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Méthodes de Séparation 2010-2011 Nathalie Younan

Correction Série 1:
Généralités sur la chromatographie
Exercice 1

t0 = tm = 12.5 mm
tR1 = 33.1 mm
tR2 = 70.5mm

a) - Temps de rétention : temps nécessaire pour éluer l’échantillon


L V
t R,i = = R,i
ui FV

- Temps mort : temps nécessaire pour l’élution des solutés non retenus
L Vm
tm = =
um FV

- Temps de rétention net : t Rn,i = t R,i  t m

- Facteur de rétention : rapport des fractions de soluté entre la phase


stationnaire et la phase mobile
q
ki, = i
pi

- Efficacité d’une colonne : elle est donnée par la résolution d’une colonne
t
R= R
w

- Hauteur efficace d’un plateau théorique : rapport entre variance et premier


moment. C’est la longueur de la colonne divisée par le nombre de plateaux
théoriques
L
HETP =
N

- Facteur de séparation : rapport entre les facteurs de rétention de deux


solutés
k2,
= ,  1
k1
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b) Facteur de rétention :

qi
k 'i =
pi
Où qi est la fraction de soluté i retenue dans la phase stationnaire et pi la fraction de
soluté i dans la phase mobile.

1  pi 1  Vm / VR,i VRn,i t Rn,i


D’ où, k 'i = = = =
pi Vm / VR,i Vm tm

1
pi = et qi = 1  pi
t
1 + Rn,i
tm

Donc, p1  0.38 q1  0.62


p2  0.18 q2  0.82

c) Facteur de séparation  :

k ' 2 t R2  t m
= ' =
k 1 t R1  t m

D’ où,  = 2.9

Dans le cas où  = 1, la séparation des deux solutés est impossible. Ils sont élués en
même temps.

d) Résolution R :

t R t t
R= = 2 R2 R1
w w1 + w2

D’où R  1.6

e) Nombre de plateaux théoriques du soluté élué en dernier, soit le soluté 2 :


2
t 
N = 16  R2   94
w  2
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Exercice 2

a) Définition de la résolution chromatographique :

t R 2(t R2  t R1 ) 2(17.63  16.40)


R= = => R = = 1.06
w w1 + w2 1.11 + 1.21

Nombre de plateaux théoriques :


2 2 2
t   16.40   17.63 
N = 16  R  => N = 16   = 3493 et N = 16   = 3397
w  1.11   1.21 

et N moy = 3445

Hauteur équivalente de plateau théorique :


L
HEPT = => HEPT = 8.7.103 cm
N

b) Relation de Purnell :

N   1 k2
'

R= => R est proportionnel à N


4  1 + k2'
R' N' 1.5 N'
= => = => N ' = 6899
R N 1.06 3445

donc L' = N ' * HEPT = 6899*8.7 = 60cm

Temps de rétention de B sur la nouvelle colonne :

L' 60
'
t RB = t RB * '
=> t RB = 17.63* = 35.26 min => temps de rétention doublé !
L 30

Hauteur HEPT pour une résolution 1,5 et une colonne de 30 cm :

L
HEPT ' = = 4.3.103 cm
N'
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Exercice 3

Pour évaluer si la séparation des quatre solutés est réalisable, il faut regarder si les
pics les moins bien résolus en HPLC seront ou non suffisamment résolus à basse
pression.

Pour cela, on calcule les facteurs de séparation entre les différents solutés obtenus en
HPLC :

k ' 2 t R2  t m
= ' =
k 1 t R1  t m

D’ où   = 2.05
 BC = 1.55
 CD = 1.61

La paire de pics la moins bien résolue est BC donc le facteur de séparation critique
est 1.55

Donc, dans la nouvelle colonne, on considère les données suivantes :


 = 1.55
R=1

Pour déterminer si la séparation des solutés est réalisable à basse pression, il faut
évaluer le nombre de plateaux théoriques minimum pour séparer nos solutés B et C.

1.54 + 2.38
k' = = 1.96
2

N min    1  k ' 
R=   
2   + 1  1 + k ' 

  + 1  1 + k 
'
= 2R  = 14
   1  k ' 
N min

N min = 14 2 = 196

Il faut au minimum une colonne à 196 plateaux pour séparer les solutés les moins
résolus B et C. Donc la séparation à basse pression est possible.