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CENTRIFUGATION

ftxercice 1
D e u x macromolécules A e t B sp.hériques e t de m ê m e m a s s e v o l u m i q u e , sédimentent p a r
uîtr'acentrifugation d a n s les m ê m e s c o n d i t i o n s .
L u macromolécule A possède u n e c o n s t a n t e de s é d i m e n t a t i o n égale à 2 S e t u n e m a s s e m o l a i r e
m o y e n n e égale à 25 0 0 0 .
L a macromolécule B possède u n e c o n s t a n t e de sédimentation égale à 4 S.
C a l c u l e r l a masse m o l a i r e m o y e n n e de l a macromolécule B .

Exercice 2
U n e p a r t i c u l e g l o b u l a i r e s p h é r i q u e de m a s s e v o l u m i q u e égale à 1,4 g / m l e t de r a y o n égal
à 3 . 1 0 m , sédimente sous l ' a c t i o n de l a p e s a n t e u r , d a n s u n l i q u i d e de viscosité égale
8

à 1 0 P o i s e u i l l e avec u n e v i t e s s e supposée u n i f o r m e .
- 3

1) D é t e r m i n e r l a d i s t a n c e p a r c o u r u e p a r l a p a r t i c u l e a u b o u t de 1 h e u r e de
sédimentation ; l'accélération de l a p e s a n t e u r e s t de 10 m . s - 2

2 ) O n s o u m e t cette m ê m e p a r t i c u l e e t d a n s le r a c i n e l i q u i d e , à u n e ultracentrifugation à
l ' a i d e d ' u n e centrifugeuse q u i tourne à u n e v i t e s s e uniforme de 6. 10* tours/mn ;
L a c o n s t a n t e de s é d i m e n t a t i o n de l a p a r t i c u l e a u bout de 1 h e u r e de centrifugation e s t
de 14 unités S v e d b e r g . C a l c u l e r l a d i s t a n c e p a r c o u r u e p a r l a p a r t i c u l e a u b o u t de 1
h e u r e de c e n t r i f u g a t i o n ( 1 h e u r e après le début de l a centrifugation), cette p a r t i c u l e se
t r o u v a i t à 10 c m de l'axe de r o t a t i o n de l a centrifugeuse. „ - ,

P r1 /ml
0 3

Exercice 3
O n réalise u n e c e n t r i f u g a t i o n d ' u n e s o l u t i o n macromoléculaire ; l a c e n t r i f u g a t i o n à u n e vitesse
a n g u l a i r e c o n s t a n t e égale à 15 0 0 0 t o u r s p a r m i n u t e .
L a s u r f a c e l i b r e de l a s o l u t i o n q u i se t r o u v e d a n s le t u b e , se t r o u v e à 1 0 c m de l'axe de r o t a t i o n
\d> 1E œjitiifiiçpiise..: l e f o n d d u t u b e se t r o u v e à 18 c m d u m ê m e a x e (voire f i g u r e ) ;
A u c o u r s de l a c e n t r i f u g a t i o n , l a v i t e s s e de sédimentation d e s macromofécules se t r o u v a n c à l a
su rf a ce l i b r e de l a s o l u t i o n , e s t de 1 c m / h e u r e .
1) Déterminer le t e m p s m i n i m a l nécessaire p o u r s é d i m e n t e r t o u t e s l e s macromolécules a u
fond d u tube.
2) Déterminer l a c o n s t a n t e de sédimentation de l a macromolécule e n unités S v e d b e r g

Surface l i b r e

A x e de Solution
Rotation
10 c m

18 c m

Exercice 4
S o u m i s e à u n e accélération c e n t r i f u g e de- 1 0 cm/s , 7 7 u n e protéine en solution aqueuse
sédiments à une vitesse c o n s t a n t e de 0,36 mm/h
C a l c u l e r la c o n s t a n t e do sédimentation de cette protéine supposée sphérique p a r unités
Svedberg.
L a masse v o l u n u q u e Au v i v a n t est égale à 1.03 g/mL.
•xerçice 5
Q u e l l e est l a m a s s e m o l a i r e d ' u n e ro.acromolécule sphérique d o n t la c o n s t a n t e de S v e d b e r g est
égale à 3,55 s a c h a n t q u e sa densité est 7 e t q u e s o n r a y o n v a u t 10 m i c r o n s ?
Le s o l v a n t e s t l ' e a u de densité =1 e t de viscosité - 0 , 1 Poise

