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Sur l'elevage des Rotiferes au

laboratoire
par

R. POURRIOT
Attache de Recherches au Centre de Recherches Hydrobiologiques
du C.N.R.S. Gif/Yvette.

L'elevage des Rotiferes au laboratoire est pratique deja depuis le


debut de ce siecle. Les travaux de DE BEAUCHAMP, en 1928 et 1938,
constituent, a ma connaissance, la mise au point la plus rcente ayant
eu lieu sur ce sujet; je ne m'attarderai donc pas a passer en revue tous
les procedes preconises et me contenterai d'en tracer un tres bref
aper u.
Dans le choix de la nourriture fournir aux animaux, les prefe-
rences des auteurs ont porter sur les Protistes Flagelles (Polytoma,
Chlamydomonas, etc.). En dernier lieu, DE BEAUCHAMP a russi
conserver plusieurs ann6es diverses souches (en particulier Brachio-
nus calyciflorus PALLAS) en les alimentant avec des Chlorelles. Par
leur petite taille, leur maintien en suspension dans le milieu, la rapi-
dite de leur multiplication, la facility de leur culture, les Chlorelles
constituent une nourriture ideale.
Les indications donnees sur le milieu d'61evage sont g6enralement
peu precises; souvent ce dernier consiste en une solution d'extrait de
terre ou en une eau naturelle.
LUNTZ, BUCHNER et DE BEAUCHAMP ont tented de remplacer ces
milieux naturellement complexes par des milieux synth6tiques tels
que les liquides de BENNECKE ou de KNOP tres dilues; nanmoins,
dans les conditions qu'ils ont d6finies, leurs elevages ou leur cultures
d'Algues (Flagelks gneralement) ne se dveloppaient pas ou tr6s
difficilement; ces essais m6ritaient d'etre repris.
Avec les conseils bienveillants de Monsieur DE BEAUCHAMP et
de Monsieur LEFEVRE, Directeur du C.R.H., j'ai poursuivi ces re-
cherches sur l'1levage des Rotiferes; mon premier but a et d'ame-
liorer les techniques anciennes, sans nuire au rendement de l'61evage,
et d'augmenter le nombre des esp6ces susceptibles d'etre eleves; tel
est l'objet du present travail.

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MATERIEL ET METHODE

Comme nourriture, en dehors de Chlorella pyrenoidosa CHICK,


generalement utilise, Haematococcus pluvialis FLOTOW em WILLE a
fourni de bons rsultats pour les Rotiferes planctoniques. Ces Algues
proviennent de la collection d'Algues vivantes de notre laboratoire et
sont cultiv6es sur milieu de LEFEVRE.
Je me suis tout d'abord servi comme milieu de base, d'extrait de
terre dilue au 1/5; ce milieu a ete seul essays dans le cas (cf. ci-des-
sous) des especes ayant fait l'objet d'elevages fugaces. Mais desirant
61iminer un tel element d'inconstance, je lui ai rapidement substitute
une dilution au 1/3 ou au 1/4, du milieu de culture d'Algues, de
composition mieux dfinie:
Eau bidistille 1000 cc
Nitrate de potassium 100 mg
Phosphate bipotassique 40 mg
Sulfate de magnesium 30 mg
Nitrate de calcium 100 mg
Perchlorure de fer traces
Extrait de terre 7,5 cc
Extrait de sphaigne 7,5 cc
Les extraits ajout6s aux sels mineraux ont pour but d'apporter
les oligoelements necessaires une rapide croissance des Algues.
Neanmoins, Monsieur LEFEVRE m'a signals qu'il avait cultiv de
nombreuses Chlorophycees unicellulaires sans l'adjonction de tels
extraits. Afin d'obtenir des conditions parfaitement dfinies, j'ai,
depuis six mois, exclu ces derniers, tant des milieux de culture
pour Algues que des milieux d'l1evages. Les premiers rsultats
sont satisfaisants, et Rotif6res et Algues (Chlorelles) proliferent bien
dans ces milieux entierement mineraux. La multiplication des Algues
6tant un peu moins rapide dans de tels milieux, il faut simplement
pr6voir un ensemencement plus large lors de leur repiquage.
Le pH de tels milieux est normalement voisin de 7; mais une dilu-
tion du milieu avec une eau distilkle acide, peut le faire descendre
jusqu'a 6,6. L'exp6rience montre qu'un pH acide est nfaste pour
l'isolement et le repiquage des especes enumerees ci-dessous, et qu'il
y a interet operer avec des milieux d'elevage de pH superieur 7;
en general, j'ajoute ces milieux quelques gouttes de lessive de
potasse jusqu'a obtention d'un pH situe aux environs de 7,4.
Les cultures sont effectuees dans des fioles de 150 cc et les le-
vages, dans des tubes droits, de large diametre, en verre Pyrex.
Toute la verrerie est sterilise au four Pasteur.
La separation des souches a t& ralisee de la facon suivante: une

