Métodos espectrométricos e

análise orgânica

Prof. Dr. Daniela Aparecida Chagas de Paula

Doutora em Ciências
Área de concentração Produtos Naturais e Sintéticos
Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto – USP
University of Strathclyde

Alfenas – MG
2017
Dia Conteúdo
04/04 Introdução
05/04 Espectroscopia no Ultravioleta (UV)
11/04 Espectroscopia no Ultravioleta (UV)
12/04 Exercícios
18/04 Exercícios
19/04 Exercícios
25/04 Espectroscopia no Infravermelho (IV)
26/04 Espectroscopia no Infravermelho (IV)
02/05 Exercícios
03/05 Exercícios
09/05 Avaliação-1
10/05 Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN)
16/05 Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN)
17/05 Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN)
23/05 Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN)
24/05 Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN)
30/05 Exercícios
31/05 Exercícios
06/06 Exercícios
07/06 Avaliação-2
13/06 Espectrometria de massas (EM)
14/06 Espectrometria de massas (EM)
20/06 Espectrometria de massas (EM)
21/06 Exercícios
27/06 Exercícios
28/06 Exercícios
05/07 Avaliação 3
12/07 Prova especial
 11/04
Experimental
Análise elementar qualitativa
18/04 Análise elementar qualitativa
25/04 Teste de solubilidade e determinação de constantes físicas
02/05 Teste de solubilidade e determinação de constantes físicas
09/05 Métodos de separação (extração com solventes
Quimicamente Ativos)
16/05 Métodos de separação (extração com solventes
Quimicamente Ativos)
23/05 Prova experimental
30/05 Cromatografia
06/06 Cromatografia em coluna
13/06 Cromatografia em HPLC-UV-DAD (parte da turma)
20/06 Cromatografia em HPLC-UV-DAD (outra parte da turma)
27/06 Teste de funções
04/07 Teste de funções
11/07 Análise de espectros
18/07 Análise de espectros
25/07 Prova experimental

Uma das práticas será sorteada para avaliação no dia da prova experimental.
 Avaliações
• Todas as avaliações terão o mesmo peso e a
matéria é cumulativa.
• O controle de frequência será realizado e o
aluno que tiver mais que 25 % de falta será
considerado reprovado.
• A prova especial poderá substituir qualquer
prova (teórica ou prática)
 Métodos espectrométricos e análise
orgânica

Substância desconhecida

Métodos espectrométricos Detecção de funções

Análise elementar qualitativa Constantes físicas

Cromatografia
 Métodos espectrométricos e análise
orgânica

Análise preliminar
•Homogênea ou não; estado físico; cor; cheiro, etc.
•Pureza  CCD; CG; HPLC à PF (PE não é representativo
para a pureza)
 Cromatografia
Em coluna CCD

Substâncias
 Métodos espectrométricos e análise
orgânica
•Substâncias já descritas uso de padrõescomparação de dados
•Substâncias “inéditas” purificaçãosubstância puradados
•Misturas técnicas acopladas (CG-EM, CL-EM, ...)
EM

Subst. separadas pela

cromatografia

Banco de
Amostra complexa
dados
 Determinação da fórmula molecular
• Espectrometria de massas (EM)
•Análise elementar  “via úmida”  qualitativa (Cl, Br, I, S, N)
 combustão  quantitativa (% de C,H,N,S)
• Métodos físicos para a determinação estrutural:
 Espectrometria de massas (EM)
 Espectroscopia no infravermelho (IV)
 Espectroscopia no ultravioleta e visível (UV/ Vis)
 Espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN)
 Outros dados (degradação química, derivatização, atividade óptica,
termogravimetria, Raman, difração de raios-X)
Calculo de composição percentual a partir dos dados da
combustão:

CxHyOz + excesso de O2 x CO2 + y/2 H2O

9,83 mg 23,26 mg 9,52 mg
A fórmula empírica expressa a razão numérica mais simples dos elementos, a
qual pode ser multiplicada por um número inteiro para obter a verdadeira
fórmula molecular.