R.^p.rcice 6 , .
D e u x protéines A e t B s o n t centrifugées d a n s les m ê m e s c o n d i t i o n s .
L a protéine A a p o u r c o n s t a n t e de s é d i m e n t a t i o n 15 S e t p o u r m a s s e m o l a i r e 40 0 0 0 g ; L a
protéine B a p o u r c o n s t a n t e de sédimentation 3 0 S. D é t e r m i n e r l a m a s s e de la protéine B s i les
masses v o l u m i q u e s de A e t B s o n t considérés c o m m e égales.

Exercice 7
O n v e u t s é d i m e n t e r des macromolécules i d e n t i q u e s e n s o l u t i o n c o n t e n u e s dans u n t u b e à
c e n t r i f u g a t i o n e t ceci à l ' a i d e d ' u n e c e n t r i f u g e u s e t o u r n a n t 1 0 0 0 0 0 t o u r s / m i n u t e .
Après 3 0 m i n u t e s de c e n t r i f u g a t i o n , les molécules q u i se t r o u v a i e n t à l a surface de l a s o l u t i o n
o n t migré à u n e d i s t a n c e de 12 c m de l'axe d e r o t a t i o n de l a c e n t r i f u g e u s e .
Après 6 0 m i n u t e s d e c e n t r i f u g a t i o n , ces m ê m e s macromolécules se t r o u v e n t m a i n t e n a n t , à 18
c m de Taxe de r o t a t i o n .
1) C a l c u l e r l a c o n s t a n t e de sédimentation de ces macromolécules
2) C a l c u l e r l a v i t e s s e de sédimentation de l a macromolécule a u m o m e n t où elle se t r o u v e
à 15 c m de l'axe de r o t a t i o n .

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a * * de i 0°Û,, o E q u i l i b r e de
rcro>>o n ftO o ° G sédimentation
atteint
cm
M cm
G 30 m in 6 0 mtin
Exercice 8
1 ) U n t u b e m a i n t e n u v e r t i c a l , c o n t i e n t des macromolécules e n s o l u t i o n , o n laisse ces
e

macrdmolécules sédimenter sous l ' a c t i o n d e l a p e s a n t e u r , ces macromolécules sédimentent a u


fond d u t u b e à u n e v i t e s s e c o n s t a n t e é g a l e à 5. 10 ~ m / s . L a s u r f a c e l i b r e de l a s o l u t i o n se
n

t r o u v e à u n e d i s t a n c e de 8 c m d u f o n d d u t u b e ( v o i r fïg 1)
a. C a l c u l e r l'accélération à l a q u e l l e s o n t s o u m i s e s les macromolécules q u i se t r o u v e n t
à 4 c m de l a surface l i b r e de la s o l u t i o n
h . D é t e r m i n e r l e t e m p s m i n i m a l nécessaire p o u r q u e t o u t e s l e s macromolécules d e l a
s o l u t i o n sédimentent a u fond d u t u b e

