Universidad de los Andes

Departamento de Ciencias Biológicas

Laboratorio de genética (BIOL2201)

Informe 4. Caracterización cromatografía de Mutantes de ojos de Drosophila

melanogaster

Resultados:

Figura 1. 1.Hembra silvestre. 2. Macho silvestre. 3. Hembra White. 4. Macho White. 5.

Hembra white apricot. 6. Macho white apricot. 7. Hembra silvestre. 8. Macho silvestre. 9.
Hembra vermillion. 10.Macho vermillion. 11. Hembra Sepia. 12.Macho Sepia. 13.Hembra
Silvestre. 14.Macho Silvestre.
Tabla 1
Individuos
Pigmento Color 1 2 3 4 5 6 7
H M H M H M H M H M H M H M
Isosepiapterina Amarillo - - - - - - - - - - - - - -
(arriba)
Biopterina Azul - - - - - - - - - - - - - -
oscuro
2-amino-4- Azul claro + + + + + + + + + + +++ +++ + +
hydroxipterina
Sepiapterina Amarillo - - + + - - + + + + ++ ++ + +
(SEP) (abajo)
Xantopterina Verde- + + + + + + + + + + + + + +
(XAN) Azul
Isoxantopterina(IS Violeta- ++ ++ + + + + + + + + - - + +
OX) Azul
Drosopterina Rojizo - - ++ ++ + + + + ++ ++ +++ +++ + +
(DROS)
 Tabla 2
Las distancias presentes en esta tabla se tomaron de la banda 11 (hembra sepia)

Pigmento Color Distancia A Distancia B Valor Rf

Isosepiepterina Amarillo _ 9 _
(Arriba)
Biopterina Azul ++ _ 9 _

2-amino-4-hydroxipterina Azul + 3.7 9 0.41

Sepiapterina Amarillo 1.6 9 0.18

(abajo)
Xantopterina Verde- Azul 2.5 9 0.28

Isoxantopterina Violeta-Azul 0 9 0

Drosopterina Naranja 0.6 9 0.07

ANALISIS DE RESULTADOS

De acuerdo con los resultados obtenidos (figura 1 y tabla 1), en las moscas silvestres
(individuos 1,4 y 7) no se detectaron las 7 pteridinas. En los tres casos hubo ausencia
de isosepiapterina y biopterina, y solo en los individuos 1 la sepiapterina (SEP) y
drosopterina (DROS) estuvieron ausentes.

En cuanto a los mutantes estudiados, no son muy significativas las diferencias de

corrido para cada pigmento entre la mayoría de mutantes y moscas wild type puesto
que fue una separación deficiente. Sin embargo, hay algunas excepciones: los
individuos 6 (mutante sepia) presentaron cantidades excesivas de los pigmentos DROS
y 2-amino-4-hydroxipterina, aumento de SEP y ausencia de isoxantopterina (ISOX).
Los individuos 5 (vermillion), después de sepia, presentan la mayor cantidad de
pigmentos, en los cuales se identifican 2-amino-4-hydroxipterina, SEP, XAN, ISOX y
DROS, lo cual explica el color rojo brillante de este mutante. En el caso de los individuos
2 (white) aunque presentan los mismos pigmentos que vermillion, los resultados no
corresponden a los esperado y están asociados a errores que se pudieron presentar
en la práctica.
Por otro lado, los resultados no reflejan una diferencia relevante cualitativamente
cuando se analizan las distinciones de pigmentos entre individuos de distinto sexo y
con la misma mutación. Lo anterior tiene sentido, teniendo en cuenta que tanto
machos como hembras con la misma mutación presentan una expresión genética muy
similar y por tanto presentan el mismo color de ojos.

Figura 2. Diagrama del método de cromatografía de Hadorn y Mitchell (Tomado de

Thiemann, 2001)

A pesar de lo descrito anteriormente, los resultados obtenidos deberían corresponder

a lo observado en la figura 2; sin embargo, como se evidencia en la figura 1 el corrido
de los pigmentos no se dio correctamente y por tanto los resultados de los valores Rf
no son acertados. Lo anterior puede asociarse a diversos errores que pudieron
presentarse durante el procedimiento:

En primer lugar, se considera que la cantidad de muestra utilizada quizá no fue

suficiente para que la separación de pigmentos se llevara a cabo. Del mismo modo, al
trabajar con cantidades en el orden de nano (10-9), malas prácticas de esterilidad como
usar el mismo macerador para distintos mutantes pueden afectar considerablemente
los resultados y probablemente así es cómo fue posible ver pigmentos en mutantes
white. Así mismo, otro factor relacionado con la metodología y que pudo afectar los
resultados fue usar demasiado lápiz (grafito) para hacer visibles las marcas requeridas
en el papel de filtro. En cuanto a esto, Hadorn y Mitchell (1951) propusieron realizar
líneas claras de lápiz.
Se descartaron fallas en el solvente utilizado ya que al menos una de las muestras si
presentó una separación considerable de los pigmentos; sin embargo, los resultados
siguen siendo erróneos puesto que hay presencia de moléculas que en mutantes sepia
no deberían estar presentes (pigmento DROS). Para lo anterior, puede que la muestra
se haya contaminado con los pigmentos de otros mutantes pero dada la cantidad
excesiva de DROS quizá la cepa no es un mutante homocigoto. A pesar de que el alelo
sepia es recesivo (Anxolabéhère, 1976), las moscas podrían ser heterocigotas con
dominancia incompleta por lo que se observó un fenotipo intermedio similar a sepia.

Finalmente, tras considerar las fallas en la práctica realizada, para reducir el margen
de error relacionado a errores sistemáticos sugerimos (basados en el método de
cromatografía de Hardorn y Mitchell (1951)) ser cuidadosos con la esterilidad del
macerador para cada mutante, realizar líneas claras de lápiz en el papel de filtro, hervir
los animales durante 1 minuto en agua destilada para coagular proteínas y mejorar la
resolución de la posterior cromatografía y utilizar papel encerado debajo del papel de
filtro para evitar pérdida de material durante el proceso de maceración.

Referencias

Thiemann, T.(2001). Genotype to phenotype: Investigating eye color of mutations

using cromatography. Truman State University.
Hadorn, E., & Mitchell, H. K. (1951). Properties of mutants of Drosophila
melanogaster and changes during development as revealed by paper
chromatography. Proceedings of the National Academy of Sciences of the
United States of America, 37(10), 650.
Anxolabéhère, D. (1976). El dominio de la heterosis y la selección dependiente de la
frecuencia en Drosophila melanogaster en el locus sepia. Evolución, 523-534.