y la longitud de la cubeta
b en centímetros, la constante a recibe el nombre de
absortividad molar( ξ ).

5. Procedimiento  Como primer paso para la realización de la práctica

era necesario preparar distintas soluciones patrón de
KMnO4 para poder realizar una curva de calibración
adecuada, las soluciones fueron preparadas con
antelación de este modo, no fue necesario
prepararlas.
 Posteriormente se calibró el espectrofotómetro a una
longitud de onda de 526 nm.
 Se midió la absorbancia del agua destilada para
determinar la absorbancia del blanco.
 Se midió la absorbancia de las muestras patrones,
para determinar la curva de calibración.
 Se midió la absorbancia de las muestras problema, y
se ajustaron los datos con la curva de calibración.

6. Resultados Tablas / figuras/ cálculos/ gráficos, etc. (conforme

instrucciones de la guía)
7. Discusión de resultados Análisis e interpretación de los resultados / desviaciones
ocurridas / procedimiento o instrumentos estadísticos
utilizados para el análisis de resultados
8. Conclusiones
Al operar el espectrofotómetro UV-VIS se logró identificar
su funcionamiento, permitiendo conocer el procedimiento
que se debe seguir para que el mismo tenga un buen
desempeño y así evitar posibles errores.

Los valores obtenidos de absorbancia y porcentaje de

transmitancia mediante el uso de tubos de Nessler y el
colorímetro de Duboscq son aceptados cuando se cumple
las siguientes condiciones: usar los mismos tubos de
Nessler para las mediciones de todas las muestras, la
concentración de los estándares utilizados debe estar
dentro del área de trabajo, es decir entre el límite de
cuantificación y el límite de linealidad para que el método
sea útil.

Mediante los datos obtenidos por medio del colorímetro de

Duboscq se obtuvo que la longitud de onda de máxima
absorbancia del KMnO4 en solución es ……..

Efectuar una comparación entre la literatura o datos

bibliográficos, valores de referencia y resultados
experimentales / hacer referencia al cumplimiento de
objetivos.
9. Cuestionario/Consulta Señales y ruido:
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Relación entre señal y ruido
La relación señal/ruido o S/R (en inglés signal-to-noise
ratio, abreviado SNR o S/N) se define como la proporción
existente entre la potencia de la señal que se transmite y la
potencia del ruido que la corrompe. Este margen es medido
en decibelios. Rango dinámico y relación señal/ruido para
referirse a este margen que hay entre el ruido de fondo y
nivel de referencia, pueden utilizarse como sinónimos. No
ocurre lo mismo, cuando el rango dinámico indica la
distancia entre el nivel de pico y el ruido de fondo. Que en
las especificaciones técnicas de un equipo aparezca la
relación señal/ruido indicada en decibelios no significa nada
si no va acompañado por los puntos de referencia utilizados
y las ponderaciones.
Para indicar correctamente el margen dinámico, la medida
en dB debe ir acompañada por:

 la curva de ponderación.
 el nivel de referencia.

Fuentes de ruido en los análisis instrumentales.

Ruido Químico:
Fluctuaciones de temperatura, presión, humedad,
materiales fotosensibles,etc.
Ruido Instrumental:
Ruido térmico: proviene de la agitación térmica de los
electrones. Ocurre fundamentalmente en resistencias,
condensadores, detectores de radiación y demás
elementos resistivos.
Es aleatorio.
Es dependiente de la temperatura y delancho de banda.
Es independiente de la frecuencia de trabajo.
Ruido de Disparo (Cuántico): proviene del movimiento de
electrones o fotones en los nodos o uniones.
Es aleatorio.
Es dependiente del valor de la corriente y del ancho de
banda.
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Es independiente de la frecuencia de trabajo.
Ruido de Parpadeo: no se comprende bien el origen físico
(empíricamente es proporcional al número de electrones o
fotones que llegan a una superficie).
Es proporcional a la magnitud de la señal.
Depende de cómo están constituidos y ensamblados
resistencias y detectores de fotones.
Es más importante a bajas frecuencias.
Para anchos de banda pequeños 1/f es aproximadamente
constante.
Ruido ambiental: es una mezcla de diferentes tipos de
ruidos procedentes del entorno.

Linealidad
Se entiende por Linealidad la capacidad de un método
analítico de obtener resultados proporcionales a
la concentración de analito en la muestra dentro de un
intervalo determinado.

Repetibilidad
La repetibilidad se refiere a la posibilidad de obtener
resultados consistentes al replicar un estudio con un
conjunto distinto de datos, pero obtenidos siguiendo el
mismo diseño experimental. Así mismo, el término está
estrechamente relacionado al concepto de testabilidad.

Precisión
se denomina precisión a la capacidad de un instrumento de
dar el mismo resultado en mediciones diferentes realizadas
en las mismas condiciones o de dar el resultado deseado
con exactitud. Esta cualidad debe evaluarse a corto plazo.
No debe confundirse con exactitud ni con reproducibilidad.