Cálculo da fórmula empírica:

Usando uma amostra de 100g:
64,6% de C = 64,6 g
10,8% de H = 10,8 g
24,6% de O = 24,6 g
100 g

mols de C= 64,6g = 5,38 mol C

12,01 g/mol
mol de H = 10,8 g = 10,7 mol H
1,008 g/mol
mol de O = 24,6 g = 1,54 mol O
16,0 g/mol
Obtemos o seguinte resultado: C5,38H10,7O1,54

Convertendo-se na razão mais simples (dividindo todos por 1,54), obtemos:

C3,49H6,95O1,00 = C3,5H7O1 = C7H14O2
 Indice de deficiência de hidrogênio
IDH
Hidrocarbonetos Saturados
CnH2n+2 FORMULA GERAL
CH4 CH4

CH3CH3 C2H6

CH3CH2CH3 C3H8

CH3CH2CH2CH3 C4H10

CH3CH2CH2CH2CH3 C5H12

CH3 CH3
CH3 CH CH C CH3 C9H20 Compostos ramificados
seguem a mesma fórmula
CH3 CH3
12
Insaturações e ciclizações
-2H
C C C C
H H

H H -4H
C C C C
H H

CH2 CH2
H2C -2H H2C CH2
CH2 H
H2C CH2 H H2C CH2
CH2 CH2

A formação de cada anel ou ligação dupla causa a perda de 2H.

 IDH
Considerações iniciais:
1- Em compostos acíclicos, saturados que contém elementos do grupo V
(N, P, As, Sb, Bi), um hidrogênio deve ser adicionado para cada elemento
do grupo V;
C2H6 C2H7N C2H8N2 C2H9N3
2- Em compostos acíclicos, saturados que contém elementos do grupo VI
(O, S, Se, Te), não muda o número de hidrogênios;
C2H6 C2H6O C2H6O C2H6O
3- Em compostos acíclicos, saturados que contém elementos do grupo
VII (F, Cl, Br, I), um hidrogênio deve ser subtraído para cada elemento do
grupo VII;
C2H6 C2H5F C2H4F2 C2H3F3
Regras básicas para determinar o IDH:
1- Determinar a fórmula do hidrocarboneto saturado e acíclico contendo o mesmo
número de carbonos da substância desconhecida;

• Alcanos CnH2n+2
Cicloalcanos e alquenos  CnH2n
• Alquinos e Cicloalquenos  CnH2n-2

2- Corrija esta fórmula com os elementos não carbônicos. Adicione um H para cada
átomo de elemento do grupo V e subtrair um H para cada elemento do grupo VII;
• O or S -- não modifica o cálculo de H na fórmula
C-H C-O-H
+0 +O

• N or P -- adicione 1 H à fórmula calculada

C-H C-NH2
+1 +N,+H

• F, Cl, Br, I -- subtraia um H da fórmula calculada

-1 C-H
-H,+X
C-X
3- Compare esta fórmula com a fórmula do composto desconhecido. Determine
a diferença de Hs;

4- Divida por 2. Este valor é igual ao número de ligações pi e/ou anéis da

fórmula estrutural da substância desconhecida.

Fórmula geral:
IDH = Carbonos - H - X + N + 1
2 2 2

X=F, Cl, Br,I

 C5H8

C5H12 = ( CnH2n+2 )
C5H8
H4 Índice = 4/2 = 2
Duas insaturações
Existe uma dupla ligação e
um anel neste exemplo.
 H
N
C4H5N

C4H10 = ( CnH2n+2 )
C4H11N Adicione 1 H para N
C 4 H5 N
H6 Índice = 6/2 = 3
Duas duplas ligações e um anel
O índice dá o número de:
• duplas ligações ou
• triplas ligações ou
• anéis na molécula
Um anel e o equivalente às3
triplas ligações tem como
Benzeno índice 4
 Métodos espectrométricos de análise
orgânica

Espectroscopia Espectroscopia
Espectroscopia
no Espectroscopia de ressonância
no ultravioleta
infravermelho de massas (EM) magnética
(UV)
(IV) nuclear (RMN)

massa
grupos grupos nº e tipo de 1H e
molecular e 13C em função da
cromóforos funcionais padrões de
localização e do
frag.
desdobramento de
sinais
 Curvas de absorção no UV
Spectrum at time 17.97 min. Spectrum at time 32.97 min.
?
17.97 min 32.97 min

