22/04/2020 Plamides

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Mise à jour : 14/08/2001
Les plasmides
Glossaire
Qu'est ce qu'un plasmide ?
Histoire
Principe de l'utilisation des plasmides
Téléchargements
Le plasmide pBR329
Le plasmide Ti

Qu'est ce qu'un plasmide ?

De nombreuses bactéries contiennent un ou plusieurs plasmides (exemple : le plasmide

Ti d'Agrobacterium tumefaciens)
La plupart des plasmides sont des molécules d'ADN circulaires double-brin, beaucoup
plus petite qu'un chromosome : de 3000 à 100000 paires de bases (N.B. : il existe des
plasmides linéaires)
Ce sont des unités de réplication autonome. Ils possèdent leur propre origine de
réplication et se répliquent en général de manière indépendante du chromosome
bactérien. C'est cependant la machinerie de la cellule qui assure leur réplication.
Ils sont optionnels pour la cellule hôte, c'est à dire qu'il ne sont pas indispensables au
métabolisme de la cellule dans des conditions normales de croissance (ils peuvent être
alors perdus).
Les plasmides peuvent coder pour diverses fonctions.
Certains codent pour des enzymes qui inactivent des antibiotiques bien définis. De tels
plasmides R (plasmides portant un gène de résistance) rendent habituellement la
cellule hôte résistante à l'antibiotique considéré.
Le facteur F est un plasmide particulier qui joue le rôle dans la sexualité des bactéries.
Il peut-être soit absent des cellules (F-) soit présent sous deux états possibles :
autonome et indépendant du chromosome (cellules F+) ou intégré dans le chromosome
bactérien (cellules HFR).
Certains plasmides (mais pas tous) possèdent l'information nécessaire pour se
transférer eux-mêmes d'une cellule à l'autre par le processus de conjugaison.
Les plasmides sont largement utilisés dans les techniques de l'ADN recombinant. Un
plasmide recombinant (manipulé génétiquement) est souvent désigné par le préfixe
"p" (par exemple pBR329).

Principe de l'utilisation des plasmides

Les plasmides sont utilisés comme vecteur de clonage

Par des expériences de recombinaison in vitro, on sait intégrer dans la molécule d'un
plasmide un fragment d'ADN provenant d'une autre source. On obtient ainsi un
plasmide recombiné ou plasmide chimère.
On peut faire pénétrer ces molécules recombinées dans des cellules de Escherichia coli
dépourvues de plasmide (transformation).
On peut repérer les cellules qui ont reçu une molécule de plasmide grâce aux gènes du
plasmide qui sont sélectionnables (résistance à une drogue).
Parmi ces cellules, on pourra, dan certains cas, reconnaître (ou sélectionner) celles qui
portent un plasmide ayant intégré un fragment particulier de l'ADN étranger.
L'ensemble des descendants d'une telle cellule constitue un clone. On dit que l'on a
cloné un fragment d'ADN.
Ce fragment sera beaucoup plus facile à obtenir, à purifier, et à étudier dans un clone
Escherichia coli que dans son contexte d'origine (noyau d'une cellule de mammifère
par exemple).

acces.ens-lyon.fr/biotic/biomol/outilsbm/html/plasmide.htm#Ti 1/3
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Les plasmides sont utilisés comme vecteur d'expression

Une fois un fragment d'ADN cloné dans un plasmide on peut réussir à faire exprimer
les gènes qu'il porte dans les cellules d'Escherichia coli. Cette expression nécessite la
transcription de ce fragment et la traduction du messager. On peut ainsi faire fabriquer
à Escherichia coli des protéines étrangères (par exemple, l'insuline humaine, l'hormone
de croissance humaine).

Les plasmides sont utilisés comme vecteur pour la transformation de cellules

eucaryotes
On sait depuis quelques années introduire et faire exprimer de l'ADN dans des cellules
eucaryotes (levure, cellules de Mammifères en culture, cellules résultant des premières
divisions de l'oeuf d'un mammifère par exemple). On peut ainsi après un clonage dans
Escherichia coli réintroduire le gène cloné dans des cellules eucaryotes et le faire
exprimer.

Exemples de plasmides
Plasmides Descriptions Cartes géniques
ADN circulaire bicaténaire.
pBR329 Taille : 4150 pb.
Utilisation : vecteur biologique.

C'est un plasmide artificiel (construction génique) fabriqué à

partir de plasmides naturels bactériens - essentiellement
Escherichia coli.
Il est constitué de 4150 paires de bases dont la séquence est
connue. Il porte outre une région indispensable à sa propre
réplication, trois gènes capables de conférer la résistance à un
antibiotique.
- AmpR, résistance à l'ampicilline
- TetR, résistance à la tétracycline ;
- CamR, résistance au chloramphénicol.
L'action de ces gènes se fait par l'intermédiaire d'enzymes qui
détruisent ou modifient les molécules de l'antibiotique
(exemple pénicillinase codée par le gène Ar ).
Le plasmide pBR329 se maintient dans les cellules hôtes
(environ 15 copies par cellule) si celles-ci sont cultivées en
présence d'ampicilline, de tétracycline ou de chloramphénicol
(pression de sélection indispensable pour le maintien du
plasmide).
ADN circulaire bicaténaire
Ti Taille : 200000 pb
Utilisation : vecteur biologique

C'est un plasmide bactérien, présent chez Agrobacterium

tumefaciens
Nommé Ti-DNA pour Tumor inducing-DNA., ce plasmide est
responsable de la virulence d'Agrobacterium tumefaciens. Il est
composé de deux parties principales. La première est appelée le
Ti-T-DNA pour Tumor inducing-Transferred DNA.. C'est le
Ti-T-DNA qui est inséré dans le génome végétal et qui code
des gènes permettant la synthèse des opines et provoquant
l'apparition de tumeurs cancéreuses. La deuxième partie est
composé de gènes impliqués dans les mécanismes cellulaires
du transfert du Ti-T-DNA et est appelée zone vir. D'une taille
de 35 kb, elle contient les gènes responsables de l'activation de
la virulence d'Agrobacterium tumefaciens, de l'excision du Ti-
T-DNA et de son transport au sein de la cellule végétale
infectée. Le Ti-T-DNA a une structure particulière. En plus des
gènes codant pour la synthèse des opines (locus ocs), d'auxines
(locus tms), de cytokinines (locus tmr) et autres facteurs
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provoquant la tumeur (locus tml), il est bordé par des

séquences répétitives de 25 paires de bases qui délimitent sur le
Ti-DNA la région qui doit être excisée.

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