Exactitud
se denomina exactitud a la capacidad de un instrumento de
acercarse al valor de la magnitud real. La exactitud es
diferente de la precisión.
La exactitud depende de los errores sistemáticos que
intervienen en la medición, denotando la proximidad de una
medida al verdadero valor y, en consecuencia, la validez de
la medida.

CUESTIONARIO PRÁCTICA 6

Fundamento de la absorción molecular de la radiación

electromagnética ¿por qué las sustancias presentan
coloración?
El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad
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de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las

radiaciones dentro del espectro UVvisible. Las longitudes
de onda de las radiaciones que una molécula puede
absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen
de la estructura atómica y de las condiciones del medio
(pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por
lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para
la determinación y caracterización de biomoléculas. Las
moléculas pueden absorber energía luminosa y
almacenarla en forma de energía interna. Esto permite
poner en funcionamiento ciclos vitales como la fotosíntesis
en plantas y bacterias. Cuando la luz (considerada como
energía) es absorbida por una molécula se origina un salto
desde un estado energético basal o fundamental, E1, a un
estado de mayor energía (estado excitado), E2. Y sólo se
absorberá la energía que permita el salto al estado
excitado. Cada molécula tiene una serie de estados
excitados (o bandas) que la distingue del resto de
moléculas. Como consecuencia, la absorción que a
distintas longitudes de onda presenta una molécula -esto
es, su espectro de absorciónconstituye una seña de
identidad de la misma. Por último, la molécula en forma
excitada libera la energía absorbida hasta el estado
energético fundamental.
Definición de Absorbancia y Transmitancia
Transmitancia: Se acostumbra a considerar la transmitida
como la razón de la luz transmitida por la muestra y la luz
transmitida por un estándar arbitrario. Este estándar puede
ser el liquido (solvente) en que esta disuelta la muestra,
aire, blanco analítico (solución que contiene todos los
componentes de la solución problema menos la sustancia
problema) u otra sustancia elegida arbitrariamente. Debido
a que la transmitancia de este estándar no es
necesariamente 100%, es necesario especificar el
estándar con el cual la muestra es comparada.
Absorbancia: es un concepto más relacionado con la
muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida
por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T

Diseño y funcionamiento del colorímetro de Duboscq,

fotómetro de filtro
El colorímetro de Duboscq, quien desarrolló un instrumento
para medir, variando la altura de las muestras, su relación
entre la patrón y la desconocida. La luz necesaria era
proporcionada por el sol mediante un espejo, como los
primeros microscopios. Varios instrumentos se
desarrollaron según ese principio, desde simples
comparadores ópticos hasta complejos instrumentos de
medición.
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Métodos de medición de la absorción de la radiación: a)

Método de las series patrón b) Método de
compensación
El método de las soluciones patrón consiste en realizar
varias muestras con concentraciones diferentes de un
analito coloreado, se calibra el espectrofotómetro con agua
destilada para la muestra blanco, y se procede a realizar la
medición de cada solución, de este modo se obtiene una
curva de calibración en un rango determinado que permite
la extrapolación con datos de sustancias del mismo ananlito
con concentraciones desconocidas.
El método de compensación: La colorimetría visual consiste
en el uso de la vista para comparar las intensidades de dos
rayos de luz. Las técnicas experimentales se basan en el
siguiente principio: si dos soluciones de una misma
sustancia coloreada son iluminadas con la misma
intensidad y las condiciones de medición son tales que las
intensidades de los rayos emergentes también son iguales,
es posible determinar la concentración de una de ellas
(muestra desconocida) conociendo la concentración de otra
(patrón o referencia).
Este tipo de procedimientos por compensación se hacen
necesarios, dada la incapacidad del ojo humano de medir
intensidad de luz o realizar una estimación exacta de
diferencias de intensidades. Los resultados serán
satisfactorios si se usa el ojo sólo para detectar diferencias
entre dos intensidades, sin prestar atención al valor
absoluto de cada una o de la diferencia entre ambas. La
máxima precisión que puede alcanzarse en estas técnicas
es del 6%, ya que en condiciones óptimas, el ojo verá como

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iguales dos intensidades que difieren en realidad en un 6%.

Bibliografía Consultada AYRES, G.(1970). Análisis Químico Cuantitativo 2da Edición.

Harla. México. p. 463–471
MELOAN, C. y KISER, R. (1973). Problemas y experimentos en
Análisis Instrumental. Reverte. México. p. 13.
SKOOG, D. y LEARY, J. (1994). Análisis Instrumental 4ta.
Edición. Mc Graw – Hill. Madrid. p. 6678, 84, 142147.
WILLARD, H., MERRITT
11. Anexos Opcional

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