Réalisé par :

 NAIM NOUHAILA

 MOUTAABID MARIAM

 LEBAKHER ASSIA
 COMPTE RENDU DES TPS DE MICROBIOLOGIE

Introduction
Microbiologie : une branche spécialisée de la biologie, la science qui
étude les organisme microscopique, la microorganisme souvent pour déterminé
un germe ou un bactérie, un virus .

Le but
Le but de cet TPs est familiarise l'étudiant avec un laboratoire de microbiologie,
son équipement et son fonctionnement, ainsi que l'étudiant devra prendre par
mesure de sécurité, contre tout risque de contamination de soi même et de son
matériel et son environnement.

1ere séance : préparation d’un milieu de culture

1. L'objectif : la première séance du tp c'était de préparé le milieu de culture

dans laquelle les micro organisme trouvent les composantsindispensable
pour leur multiplication.
2. Mode opératoire :

 Réactif :
 Tryptome 2,5g/l
 Extrait de levure 1,25g/l
 Agar 7,5g/l
 Glucose 0,5 g/l
 Eau distillé 1000 ml (1L)
l’image nom
balance

la boite à pétri

Eprouvette graduée

bec bunsen

l’autoclave

spatule
 incubateur

 matériels

Erlen

1. préparation du milieu :
à l'aide d'une balance et une spatule on mesure les réactifs,
ensuiteonon les mélange dans un erlen,, et chauffe jusqu'à ébullition, après on
ferme l'erlen avec le coton et un papier aluminium, on met le milieu de culture
dans l'autoclave pour la stérilisation durant (20min) ; afin d'une part de
maitriser le microorganisme introduit dans le milieu l'étude, et d'autre part
d'éviter la contamination du milieu extérieure.
Quand l'autoclave prend fin on ouvre l'erlen dans un périmètre sté stérile, on passe
l’ouverture du l’erlen à la bec bunsen et d’autre part on laisse la boite à pétri
entre ouverte, ensuite on verse le milieu de culture dans la boite à pétri et on
repasse l’ouverture de l’erlen pour une deuxième fois à la bec bunsen (on
flamber
mber a chaque fois), et on ferme l’erlen, et on refait cette l’opération pour
tout les boites à pétri.
On laisse les boites refroidir à côté du bec bunsen et après on le met dans
l’incubateur.
 2eme séance

1. l’objectif : mettre en évidence la présence de micro organisme dans la

boite à pétri main lavée et l’autre main non lavée
2. les étapes de la mise en évidence des micro-organisme :
 premièrement on fait nettoyée les paillasse par l’eau de javel, on allumé le
bec bunsen à chaleur sèche qui est efficace pour la stérilisation
 deuxièmement ; il fait surtout disposé la boite à pétri qui est déjà divisé
dans la 1er séance en deux partie une ML et l’autre MNL dans un périmètre
stérile
 troisièmement avec notre main non lavée, dans ma boite à pétri , on a
touché la surface du milieu nutritif gélosé et l’opération sera répétée avec
la main lavée avec le savon
 Et finalement on a disposé les boites dans l’incubateur à 35°C durant 24
heures.

3éme séance :la méthode des cadrans

1-

l’objectif : on va essayer de purifier la souche par la méthode des cadrans ,qui

permet de séparer les bactéries d’un échantillon pour l’objectif d’obtenir à la fin
des colonies différentes , c'est-à-dire des souches bien séparées .
La méthode des cadrans consiste à diviser la boite de pétri en 3 parties à fin
d’obtenir 3 cadrans de 50% , 25%,25% .

Ensuite, on utilise une petite quantité d’inoculum puis on étale avec l’étaloire
,et on retourne la boîte à fin d’étaler les bactèries sur les autres cadrans, sauf
que les stries doivent être serrèes et surtout la lance doît être flambeé entre
chaque cadran pour obtenir des meilleures resultats .
 2éme étape :technique de numeration

L’objectif :technique de numeration consiste de déterminer le nombre de

micro-organisme de la solution mère dans un milieu de culture .cette méthode
necessite un ou plusieurs d’illutions .

Matériel :
-un tube contenant 9ml de diluant (eau physiologique ) .
-5 pipettes stétiles de 1ml .
–un votex( pour effectuer l’agitation)
Principe :

1- Dillution de la buspursion microbienne du dans l’eau physiologique stérile

de manière àobtenue les dilutions 10-1 ,10-2 ,10-3 ,10-‘ .
2- Après avoir prèléver la suspension microbienne ,on agite ensuite à l’aide
d’un vortex pendant 10 secondes .
3- ouvrir et flammer l’ouverture du tube .
4- prélever 1ml de suspension à l’aide de la pipette stèrile .
5- flamber et refermer le tube .
6- flamber et refermer le tube .

Rèsultat : Après la réalisation d’incubation ,cette méthode consiste à compte le

nombre de colonnies dans chaque boîte à petri