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femelle amictique ovigere est isolde, soigneusement lavee, puis
transported en boite de Ptri, dans du milieu sterile additionn de
quelques gouttes d'une culture de Chlorelles. Les premiers jeunes
&clossont recueillis et lav6s dans du milieu sterile. Si une sterilisation
rigoureuse des animaux n'est pas obtenue ainsi, du moins les Bact-
ries et impuret6s du milieu primitif sont-elles pratiquement eli-
minees.
Ces jeunes femelles sont transport6es dans les tubes d'l1evages
contenant du milieu sterile enrichi en Chlorelles.
Quand ce milieu est puis6 les Rotiferes sont, soit repiqu6s sur
milieu neuf, soit raliment6s aseptiquement. L'asepsie est plus ri-
goureuse dans le premier cas o les Bacteries occasionnellement
transportees par les Rotifres - en particulier dans leur tube di-
gestif - ont moins le temps de se multiplier. D'autre part en raison
de l'imoutrescibilite des milieux utilises pour leur culture et des sub-
stances antibiotiques qu'elles scretent, les Algues sont pratique-
ment pures.
Les levages sont faits la temperature du laboratoire, aux en-
virons de 20 ° .
Les tentatives d'elevage ont souvent port6es sur plusieurs indivi-
dus de la meme espece, mais d'origine diff6rente. Pour la grande ma-
jorit6 des especes indiqu6es ci-dessous, on obtient un pourcentage
elev6 de russite quelle que soit la provenance de l'animal, con-
dition toutefois de prendre les precautions suivantes:
- Fournir comme nourriture une culture florissante de l'Algue
appropriee.
- Eviter un changement trop brutal du degr6 de salinity et du pH.
I1 est possible d'entretenir une souche pendant de nombreuses
generations avec une seule espece d'Algue; cependant il semble qu'il
y aurait interet, pour am6liorer la vigueur de l'elevage, varier la
nourriture de temps autre, ou fournir un melange d'Algues.
Les rsultats obtenus dans ces conditions sont consigns ci-dessous
et accompagn6s de quelques observations biologiques ou 6cologiques;
j'ai note egalement les date et lieu de rcolte de l'animal mis en ele-
vage.
Un certain nombre de ces especes ont dej ete cultiv6es par DE
BEAUCHAMP; ayant exp6rimente dans trois milieux different, je les
cite nouveau: on voit ainsi que les especes tudi6es s'accomodent
de milieux de base varies.

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ELEVAGES OBTENUS
A. Rotifires libres mastax maUl ou rame.
1°. ESPECES FOURNISSANT DES ELEVAGES PERMANENTS (UN AN OU PLUS).

