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PRIMERA PARTE:
MATERIALES:
Tubos de ensayo, gradilla, solución colorante (azul de metileno o tinta china), agua destilada, hielo, baño
termostático, eritrocitos lavados de bovino, solución de cloruro de sodio al 0,9%, solución glucosada al 50
%, pipetas, portaobjetos, cubreobjetos, timer(cronómetro).
DIFUSIÓN
1) Difusión es el proceso mediante el cual las moléculas de un soluto determinado tienden a alcanzar
una distribución homogénea en la solución en la que se encuentran, desplazándose gracias a la energía
cinética de sus partículas desde el lugar de mayor al de menor concentración. La velocidad con la que
un soluto difunde está modificada por diferentes variables como ser : espesor de la membrana,
liposolubilidad, números de canales presentes en la membrana, temperatura, peso molecular de la
sustancia, cantidad de soluto , capacidad de disociación, carga eléctrica del soluto.
TÉCNICA :
En tres tubos de ensayo de 15 ml coloque 10 ml de agua, en el caso del tubo N° 3 el agua deberá estar
bien fría o agregársele hielo , luego de esta operación a cada uno de los tubos se le debe agregar una
gota de colorante.
Esperar 1-2 minutos y observar: Tiempo de difusión del colorante en cada tubo.
Comente y explique las causas de las diferencias que haya encontrado.
Colorante
Colorante
Colorante
_____ 10 ml
H2O
_____ 10 ml
H2O
_____ 10 ml
H2O
OSMOSIS
TÉCNICA
En una gradilla coloque tres tubos de ensayos, agregue dos mililitros de las siguientes soluciones, una
en cada tubo:
Luego agregue 1 ml de glóbulos rojos lavados de bovino en cada tubo, mezcle suavemente por
inversión, deje reposar durante 15 minutos. Transcurrido este tiempo en un porta objetos coloque una
gota y observe al microscopio, realice la misma operación con el contenido de cada tubo.
ERITROCITOS LAVADOS 1 ml
_____ 1 ml
ClNa
0,9%
_____ 1 ml
H2O
_____ 1 ml
Glu
50%
SEGUNDA PARTE
MATERIALES
Centrifuga para microhematocrito. Varilla de vidrio. Agujas. Colección de agujas, tipos, conos,
medidas, bisel, butterfly. Jeringas descartables, de vidrio, de metal. Pipetas hematológicas.
Anticoagulantes, EDTA, Citrato, oxalato y heparina. Maneas de sujeción, mocheta y mordaza. Banda de
Esmarch. Tijera, desinfectante y algodón. Portaobjetos comunes. Portaobjeto extensor esmerilado.
Tubo de Wintrobe. Pipetas Pasteur. Jeringas con agujas de infiltración (120). Capilares para
microhematocrito heparinizados y no heparinizados. Tabla de Kaneko. Regla milimetrada. Centrifuga
internacional. Muestra de sangre. Tubos de Khans. Agua destilada. Detergente. Alcohol. Cepillos.
Algodón. Mechero o plastilina.
FROTIS SANGUÍNEO: Extendido de sangre entera , que se realiza sobre un portaobjetos , con
diferentes fines diagnósticos.
El objetivo de realizar una extensión de sangre periférica o frotis sanguíneo es obtener una delgada capa de sangre sobre un
portaobjeto, que luego será teñido con una coloración específica con el fin de poder evaluar la proporción de cada leucocito (
formula leucocitaria relativa o FLR) y la morfología de las células sanguíneas y derivados celulares (leucocitos, eritrocitos y
plaquetas).
Los frotis sanguíneos deben realizarse inmediatamente cuando se utilizar sangre fresca, o dentro de las 2-3 horas de la
extracción si se añade anticoagulante (preferiblemente EDTA, ya que no produce deformación de las células)
A-MÉTODO
Técnica de frotis
PARTES DE UN FROTIS
HEMATOCRITO: Porcentaje de la sangre que corresponde a su parte celular ( glóbulos rojos , glóbulos
blancos , plaquetas), por ejemplo si un individuo tiene un hematocrito de 45 , se entiende que el 45% del
volumen sanguíneo son células y el resto plasma .
