Microbiología Molecular

Tema 2
DETERMINANTES DE LA
SUPERVIVENCIA DE
PROCARIOTAS A FACTORES
ADVERSOS
 INTRODUCCIÓN
• RESISTENCIA INDIVIDUAL
Disponibilidad de sistemas de respuesta/adaptación
 Capacidad de formación de estructuras de resistencia
 Capacidad de adquisición de resistencias (HGT)
Exposición previa al estímulo
Exposición a otros estímulos (resistencia cruzada)
Fase (velocidad) de crecimiento

• ESTRATEGIAS POBLACIONALES
Quorum Sensing
 Formación de Biofilms
 Muerte celular (apoptosis)
 Letargo (viables no cultivables)
 Heterogeneidad Fenotípica (bi-estabilidad)
2.1 ESTRUCTURAS DE
RESISTENCIA
 Estructuras de resistencia

La Esporulación
Bacillus sp. (B. cereus, B. anthracis, B. thuringiensis)
Clostridium sp. (C. perfringens, C. botulinum, C. tetani)
Sporosarcina sp
Desulfotomaculum sp.
Sporolactobacillus sp.

Importancia
Producción de toxinas
Producción de antibióticos
 Estructuras de resistencia

Etapas de la Esporulación
 Estructuras de resistencia

Activación de la Esporulación
Respuesta general a estrés “Irreversible”
Condiciones para la esporulación Señales
Limitación de Nutrientes (fuente de C ó N) GTP, ppGpp
Capacidad de síntesis de DNA ??
Densidad Celular QS

Transmisión de la señal (Inicio de la respuesta): Spo0-Fosforelevo (Spo0F, Spo0B, Spo0A)

 Estructuras de resistencia

Resistencia de Endosporas
Desecación
Calor (seco y húmedo)
Radiaciones UV y γ
Acidos, Desinfectantes, Enzimas
Agentes oxidantes
Acción mecánica
Alta presión
Estrés osmótico
 Estructuras de resistencia

Determinantes de resistencia de Endosporas

Dipicolinato Cálcico
Estabilidad de proteínas
Estabilidad de DNA

Deshidratación (10-25% H2O)

SASPs
Termorresistencia
Protección DNA
Inactivación Enzimas Fuente de C y E

Evita Daño DNA (Oxidación, Hidrólisis)

Envoltura
Multicapa
Proteínas hidrófobas
 Estructuras de resistencia

Resistencia de otras esporas

Calor moderado (< 65oC)
Mixococcus Radiación UV
Desecación
Acción Mecánica
Streptomyces
Lisozima
Algunos agentes químicos (SDS)

% Survivors
 Estructuras de resistencia

Determinantes de resistencia de Esporas

Diferencias con Endosporas

Cubierta
ATP (Metabolismo) +
DPA -
DESHIDRATACIÓN -
Trealosa (25%-50%) p/s
2.2 Resistencia Poblacional
 Resistencia poblacional

Resistencia en Biofilms
(10-1000 X frente a antibióticos)

Barreras físicas y químicas (EPS)

Crecimiento lento (limitación de nutrientes)

Heterogenidad de ambientes (individuos)

Activación de respuesta a estrés general (quorum sensing)

Respuestas específicas del biofilm

Bombas MDR
OMP
 Resistencia poblacional

Muerte celular/ Esterilidad

Muerte celular
Deterioro celular: autolisis (fase estacionaria)
Suicidio (sistemas Toxina-Antitoxina; autolisinas..)
Resistencia de la población a infección por fagos
Intercambio genético por transformación
Liberación de nutrientes
• Esporulación (Bacillus): Lisis de la célula madre
• Formación de cuerpos fructíferos (Myxococcus xanthus)

Esterilidad (Viables No Cultivables)

 Resistencia poblacional

Biestabilidad
Muerte celular programada
Inducción de Esporulación
Resistencia a UV, antibióticos (VNC)
2.3 Adquisición de resistencias
Resistencia a antibióticos
• Resistencia natural
– Ausencia de diana
– Ausencia de transportador
– Degradación enzimática
– Bombas expulsión
– Modificación química

• Resistencia adquirida
– Mutación (ej. diana)
– Transferencia horizontal
 Adquisición de resistencias

TRANSFERENCIA HORIZONTAL DE GENES (HGT)

HGT: Intercambio de información genética entre micros pertenecientes a cualquier taxón

- Transformación. Captación de DNA libre

- Conjugación. Transferencia de DNA de una célula a otra

- Transducción. Intercambio genético mediado por virus

 Adquisición de resistencias

Factores limitantes de la HGT

Físicos:

1. La distancia geográfica
2. Tipo de hábitat (terrestre, acuático, ser vivo,...)

Biológicos:

 Reconocimiento de secuencias específicas (transformación)

 Participación de factores cromosómicos (conjugación)
 El DNA invasor debe perpetuarse en la población receptora
- Replicación autónoma
- Integración en replicón de receptora (recombinación)
 Diferencia en maquinarias de transcripción y traducción

-35 -10 RBS ORF

Iniciación Iniciación Uso de Terminación
de la de la codones de la
transcripción traducción transcripción

 Mecanismos de defensa (sistemas de restricción-modificación et al.)

Clustered
Regularly
Interspaced
Short
Palindromic
Repeats
2.4 EXTREMOFILIA
EN
HIPERTERMÓFILOS
 Extremofilia

Estrés térmico en termófilos

Hipertermófilo: 60oC - 80oC -121oC

Procariotas (Archaea, Bacteria)

Mecanismos de Adaptación:
 Termofilia

Lípidos
Tª Elevada

Fluidificación de membranas Permeabilidad

• Enlaces éter
• Membranas Monocapa
• Isoprenoides cíclicos
• Interacción con proteínas HSP (termoadaptación)
 Termofilia

Acidos nucleicos
Efectos alta temperatura
• Degradación
• Desnaturalización

Factores generales de resistencia

• Concentración de solutos (sales, proteínas)

Factores específicos de resistencia

RNA: rRNA: G+C, Plegamientos alternativos, Lazos, Bases protuberantes
mRNA: Acoplamiento transcripción-traducción
tRNA: Modificaciones postranscripcionales

DNA: Depurinación Inhibida por K+, Mg2+

Superenrollamiento positivo (Girasa reversa)
“Histonas”
 Termofilia

Proteínas
Mayor estabilidad a: Tª, P, Sal, pH, detergentes, solventes..

 Factores Intrínsecos
• Eficacia de empaquetamiento (interacciones hidrofóbicas)
• Redes de pares iónicos y puentes de hidrógeno
• Resistencia a modificación química

 Factores Extrínsecos
• Interacción con metabolitos, iones y cofactores
• Concentración citoplasmática de solutos (sales, proteínas…)
• Interacción con chaperonas
 Termofilia

HSPs
•DnaK
•Termosoma:  Hsp60 Eucariota (familia de GroEL)
o Forman filamentos inactivos
o El choque térmico libera unidades activándose

•sHSPs: evita agregación térmica

•PPIs (peptidil-propil cis-trans isomerasas): Plegamiento

•Proteasas ClpP, FtsH, HslV

•Proteosoma eucariota-like
 Termofilia

Solutos Compatibles y Biofilms

Acumulación de solutos compatibles

(Trealosa; di-mio-inositol-fosfato)
• Previene agregación de proteínas
• Facilitan el plegamiento de proteínas por HSPs

Formación de Biofilms