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TP de Biochimie 2ème année SNV

Université de Boumerdes
Département de Biologie (5) Biochimie

DETERMINATION DES INDICES DES LIPIDES


Les déterminations seront effectuées sur un corps gras naturel choisis parmi les lipides suivants :
 Margarine normale.
 Huile d'arachide, de tournesol ou d'olive.

1. DETERMINATION DE L'INDICE D'ACIDE : Ia


1.1. Essais (2 essais minimum)
Peser exactement une masse de lipide voisine de 0.4 g (soit environ 14 à 15 gouttes dans le cas
d'une huile) dans une fiole d'Erlenmeyer de 100 mL.
Le solubiliser dans 20 mL de solvant (éthanol/n-butanol, 1/1) -tiédir légèrement en trempant
dans un bain-marie au besoin si le lipide se dissout mal-.
Ajouter 10 mL de solution de potasse alcoolique de concentration environ 0.2 mol.L-1.
Doser l'excès d'hydroxyde de potassium par une solution d'acide chlorhydrique de concentration
connue, proche de 0.2 mol.L-1 en présence de phénolphtaléine et en agitant constamment.
Soit Va mL le volume d'acide versé.

1.2. Témoins
Réaliser dans les mêmes conditions un témoin avec 20 mL de solvant et 10 mL de solution de
potasse alcoolique.
Soit V'a mL le volume d'acide versé.

2. DETERMINATION DE L'INDICE DE SAPONIFICATION : Is


2.1. Essais (2 au minimum)
2.1.1. Saponification
Dans un ballon à saponifier placer :
 m  0.4 g du corps gras à doser
 20 mL de solvant (éthanol/n-butanol, 1/1)
 20 mL de potasse alcoolique  0.2 mol.L-1
 2 à 3 billes de verre
Agiter puis adapter un réfrigérant à air (rodage largement graissé).
Porter à ébullition au bain-marie 30 à 40 min en agitant fréquemment et en veillant à ce que les
vapeurs se condensent dans la partie inférieure du réfrigérant.

2.1.2. Dosage du reste de potasse


Laisser refroidir le ballon et s'assurer que la saponification a été complète en vérifiant que l'eau
pour rincer l'intérieur du réfrigérant ne produit aucun trouble en arrivant dans le ballon.
Doser alors le reste de potasse par la solution d'acide chlorhydrique environ 0.2 mol.L-1 en
présence de phénolphtaléine.
Soit Vs mL le volume versé.

2.2. Témoin (réaliser simultanément 1 essai et 1 témoin)


Opérer dans les mêmes conditions (chauffage, durée) sur un témoin contenant 20 mL de solution
de potasse alcoolique et 20 mL de solvant.

Détermination des indices des lipides 1


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Soit V's mL le volume d'acide versé.

3. DETERMINATION DE L'INDICE D'IODE : Ii


3.1. Essais (2 au minimum)
3.1.1. Réaction d'addition
Dans une fiole d'Erlenmeyer bouchant émeri placer :
 m  0.2 g exactement pesé de lipide à analyser que l'on entraînera avec 20 mL de
chloroforme. Il est possible, sur certaines balance de peser directement dans la fiole
d’Erlenmeyer. (le cyclohexane, non toxique, peut être utilisé à la place du chloroforme)
 20 mL de réactif de Wijs.
Agiter et maintenir à l'obscurité au moins 15 à 20 min en agitant de temps en temps.

3.3.2. Dosage
Ajouter 100 mL d'eau distillée et 20 mL de solution de KI à 100 g.L-1.
Réduire l'excès d'iode dans la solution aqueuse par une solution de thiosulfate de sodium  0.2
mol.L-1 en agitant fortement la fiole afin d'extraire tout l'iode de la phase inférieure organique
(rouge-violette).
Soit Vi mL le volume versé.

3.2. Témoins (réaliser simultanément 1 essai 1 témoin)


Opérer de même sur 20 mL de solvant (chloroforme ou cyclohexane) et 20 mL de réactif de Wijs
puis doser l'iode comme précédemment.
Soit V'i mL le volume versé.

4. RESULTATS
Calculer Ia, Is, Ie et Ii pour le lipide analysé.
Justifier l’utilisation de la phénolphtaléine comme indicateur coloré pour déterminer Ia et Is.

Données :
 Indice d'acide Ia : masse de KOH en mg pour "neutraliser" l'acidité libre de 1 g de lipide.
 Indice de saponification Is : masse de KOH en mg pour "neutraliser" l'acidité libre et
saponifier à chaud les esters de 1 g de lipide.
 Indice d'ester Ie : masse de KOH en mg pour saponifier à chaud les esters seuls de 1 g de
lipide.
 Indice d'iode Ii : masse de diiode (I2) en g qui se fixe par addition sur 100 g de lipide.
 M(KOH) = 56.11 g.mol-1 M(I) = 126.90 g.mol-1 M(I2) = 253.81 g.mol-1

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PRODUITS A PREPARER

CORPS GRAS (HUILES, MARGARINES,…)


 Huile de tournesol ou huile d'arachide ou huile d'olive
 Margarine normale

HCl  0.2 mol.L-1

POTASSE ALCOOLIQUE  0.2 mol.L-1

SOLVANT ETHANOL/n-BUTANOL (1/1) (neutre ne se conserve pas)


RÉACTIF DE WIJS (INDICE D’IODE)

KI 10 %

THIOSULFATE DE SODIUM  0.2 mol/L-1 (INDICE D’IODE)

CYCLOHEXANE OU CHLOROFORME

KI 10 % ET H2SO4 AU 1/10 POUR DOSER LE THIOSULFATE (INDICE D’IODE)

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