Tfv

l
'3 cm
< jr„
2°) O n s o u m e t cette même s o l u t i o n d a n s le m ê m e t u b e e t d a n s l e s m ê m e s c o n d i t i o n s ( s u r f a c e
l i b r e de l a s o l u t i o n à 8 c m d u fond d u t u b e ) , à l ' a c t i o n d ' u n e c e n t r i f u g e u s e , la surface l i b r e de l a
s o l u t i o n se. t r o u v e à 10 c m de l'axe de r o t a t i o n de l a c e n t r i f u g e u s e ( v o i r f i g 2).
a. Déterminer la v i t e s s e a n g u l a i r e e n t o u r s p a r m i n u t e s , de l a c e n t r i f u g e u s e p o u r q u e
t o u t e s ies m a c r o molécules sédimentent a u f o n d d u t u b e a v e c u n t e m p s m i n i m a l d e 4
heures.
O n d o n n e l'accélération de la p e s a n t e u r - 1 0 m . s 1 . r
O n c e n t r i f u g e "une s o l u t i o n c o n t e n a n t d e u x m a c r o m o l é e u l e s A e t tf, à l'aide d ' u n e e e n t r i f u g e u i
q u i t o u r n e à u n e v i t e s s e a n g u l a i r e u n i f o r m e é g a l e à 10* t o u r s p a r m i n u t e .
Cette s o l u t i o n e s t i n t r o d u i t e d a n s u n t u b e à c e n t r i f u g a t i o n e t la surface l i b r e de la s o l u t i o n se
t r o u v e à u n e d i s t a n c e de 15 c m de l'axe de r o t a t i o n de l a c e n t r i f u g e u s e ; l a l o n g u e u r de l a
s o l u t i o n d a n s le t u b e e s t de 10 c m ( v o i r f i g u r e ) .
L a macromolécule A q u i se t r o u v a i t a v a n t l a c e n t r i f u g a t i o n à u n e d i s t a n c e de 18 c m de l'axe
de r o t a t i o n , m e t u n t e m p s de 6 0 m i n u t é s p o u r a t t e i n d r e le fond d u t u b e d u r a n t l a
-centrifugation.
L a macromolécule B q u i se t r o u v a i t a v a n t l a c e n t r i f u g a t i o n à u n e d i s t a n c e de 1 8 c m de l'axe
de r o t a t i o n , m e t u n t e m p s de 4 0 m i n u t e s p o u r a t t e i n d r e le fond d u t u b e d u r a n t l a
centrifugation.

D é t e r m i n e r l e t e m p s m i n i m a l nécessaire p o u r o b t e n i r p a r c e n t r i f u g a t i o n u n e séparation d ' u n e


macromolécule d u m é l a n g e , q u e l l e e s t c e t t e m a c r o m o l é c u l e ( A o u B )
40 c m

axe do. Surface l i b r e de la soluKen


rorahon

E x e r c i c e 10 , .
A ) L a c o n s t a n t e de sédimentation d ' u n e m a c r o m o l é c u l e p e u t - e l l e être n é g a t i v e ? Q u e l est
l'intérêt d ' a v o i r u n e c o n s t a n t e de s é d i m e n t a t i o n n é g a t i v e ( d a n s le cas où elle e x i s t e ) d a n s l a
séparation des molécules e n s o l u t i o n ? J u s t i f i e r v o s réponses
B ) L a c o n s t a n t e de sédimentation d ' u n e macromolécule e s t égale à 4 2 S d a n s u n s o l v a n t de
viscosité égale à 0 , 0 1 P o i s e e t de m a s s e v o l u m i q u e é g a l e à 1 g / m l .
L a " m a s s e m o l a i r e d e l a macromolécule e s t d e 6 . 1 0 * g e t se masse v o l u m i q u e e s t de

E x e r c i c e 1$
U n e s o l u t i o n c o n t e n a n t u n e m a i i O M o l t o i k . e s t OTiai» à « n e u n l i î f f , a l M à F a i t e l u e
c e n t r i f u g e u s e q u i t o u r n e à u n e vitesse a n g u l a i r e u n i f o r m e d e S . 1 0 " t u u i a f c u n n i a s ; l e s
Racromolécuies q u i se t r o u v e n t à l a s u r f a c e l i b r e de l a s o l u t i o n ont sédimenté t f u a e d i s t a n c e
de 2,2 c m a u b j u t dt i h e u r e de c e n t r i f u g a t i o n , l a s u r f a c e l i b r e d e l a s o l u t i o n es* à m
-iiKtance de 15 à; i - rotaticr.
C a l c u l e r l a cor.hlitnt - ' J i m e n t a t i o n de l a mecrome!écu!e en unités S v e ^ t - :
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