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REACTIFS BIOLABO Isoenzyme CK-MB

www.biolabo.fr
Méthode d’immunoinhibition
FABRICANT :
BIOLABO SA, Réactif pour le dosage quantitatif de l’activité de l’isoenzyme
02160, Maizy, France CK-MB (CK-2) de la Créatine Kinase [EC 2.7.3.2] dans le sérum humain

REF 97217 R1 10 x 3 mL R2 1 x 30 mL

REF 97317 R1 8 x 20 mL R2 8 x 20 mL

CODE CNQ : MX

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SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES
Tel : (33) 03 23 25 15 50
IVD USAGE IN VITRO
Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1) PRECAUTIONS


La créatine kinase est une enzyme dimérique composée de deux Les réactifs BIOLABO sont destinés à du personnel qualifié, pour un
sous-unités. La sous-unité M et la sous unité B. Ces sous-unités sont usage in vitro.
associées pour former 3 isoenzymes distinctes : CK BB (CK-1), CK MB • Utiliser des équipements de protection (blouse, gants, lunettes). Ne
(CK-2) et CK-MM (CK-3). pas pipetter avec la bouche.
La CK-MM est la forme prédominante dans le muscle squelettique. La • En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment à
CK-BB est concentrée dans le cerveau et les muscles lisses. La CK-MB l’eau et consulter un médecin.
est présente en forte concentration dans le myocarde (l’activité CK-MB y • Les réactifs contiennent de l’azide de sodium (concentration < 0,1%)
représente 10 à 20 % de l’activité CK totale) et dans une moindre qui peut réagir avec les métaux tel que le cuivre ou le plomb des
mesure dans le muscle squelettique (l’activité CK-MB y représente canalisations. Rincer abondamment.
moins de 2 % de l’activité CK totale). • La fiche de données de sécurité peut être obtenue sur simple
En l’absence de pathologie, la majorité de l’activité CK dans le sérum demande.
est due à la CK-MM. L’infarctus du myocarde s’accompagne d’une • Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
augmentation transitoire du taux de CK-MB dans le sérum. Celui ci Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen comme potentiellement
augmente dans les 4 à 6 h suivant le début de la crise, puis atteint un infectieux. Respecter la législation en vigueur.
pic dans les 12 à 24 h et revient à une valeur normale dans les 48 h.
PREPARATION DES REACTIFS
PRINCIPE (4) (5)
REF 97217 : verser sans délai 3 mL du flacon R2 (Tampon) dans un
Le réactif CK-NAC modifié contient un anticorps polyclonal (spécifique flacon R1 (Enzymes-Substrat).
du monomère CK-M) qui inhibe donc la totalité de l’activité CK-MM et la REF 97317 : verser sans délai le contenu d'un flacon R1 (Enzymes-
moitié de l’activité CK-MB. Substrat), dans un flacon R2 (Tampon).
Seule l’activité de la sous-unité B non-inhibée, représentant la moitié de Mélanger doucement et attendre la dissolution complète avant d’utiliser
l’activité CK-MB, est mesurée. Cette méthode prend en compte que le réactif (environ 2 minutes).
l'activité CK-BB dans le spécimen est négligeable. Flacon R1 : Utiliser un objet non coupant pour enlever la capsule.
Le schéma réactionnel est le suivant :
SOUS-UNITE B de la CK-MB
STABILITE ET CONSERVATION
1) Créatine phosphate + Mg-ADP Créatine + ATP
Stocker à 2-8°C, à l’abri de la lumière.
HK • Avant ouverture :
2) D-Glucose + ATP ADP + G-6-Phosphate Le réactif est stable jusqu'à la date de péremption indiquée sur
l’étiquette.
G6-PDH • Après ouverture :
3) G-6-Phosphate + NADP+ 6-Phosphogluconate + NADPH + H+ Le contenu du flacon R2 est stable au moins 3 mois en l’absence de
contamination (bien refermer et stocker à 2-8°C)
Le réactif de travail est stable au moins 7 jours en l’absence de
L’augmentation de l’absorbance due à la conversion du NADP+ en contamination.
NADPH mesurée à 340 nm est proportionelle à l’activité CK-MB dans le
Ne pas utiliser le réactif s’il est trouble ou si le blanc réactif mesuré
spécimen.
à 340 nm < 0,700.
Ce coffret peut voyager au moins 1 semaine à température ambiante.
COMPOSITION DU REACTIF DE TRAVAIL
AMP 5 mmol/L D-Glucose 20 mmol/L PREPARATION DU SPECIMEN (1) (2)
NADP 2 mmol/L N-Acétyl-L-cystéine 20 mmol/L Sérum non hémolysé. Conserver à 2-8°C dans un récipient hermétique
(NAC) pour prévenir les pertes en CO2.
AP5A 10 Cmol/L Hexokinase (HK) > 3000 UI/L Le plasma n’est pas recommandé, les anticoagulants comme
l’héparine, l’EDTA, le citrate ou le fluorure interférant avec le dosage.
EDTA 2 mmol/L G-6-PDH > 2500 UI/L
Dans les cas de suspicion d’infarctus du myocarde, il est recommandé
Mg2+ 10 mmol/L Imidazole Acétate 100 mmol/L de prélever le patient après 6 h, 12 h et 24 h ; le nombre minimum de
ADP 2 mmol/L Créatine Phosphate 30 mmol/L prélèvements requis est de deux : 12 h et 24 h après l’apparition des
Anticorps polyclonal Anti CK-M humaine : Quantité pour inhiber la CK-M symptômes.
jusqu'à 2000 U/L à +37°C La CK-MB est stable dans le sérum :
pH 6,8 + 0.1 à 30°C • 4 à 8 h à température ambiante.
Contient aussi des stabilisants et excipients. • 1 à 2 jours à 2-8°C.
• 1 mois à –20°C.