MATERIALES: tubo de Wintrobe. Diámetro uniforme de 3 mm. y calibrado en doble escala de 10 cm.
con divisiones milimétricas. Pipeta de Wintrobe con pera de goma, puede ser reemplazada por una
pipeta Pasteur o bien por una jeringa y aguja de infiltración (mas de 10 cm de largo). Centrifuga, sangre
con anticoagulantes.
MÉTODO
MICROHEMATOCRITO:
MATERIALES
1- Algodón, alcohol.
2- Capilares heparinizados para microhematocrito (75 x 1 mm.)
3- Mechero de gas o plastilina.
4- Centrifuga (12.000 r.p.m.).
5- Lector de Kaneko.
MÉTODO
1- Cargue el tubo con sangre obtenida directamente por punción venosa o en su defecto del frasco de
la muestra de sangre (con anticoagulante) manteniendo el tubo en posición horizontal.
2- Limpie con algodón el exterior del tubo.
3- Obture el extremo libre de sangre, colocando sobre la llama azul del mechero mientras lo rota entre
los dedos. También puede utilizarse plastilina.
4- Centrifugue a 12.000 r.p.m. durante 3 a 5 minutos.
5- Lea utilizando la escala de referencia de Kaneko o con regla milimetrada.
TUBO DE MICROHEMATOCRITO
PLASMA
CAPA FLOGÍSTICA
CAPA DE GLÓBULOS ROJOS
ESPECIE HEMATOCRITO %
CANINO 37 - 55
FELINO 24 - 45
EQUINO 32 - 55
BOVINO 30
OVINO 24 - 50
CAPRINO 24 - 48
PORCINO 32 - 50
ERITROSEDIMENTACIÓN
FUNDAMENTO:
Si se deja reposar sangre que contiene anticoagulante , los glóbulos rojos van descendiendo
lentamente quedando por encima de ellos una capa de plasma. El tiempo que dura la sedimentación es
muy constante para cada especie y en individuos normales. La velocidad de sedimentación depende de
múltiples factores que pueden afectar al eritrocito al plasma o a ambos , siendo algunos de ellos :
• Particularidades propias de la especie
• Número de células
Forma de las células
•
• Tensión superficial
• Contenido de fibrinógeno
• Globulinas
• Tipo y concentración de anticoagulante
VENTAJAS
• Facilidad de realización.
• En equinos, caninos y felinos es una prueba muy sensible.
DESVENTAJAS
• Requiere cantidades importante de sangre.
• No puede aplicarse en todas las especies, por ejemplo vacunos y porcinos reaccionan
débilmente a esta prueba.
TÉCNICA:
Se utiliza el método Westergreen el cual consiste en que la sangre (2ml) con citrato (0,4 ml al 3,8 %),
se introduce en pipetas de precipitación (o de Westergreen) graduadas en milímetro que se coloca en un
soporte vertical o inclinado ( lo cual acelera la velocidad de sedimentación) a temperatura ambiente. Se
observa al cabo de diferentes lapsos de tiempo los mililitros de plasma formado.
BIBLIOGRAFIA
Dukes, H.; Swenson, M. Fisiología de los animales domésticos. 4ta edición. Ed. Aguilar. Madrid. 1977.
Guyton, A. Tratado de Fisiología Médica. 8va edición. Ed. Interameriana. Madrid. 1991.
Harper, H. Manual de química Fisiológica. 7a edición. Ed. El Manual Moderno. México. 1980.
Kolb, E. Fisiología Veterinaria. 2da edición. Ed. Acribia, Zaragoza. 1976.
Schalm, O. Hematología Veterinaria. Ed. Hemisferio Sur. 1981.
Material ofrecido por la cátedra.
William J. Reagan, Teresa G. Sanders, Denis B. DeNicola (Eds.), "Atlas de Especies Domésticas Comunes", Editorial Harcourt.
Willard, Md; Tvedten, H. Diagnóstico clínico patológico práctico en los pequeños animales, Intermédica, 2004.
Rebar, A.H. Interpretación del hemograma canino y felino. Nestlé Purina PetCare Company 2003