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REACTIFS BIOLABO AMYLASE

www.biolabo.fr
Méthode E-PNPG7
FABRICANT :
BIOLABO SA, Réactif pour le dosage quantitatif de l’ -amylase
02160, Maizy, France [EC 3.2.1.1] dans le sérum ou les urines humaines

REF 80023 R1 20 x 3 mL
REF 80123 R1 8 x 20 mL
REF 80223 R1 10 x 100 mL

CODE CNQ : WT

|
SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES
Tel : (33) 03 23 25 15 50
USAGE IN VITRO
Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1) (2) PRECAUTIONS


L’activité -amylase dans le sérum est fréquemment mesurée dans le Les réactifs BIOLABO sont destinés à du personnel qualifié, pour un
diagnostic de pancréatite aïgue. Dans ce cas, l’activité -amylase usage in vitro.
commence à augmenter dans les 2 à 12 h qui suivent la crise et atteint un • Utiliser des équipements de protection (blouse, gants, lunettes). Ne pas
pic dans les 12 à 72 h après l’attaque. L’augmentation de l’activité pipetter avec la bouche.
-amylase dans le sérum est également observée dans d’autres maladies • En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment à
non pancréatiques (atteinte abdominale, maladie du tractus biliaire, l’eau et consulter un médecin.
cétoacidose diabétique, dysfonctionnement glomérulaire sévère, désordre • Les réactifs contiennent de l’azide de sodium (concentration < 0,1%) qui
des glandes salivaires…). La détermination des isoenzymes S (salivaire) peut réagir avec les métaux tel que le cuivre ou le plomb des
et P (pancréatique) augmente la spécificité et permet d’orienter le canalisations.
diagnostic. La spécificité et la sensibilité diagnostique de l’augmentation • La fiche de données de sécurité peut être obtenue sur simple demande.
de l’activité -amylase dans les urines restent discutées. Le rapport • Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
clairance rénale de l’amylase/clairance rénal de la créatinine est Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen comme potentiellement
également utilisé dans un but diagnostique. infectieux. Respecter la législation en vigueur.

PRINCIPE (4) PREPARATION DES REACTIFS


Différentes méthodes sont disponibles pour mesurer l’activité -amylase Après ouverture, ajouter sans délai la quantité d'eau déminéralisée
dans le sérum (méthodes amyloclastiques, méthodes saccharogéni- indiquée sur l'étiquette. Eviter la contamination par l'amylase salivaire.
ques). Comparativement à ces méthodes, la méthode E-PNPG7 est plus Mélanger doucement et attendre la dissolution complète avant d’utiliser le
performante en terme de linéarité, sensibilité et exactitude. Le schéma réactif (environ 2 minutes).
réactionnel est le suivant : REF 80023 : Utiliser un objet non coupant (pointe de spatule) pour
soulever la capsule aluminium et la déchirer.
1) 5 E-PNPG7 + 5 H2O
-amylase STABILITE ET CONSERVATION

E-G3 + 1 pNP-G4 + 2 E-G4 + 2 pNPG3 + 2 E-G5 + 2 pNPG2 Stocker à 2-8°C.


• Avant ouverture, le réactif est stable jusqu'à la date de péremption
indiquée sur l’étiquette.
2) 1 pNP-G4 + 2 pNPG3 + 2 pNPG2 + 14 H2O • Le réactif de travail est stable au moins 3 mois, stocké à 2-8°C et à
l’abri de la lumière.
-glucosidase
Ne pas utiliser le réactif s’il est trouble ou si l’absorbance mesurée à
405 nm est > 0,600.
5 pNP + 14 G Ce coffret peut voyager 1 semaine à température ambiante.
où : E = Ethylidène, pNP = Paranitrophenol, G = Glucose
PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (1) (2)
La vitesse de formation du pNP, directement proportionnelle à l’activité -
amylase dans le spécimen, est mesurée à 405 nm. Sérum non hémolysé ou plasma hépariné :
L’activité -amylase est stable dans le sérum/plasma :
REACTIFS • au moins 7 jours à température ambiante.
• 1 mois à 2-8° C.
E-PNPG7 1,1 mmol/L
Urines (alcalinisées avant stockage).
-Glucosidase 1500 UI/L
L’activité -amylase est stable 7 jours à 2-8° C dans les urines.
NaCl 51 mmol/L
Si le transport des urines jusqu’au laboratoire est nécessaire, ajouter un
Tampon pH 7,0 à 20° C
conservateur comme le merthiolate (thimérozal) 0,24mM ou 0,1 g/L.
Conservateur
INTERFERENCES (3)
Hémoglobine : pas d’interférence jusqu’à 5,22 g/L
Bilirubine libre : pas d’interférence jusqu’à 155 mg/L (265 Lmol/L/L)
Bilirubine conjuguée : pas d’interférence jusqu’à 167 mg/L (286 Lmol/L)
Lipémie : pas d’interférence de la lipémie mesurée en tant
qu’absorbance à 630 nm jusqu’à 1,18 Abs.