Ploimes

Brachionus urceolaris MtULLER - Benthique. Rcolte en Fvrier


1955 au Rondeau du parc national de Rambouillet. Le Rondeau est
une petite piece d'eau artificielle. La souche s'est eteinte en Avril
1956.
Brachionus urceolaris var. sericus ROUSSELET - Benthique. Fevrier
1955. Flaque de la Foret de Rambouillet. Elevage toujours florissant
en Mai 1957.
Brachionus rubens EHRENBERG - Juin 1955. Bassin du Luxembourg.
Fixed au dos d'une femelle de Daphnialongispina. Extinction en Juil-
let 1956.
Brachionus quadridentatus HERMANN - Benthique. Fvrier 1955.
Le Trou (mare de Foret). La souche isole est pourvue d'epines
lombaires d'assez grande taille (70 80 /u) et les a conservees jusqu'a
present sans grande variation. Elevage toujours florissant en Mai 1957.
Keratella quadrata MULLER - Pelagique. Fvrier 1955. Mare de
prairie de Gif sur Yvette. Comme toujours chez les Keratella, il y a
eu, ds le dbut, une legere rduction de la longueur des pines
posterieures. Extinction de la souche en Fevrier 1956.
Keratella testudo EHRENBERG - Pelagique. Avril 1955. Mare des
environs de Gif. Les pines posterieures sont assez courtes, 20 a 40 u.
Elles peuvent se rduire jusqu'a disparition complete; parfois seule
la gauche disparait, la droite restant tres courte (10 u). Elevage tou-
jours florissant en Mai 1957.
Ces deux dernieres especes ont fourni de bons elevages avec Chlo-
rella pyrenoidosa et d'excellents avec Haematococcus pluvialis qui
semble leur convenir parfaitement.
Euchlanis dilatata EHRENBERG - Benthique. Mai 1955. Mare de
Gif/Yvette.
Euchlanis incisa CARLIN = E. triquetra HUDSON and GOSSE non
EHRENBERG - Benthique. Mai 1955. Mare de Gif.
Platyiaspatulus MiLLER. Plagique. Juin 1955 - Mare de Gif.
Ces trois levages sont toujours florissants en Mai 1957.
Toutes ces especes ont montre un dveloppement normal, at-
teignant parfois de grandes densities. Leur reproduction n'est pas, du
moins au debut, uniquement parthenogen6tique; des eufs durables
sont aussi pondus. Si les conditions d'elevage sont maintenues con-
stantes, le nombre de ces oeufs durables diminue en general apres

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G2
5

II

Fig 1 12 - 1: Eosphora najas V- 2: Brachionus quadridentatus- 3: B.


rubens - 4: Notommata glyphura, jeune e - 5: ceuf immediat du mme -
6: Keratella testudo - 7: Brachionus urceolaris var. sericus - 8: Platyias pa-
tulus - 9: Euchlanis dilatata,face ventrale - 10: vue antapicale du meme -
11: E. incisa, face ventrale - 12: vue antapicale du meme.

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quelques mois; parfois meme ils disparaissent completement (cas
frequent chez les Euchlanis).

Bdello-ides

Rotaria tardigradaEHRENBERG - Octobre 1955. Mare de St R6my.


Rotaria rotatoriaPALLAS - Mai 1955. Mare de Saint Remy.
Les densit6s atteintes par ces animaux dans les tubes d'61evages
sont considerable.
Ces deux especes vivipares sont toujours florissantes en mai 1957.

20. ESPECES SE MAINTENANT EN ELEVAGE QUELQUES SEMAINES A QUEL-


QUES MOIS SEULEMENT.

Trichotria pocillum MULLER - Benthique. Mai 1955. Mare des


environs de Saint R6my.
Mytilina mucronata MULLER - Benthique. Mai 1955. Mare des
environs de Saint R6my.
Donnent naissance une descendance abondante pendant les
premieres semaines puis priclitent rapidement apres 1 ou 2 mois.
DE BEAUCHAMP signalant 'existence de telles formes qui prissent
in6luctablement, cite une espece tres voisine: Mytilina brevispina
EHRENBERG.
Des essais avec Scenedesmus quadricauda CHODAT, Ankistrodes-
musfalcatus var. acicularis (A. BRAUN) G. S. WEST, Chlamydomonas
sp., se sont r6ev6ls aussi infructueux.
Brachionus budapestinensis DADAY - Pel1agique. Octobre 1955.
Rondeau. Se multiplie bien pendant 3 mois. Disparition accidentelle.
Anureopsis fissa GOSSE - Juin 1955. P61agique. Mare des environs
de Gif. Elevage satisfaisant au debut. Disparition fortuite apres 4
mois.
Enfin, quelques especes, bien que voisines des precedentes, ne don-
nent jamais naissance plus de deux ou trois descendants et ne four-
nissent jamais d'1elevage, meme temporairement; tels sont les Nothol-
ca, Kerratellacochlearis et K. serrulata.

B. Rotiferes mastax virg6 ou forcipe.


Bien qu'apparemment peu appropri6es une nourriture algale,
deux esp&ces, alimentees de chlorelles, se sont reproduites pendant
2 mois dans ces conditions avant de s'6teindre. Ce sont:
Trichocerca carinata LAMARCK - Mai 1955. Mare de Saint R6my.
Notommata pseudocerberus DE BEAUCHAMP - Mai 1955. Mare de
Saint R6my.