Version : FT 97317 28 10 2004


INTERFERENCES (1) (3) (4) (5) LIMITE DE LINEARITE
Hémolyse : interférence de l’adénylate kinase et autres intermédiaires La réaction est linéaire jusqu’à 1000 UI/L.
de la réaction comme l’ATP (adénosine tri-phosphate) ou le glucose-6- Si Abs/min > 0,150, diluer le spécimen avec une solution NaCl à 9 g/L
Phosphate (G6P). et refaire le dosage en tenant compte de la dilution dans le calcul du
CK-BB : peut interférer avec le test (rarement présente dans le sérum). résultat. La limite de linéarité dépend du rapport de dilution
Isoenzymes atypiques : interférence possible (par exemple un spécimen/réactif.
complexe CK-BB et immunoglobuline G, plus fréquent chez la femme
âgée). Cependant la présence de ces isoenzymes atypiques ne
diminue en rien la valeur du test car leurs taux restent stables alors que MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)
dans l’infarctus du myocarde, la valeur de la CK-MB augmente puis Ramener les réactifs et spécimens à température ambiante.
revient rapidement à la normale après 48 h.
Introduire dans une cuve de lecture de 1 cm de trajet optique :
Young D.S. a publié une liste des substances interférant avec le dosage.
Réactif 1 mL

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES Laisser la température s'équilibrer à 37°C puis ajouter :


1. Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales.
Spécimen 50 CL
2. Sérums de contrôle normaux et pathologiques.
Mélanger. Après 5 minutes, lire l'absorbance à 340 nm toutes les minutes
pendant 5 minutes.
CALIBRATION Calculer la moyenne des variations d'absorbance par minute ( Abs./min.).
La validité des résultats dépend de l’exactitude de la calibration de
l’instrument, du juste décompte du temps, du respect du rapport Remarques : Des procédures spécifiques sont disponibles pour les
volume réactif/volume spécimen et du contrôle de la température. analyseurs automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.
Il est recommandé d’utiliser le facteur théorique (§ CALCUL) ou
d’utiliser un calibrateur humain raccordé sur une solution ou une CALCUL
méthode de référence.
Le résultat est déterminé d’après la formue de calcul suivante :

CONTRÔLE DE QUALITE CODE CNQ : MX


• Tout sérum de contrôle humain titré pour cette méthode. Activité CK-MB :
• Programme externe de contrôle de la qualité.
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants : Ul/L = ( Abs/min) x 6667
• Au moins un contrôle par série.
• Au moins un contrôle par 24 heures.
• Changement de flacon de réactif. IU/L
GKat/L =
• Après opérations de maintenance sur l’analyseur. 60
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de
confiance, appliquer les actions suivantes : Le facteur de calcul tient compte du fait que l’activité CK-MB est égale
1. Répéter le test en utilisant le même contrôle. à 2 fois l’activité CK-B.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, préparer un
sérum de contrôle fraîchement reconstitué et répéter le test.
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, vérifier les Avec calibrant humain :
paramètres de l’analyse : longueur d’onde, température, volume
spécimen/volume réactif, temps de mesure et facteur de ( Abs/min) Dosage
calibration. Activité CK MB = x Concentration du Calibrant
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre ( Abs/min) Calibrant
flacon de réactif et répéter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le
service technique BIOLABO ou le revendeur local.
REFERENCES
INTERVALLES DE REFERENCE (2) (1) TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R.
Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 664-667, 1185-1190.
rd
30°C 37°C (2) Clinical Guide to Laboratory Test, 3 Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 182-186.
th
(3) YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4 Ed. (1995) p.
CK-MB < 16 UI/L < 25 UI/L 3-189 à 3-190
CK-MB/CK Un ratio de CK-MB entre 6 et 25% est significatif d'une nécrose (4) Mattenheimer H. CK MB Methods and clinical significance ; Proceedings of
(%) tissulaire du muscle cardiaque. the CK MB symposium, Philadelphia, 1981 ; 51-57
En cas de suspicion d'un infarctus du myocarde, les valeurs de (5) Stein W. CK MB methods and clinical significance; Proceedings of the CK
la CK-MB augmenteront et retourneront à la normal dans les MB symposium, Philadelphia, 1981 ; 61-74.
48 heures. (6) National Committee for Clinical Laboratory Standards. User evaluation of
Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. NCCLS, 1984, NCCLS
Il est recommandé à chaque laboratoire de définir ses propres Publication EP5-T.
intervalles de références pour la population concernée.
Made in France
PERFORMANCES (1) (6)
Intra-série Taux Taux élevé Inter-série Taux Taux élevé Version : FT 97317 28 10 2004
N = 20 normal N = 20 normal
Moyenne UI/L 37 156 Moyenne UI/L 37 156
S.D. UI/L 1,7 2,5 S.D.UI/L 1,3 3,3
C.V. % 4,6 1,6 C.V. % 3,5 2,1
Limite de détection : environ 5 UI/L.
Sensibilité pour 6,7 UI/L : environ 0,001 Abs à 340 nm.
Spécificité : Pour une activité CK totale de 1000 UI/L,
l’inhibition de l’activité CK-MM était de 99,5%.
Comparaison avec réactif du commerce :
y = 1,02 x + 5 r = 0,995

Fabricant Date de péremption IVD Usage »in vitro« Température de conservation REF Référence du produit Consulter la notice LOT Numéro de lot

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