Extracción de ADN de banana (nivel secundario)

Introducción
Todos los organismos vivos están formados por células: los unicelulares, por 1 sola célula, y
los multicelulares, más complejos, por miles a millones de ellas. En el núcleo de cada célula
se encuentra una molécula clave para la existencia de la vida: el ADN. Es una macromolécula
orgánica, compuesta por millones de compuestos llamados nucléotidos, cada uno formado
por un glúcido, una base nitrogenada y un grupo fosfato.
El ADN contiene toda la información necesaria para la síntesis de las proteínas de cada célula
del organismo, determinando su estructura, sus características, y su función. El ADN es la
clave para entender cómo se comportan las células, y cómo éstas afectan al organismo del
que son parte.
Como el ADN normalmente está dentro del núcleo de una célula, no podemos verlo a simple
vista. En este experimento, realizaremos una serie de procedimientos para extraer el ADN de
muchas células de banana a fin de poder verlo con nuestros propios ojos.

Materiales y reactivos
✓ Tubo de ensayo ✓ Mortero
✓ Vasos de precipitado ✓ 1 banana
✓ Varillas de vidrio ✓ Agua
✓ Hielo y recipiente de Telgopor ✓ Alcohol etílico 96% (frío, en hielo)
✓ Embudo y algodón ✓ Detergente
✓ Colador fino ✓ NaCl

Procedimientos
1. Preparación de solución salina-jabonosa. Preparamos una solución salina-
jabonosa compuesta con 100 ml de agua, 10 ml de detergente (1 cucharada) y 13 gr
de NaCl (una cucharada).
2. Preparación de la fruta. Pelamos la banana y cortamos en cubos pequeños, luego
la trituramos en un mortero.
3. Adición de la solución de sal y detergente a la fruta. En el mortero con la fruta
triturada vertemos la solución salina-jabonosa y continuamos el proceso de romper
las frutas. Opcionalmente, podemos colocar el preparado en un baño de María a 37ºC
durante 15 minutos para facilitar la extracción.
4. Separación del material sólido, proteínas y lípidos. La mezcla anterior se cuela y
se filtra para quitarle los sólidos, proteínas y lípidos a la solución acuosa del ADN.
 Pasamos por un colador o papel de filtro para retirar el grueso de pulpa de fruta y
luego, a través de la gasa o algodón, hasta obtener 5 ml del líquido filtrado en un tubo
de ensayo o 50 ml en un frasco de precipitado.
5. Precipitación del ADN por acción del alcohol. Sobre el jugo de fruta, vertemos
etanol frío lentamente por las paredes del tubo de ensayo. Dejamos reposar unos
minutos. Debe aparecer una capa blanquecina gelatinosa.
Si introducimos una varilla de vidrio o un palito de madera, con movimientos circulares
podremos recuperar el ADN enrollado en la varilla.

Explicación de las etapas de la extracción de ADN

Ruptura de tejidos, paredes y membranas celulares
Las moléculas de detergente ayudan a romper las membranas celulares y liberar el ADN del
núcleo. Mediante fricción con el mortero o por el licuado del material, se rompen las uniones
entre las células y la pared celular. Esta homogeneización facilita el efecto de lisis o ruptura
que ayuda a liberar el material genético.
El detergente ayuda a romper las membranas celulares, que están compuestas por lípidos.
Eliminación de proteínas y lípidos
Los componentes no solubles como el material fibroso y las proteínas se separan del ADN
por filtración.
Precipitación del ADN
Luego de eliminar los lípidos y proteínas, los grupos fosfato del ADN están cargados
negativamente y son polares. El ADN se disuelve en soluciones acuosas, pero es insoluble
en alcohol.
La adición de etanol y altas concentraciones de iones sodio que se unen a los grupos fosfato,
reduce las fuerzas repulsivas entre las cadenas y permite que el ADN se pliegue sobre sí
mismo, haciéndolo insoluble. Las moléculas de ADN insoluble tienden a agruparse. De esta
forma precipita y forma una malla filamentosa blanquecina que contienen proteínas y otros
materiales.

Preguntas
¿Por qué es que, si el ADN es una molécula invisible al ojo humano, logramos verla?

Seguridad
Los desechos no requieren cuidados especiales.