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Dans la nature, j'ai vu cette derniere se nourrir de Stentors; elle
serait donc de preference carnivore comme les suivantes, et se serait
adaptee quelque temps a une alimentation algale. Une seconde tenta-
tive faite avec un exemplaire de la meme espece, d'origine different,
a d'ailleurs completement echoue.

Deux especes benthiques sont alimentees avec succ6s de souches


de Ploimes ou Bdelloides:
Notommata glyphura WULFERT - Provenant d'une mare du plateau
de Belleville. Elle se nourrit depuis 6 mois (Decembre 1956) de
Rotaria rotatoria;une deuxi6me souche est alimente avec succ6s de
Philodina roseola. Comme le suivant, ce Notommate engloutit en-
tierement les Bdelloides; il peut s'attaquer aussi des Euchlanis,
mais dans ce cas fournit des levages moins prosp6res.
Contrairement ce qui se passe chez la plupart des especes de
Rotif6res, les ceufs imm6diats de Notommata glyphura ne sont pas
lisses, mais munis de nombreux poils plus ou moins forts (cf. figure).
Leurs dimensions sont de l'ordre de 100OO x 14 0 ,u.
Eosphora najas EHRENBERG - Provient d'une mare de ferme de
Saint Aubin; elle se nourrit de Brachionus pala depuis Mai 1956.
Elle a d'ailleurs accepted en pature d'autres formes telles que: Euchla-
nis dilatata, Monostyla pyriformis DADAY, Rotaria rotatoria, Philo-
dina roseola EHRENBERG, dont je possede une souche sur Chlorelles
depuis un mois. Les Brachionus pala et Euchlanis dilatata sont atta-
ques de front par leurs predateurs qui, avec leur mastax (proche du
type forcipe), extirpent de la lorica de leur proie des lambeaux de
chairs qu'ils avalent; tandis que les Bdelloides - et les petites formes
telles que les Monostyla - sont ingerees en totality; apres digestion
du Bdelloide, le mastax est expulse par le cloaque du Notommatide.
Dans les deux cas, la capture de la proie se fait au hasard des ren-
contres.
La technique d'elevage de ces formes carnivores est la suivante: les
jeunes femelles isolees sont transportees sur une souche abondante de
l'espece dont elles se nourrissent; apres puisement des proies, les
carnivores sont repiques sur une nouvelle souche. Souvent le repi-
quage n'est pas necessaire: un quilibre s'etablit entre les Rotif6res
predateurs, les Rotif6res leur servant de nourriture et les Chlorelles
dont ces derniers s'alimentent; aucune de ces 3 populations en pre-
sence ne disparait completement.
Une methode plus propre consiste isoler 2 ou 3 individus carni-
vores dans du milieu d'elevage sterile et leur fournir intervalles de
temps rguliers, des proies lavees au prealable.
DE BEAUCHAMP signale une autre espece, mastax forcipe, eleve
sur des Lepadella patella: Dicranophorusforcipatus MiLLER. D'au-

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tres esp&ces voisines, appartenant aux genres Itura, Dicranophorus,
Eosphora, Notommata, devraient pouvoir tre levees sans difficult
selon les memes proc6des.

C. Rotifares fixes a mastax malliorame.

Quelques Flosculariaceae, Ptyguraagassizi EDMONDSON et Limnias


annulatus BAILEY ont et rcoltees sur des cratophylles, dans une
petite piece d'eau de Gif. Quelques exemplaires isoles ont te ali-
ment6s, sans succes durable, de Chlorella pyrenoidosa, Haemato-
coccus pluvialis et Chlamydomonas sp. Ces algues sont bien ing6r6es
et dig6res; quelques ceufs sont pondus et eclosent; les jeunes, libres
pendant un certain temps vont se fixer aux parois de la boite de Ptri
et peuvent pondre leur tour. On obtient ainsi une ou deux gen6-
rations, mais les animaux ne se multiplient jamais activement et
finissent par disparaitre. Les Chlamydomonas, par leur petite taille
et leur mobility, semblent donner les meilleurs rsultats; malheureu-
sement, en culture peu sont actifs. Les essais sur ce groupe seront
repris.
Tels sont les rsultats que j'ai obtenus au cours de deux annees.
Les Algues d'eau douce ont seules pu tre utilisees comme nourri-
ture jusqu'a present, mais il est probable que l'utilisation de petits
protozoaires flagells permettraient d'elever des especes ne s'acco-
modant pas d'une nourriture algale.
De prochaines experiences seront faites dans ce sens.

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