OH

HO O
R1

R2

OH O
Spectrum300
at time 11.79 min. 250
Spectrum
300
at time 37.70350
min. 400
250 350 400

nm nm
11.79 min 37.70 min

HO

HO
250 300 350 400 250 300 350 400

nm nm
?
 Espectro de IV

C-H (alif.) C=O

C(=O)-O
 Espectro de Massas
m/z 43
m/z 59
43
m/z 87
m/z 73

m/z 87
m/z 71

m/z 43
55
m/z 57

Massa/carga do pico íon-molecular = 130

Que corresponde à fórmula C7H14O2
Espectro de RMN 1H
s d

2H 3H 1H 2H 6H

25
Espectro de RMN 13C

5
2

3 4

1
 Outras
Difração de Raio X ->configuração absoluta

7-epiclusianona* clusianona
 Espectroscopia no UV/Visível

• Uso de pequena quantidade de amostra

•Absorção: Depende da estrutura eletrônica da molécula
quantizada
• Na prática: sistemas conjugados
• Técnica seletiva, não é abrangente
O

HO

HO
 Espectroscopia

RMN IV UV
Frequencia e Energia

λ
 Espectroscopia
Energia

Transições nucleares
Transições eletrônicas -> UV
Transições vibracionais -> IV
Transições de spin -> RMN
 Excitação eletrônica

Electronic LUMO (Lowest Unoccupied MO)

Transition
HOMO (Highest Occupied MO)
 Espectroscopia no UV/Visível
Absorção no:
UV: 200-400 nm
Visível: 400-700 nm substâncias coloridas
OH

HO O
R1

R2 flavonoide
OH O

Licopeno C40H56
Aparelho de espectroscopia na região
do UV/visível
Lei de Lambert-Beer
A = c. l. e
A= absorbância
C = concentração (mol/L)
l = comprimento do tubo (cm)
e=absortividade molar
 Quantificação

0 0.1M 0.2M 0.3M 0.4M 0.5M

 Acompanhar reação
O lactato OH
- + desidrogenase - +
C H3C C OO + NADH + H C H3C HC OO + NAD
piruvato = 340nm lactato
 Espectroscopia no UV
Grupo cromóforo aparte da molécula que absorve no
UV/visível
O O O O

Regras empíricas para previsão do λ máximo de absorção

-Dienos conjugados
-Enonas O

-Derivados do benzeno (Ar-COG – como os ex. acima)

*Influência do solvente (valores de correção), pH
Cálculos pelas regras empíricas
Cálculos pelas regras empíricas
 Espectroscopia no UV
Grupo auxocromo a grupo saturado que quando
ligado ao cromóforo aumenta max e/ou a
intensidade de absorção
- +
H OH O NH2 NH3

max 255 nm 270 nm 287 nm 280 nm 254 nm

 Termos utilizados
Cromóforo – grupos que absorvem radiação eletromagnética na
faixa de trabalho utilizada;
Absorção no UV-visível  cromóforos.
✓ λmax. – comprimento de onda da máxima absorbância
✓ Deslocamentos do λmax:
Hipercrômico
e

Hipsocrômico Batocrômico

Adaptado de
Hipocrômico Crews et al., 1998.

400 Azul Vermelho 800 (nm)

Efeito da conjugação sobre λ max

Regras de Fieser – Khun – sistemas poliênicos (mais de 4

ligações duplas conjugadas)
não segue as tabelas, tem fórmulas apropriada (no quadro)
Determinação estrutural

R 1O

O
N
H
H
R 2O

A B C
tebaina codeina morfina

R1 CH3 CH3 H

R2 CH3 H H
 Determinação estrutural
R1
R2
B
HO O
R3
A
OH
OH O

FLAVONOL R1 R2 R3 BANDA I BANDA II

Galangina H H H 359 258
Canferol H OH H 367 258
Quercetina OH OH H 370 258
Mirecetina OH OH OH 374 258
Exercícios
 Bibliografia
• PAVIA, D.L., LAMPMAN, G.M., KRIZ, G.S.,
VYVYAN, J.R. Introdução à espectroscopia.
Tradução da 4º Edição norte-americana. São
Paulo, Cengage Learning, 2010.
• SILVERSTEIN, R.M., WEBSTER, F.X., KIEMLE,
D.J. Spectrometric Identification of Organic
Compounds. Edições antigas.