Young D.S. a publié une liste des substances interférant avec le dosage.

Version : FT 80023 20 02 2007


REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)
1. Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales. Ramener le réactif et les spécimens à température ambiante.
2. Sérums de contrôle normaux et pathologiques Introduire dans une cuve de lecture de 1 cm de trajet optique :
3. Eau déminéralisée pour la reconstitution du réactif.
Réactif 1 mL
CALIBRATION
Laisser la température s'équilibrer à 37° C (30° C) puis ajouter :
La validité des résultats dépend de l’exactitude de la calibration de
l’instrument, du juste décompte du temps, du respect du rapport volume Spécimen 25 LL
réactif/volume spécimen et du contrôle de la température.
Il est recommandé d’utiliser le facteur théorique (§ CALCUL) ou Mélanger. Après 1 minute, enregistrer l'absorbance initiale à 405 nm puis toutes
BIOLABO-Multicalibrator REF 95015 ou tout calibrant raccordé sur une les minutes pendant 3 minutes.
méthode ou un matériau de référence. Calculer la moyenne des variations d'absorbance par minute ( Abs/min).

CONTRÔLE DE QUALITE CODE CNQ : WT Remarques :


• BIOLABO EXATROL-N (valeurs normales) REF 95010. Des procédures spécifiques sont disponibles pour les analyseurs
automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.
• BIOLABO EXATROL-P (valeurs pathologiques) REF 95011.
• Tout autre sérum de contrôle titré pour cette méthode.
CALCUL
• Programme externe de contrôle de la qualité.
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants : Le résultat est déterminé d’après la formule suivante :
• Au moins un contrôle par série.
• Au moins un contrôle par 24 heures. Avec facteur théorique :
• Changement de flacon de réactif.
• Après opération de maintenance sur l’analyseur. UI/L = ( Abs/min) x 5140
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de
confiance, appliquer les actions suivantes :
Lkat/L = UI/L
1. Répéter l’opération en utilisant le même contrôle.
60
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, préparer un sérum
de contrôle fraîchement reconstitué et répéter le test.
Avec multicalibrateur sérique :
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, vérifier les
paramètres de l’analyse : longueur d’onde, température, volume ( Abs/min) Dosage x Concentration du Calibrant
Activité -amylase =
spécimen/volume réactif, temps de mesure et facteur de calibration. ( Abs/min) Calibrant
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
flacon de réactif et répéter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le service
technique BIOLABO ou le revendeur local. REFERENCES
INTERVALLES DE REFERENCE (1) (1) TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
W.B. Saunders (1999) p. 689-698, 1284, 1286.
rd
Sérum (37° C) -amylase (UI/L) -amylase (@Kat/L) (2) Clinical Guide to Laboratory Test, 3 Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 46-49.
(3) YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p. 3-
22-80 [0,38-1,36] 43 to 3-46
(4) FOO YA and Brosalki SB, Ann. Clin. Biochem.(1986), 23, 624-637
Urines (37° C) 24-408 IU/24 h [0,41-6,94]/24 h (5) National Committee for Clinical Laboratory Standards. User evaluation of
Il est recommandé à chaque laboratoire de définir ses propres intervalles Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. NCCLS, 1984, NCCLS
de référence pour la population concernée. Publication EP5-T.

PERFORMANCES (5) Made in France


Intra-série Taux normal Taux moyen Inter-série Taux normal Taux élevé
N = 40 N = 40 Version : FT 80023 20 02 2007
Moyenne UI/L 80,3 185 Moyenne UI/L 87,5 462
S.D. UI/L 3,4 4,6 S.D.UI/L 3,5 16,8
C.V. % 4,3 2,5 C.V. % 3,95 3,6
Limite de détection : environ 10 UI/L (0,2 LKat/L)
Sensibilité pour 1 UI/L : 0,195 mAbs/min
Comparaison avec réactif du commerce:
y = 0,9987 x – 1,8 r = 0,9805

LIMITE DE LINEARITE
La réaction est linéaire jusqu’à 2000 UI/L (34 LKat/L).
Si Abs./min > 0,390, diluer le spécimen avec une solution NaCl à 9 g/L
et refaire le dosage en tenant compte de la dilution dans le calcul du
résultat. La limite de linéarité dépend du rapport de dilution
spécimen/réactif.

Fabricant Date de péremption IVD Usage »in vitro« Température de conservation REF Référence du produit Consulter la notice LOT Numéro de lot

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