Rapport de TP de la microbiologie

Encadrée par : madame Slaoui

Realisée par :
 Souad BOUSABOUNE 15
 Hajar BEN SAGA 09

1-INTRODUCTION
 Définition du microbiologie :

La microbiologie est un domaine des sciences appliquées qui a

pour objet les micro-organismes et les activités qui les
caractérisent. Plus spécifiquement, la microbiologie se
consacre à l'identification et à la caractérisation des micro-
organismes ; à l'étude de leur origine et de leur évolution ; à
définir leurs caractéristiques, les produits de leurs activités
et leurs besoins ; et à comprendre les relations qu’ils
entretiennent entre eux et avec leur milieu naturel ou
artificiel.

Et dans laboratoire microbiologie est trouve plusieurs

différent matériels demande dans les analyses de certaine
matière vivante et devoir pour chaque utilisateur ensuivre
les différentes conditions au cours de leur travail.

2-Matériels utilise en MICROBIOLOGIE :

 Pipettes
micropipette

Définition de la stérilisation :

La stérilisation est une opération qui vise à détruire tous les

micro-organismes d'un objet de façon durable. Elle est
notamment utilisée dans la cuisine, la médecine et l'industrie
pharmaceutique (médicaments). L'objectif de la stérilisation
est double : contrôler les micro-organismes et prévenir une
éventuelle contamination.
 Les Méthodes de stérilisation 

1-stérilisation à la chaleur sèche :

La chaleur sèche est efficace pour la stérilisation de la

verrerie. Des pipettes et d’autres matériaux, solides,
résistant à la chaleur.

Le passage dans la flamme « bec BUNSEN » de la

surface de matériel non inflammable assure une
parfaite

Stérilisation. On stérilise de cette façon les fils

de platine et les pipettes pasteur.

2- stérilisation à la chaleur humide :

Autoclavage, c’est un appareil indispensable dans un

laboratoire de microbiologie. Le chauffage a lieu sous
pression de vapeur d’eau, à une température de 120°C
pendant une durée qui varie en fonction de milieu, de
la température utilisée et du volume des récipients.
Ce procédé tue toutes les cellules végétatives et les
endospores.

Définition de milieux de culture :

Un milieu de culture est un support qui permet la culture de
cellules, de bactéries, de levures, de moisissures afin de
permettre leur étude. Il se compose d'une base (agar-agar,
eau, minéraux...) ainsi que d'un indicateur coloré de pH ou de
réaction d'oxydo-réduction pour permettre de formuler des
hypothèses sur le genre. Il existe aussi des bouillons de
culture qui possèdent la même fonction, mais ces milieux ne
contiennent pas d'agar-agar, ils sont donc totalement
liquides.

Mise en evidence des microorganismes dans

l’environnement sur l’homme et dans les aliments

But :
 Contrôler l’ambiance du laboratoire, les surfaces de travail et le
matériel utilisé au laboratoire.
 Mettre en évidence la flore commensale de l’homme.
 Mettre en évidence la présence des microorganismes dans les
aliments.
Matériel :
Milieux gélosés en boite de pétri
Ecouvillon
Tube d’eau distillée stérile
Étuve
I. Mise en évidence des microorganismes dans
l’environnement :

1) Manipulation 1 : contrôle de l’air ambiant

On a placé les boites fermées dans une étuve a 37 degrés

pendant 24

2) Manipulation 2 : contrôle des surfaces

Tremper un écouvillon stérile dans un tube d’eau stérile sur
différentes surfaces
Placez les boites dans une étuve à 37 degrés pendant 24 h

II. Mise en évidence de la flore commensale de

l’homme :
Mise en évidence de la flore cutanée
1. Manipulation 3 :

Partie 1 : une trace de 3 doigts

Partie 2 : un morceau de cheveu
Partie 3 : refaire la même opération après lavé les mains
2. Manipulation 4 : mise en évidence de la flore cutanée
humaine

Résultats et compte-rendu :
Manip 1 Manip 2 Manip 3 Manip 4
Nombre de Quelques Beaucoup Beaucoup Plusieurs
colonies colonies mais être
dans les lavé les
côtés de la mains le
 boite nombre
diminue
Taille Une nappe Moyenne à Très grand Grand
moyenne grand
colonies
Couleur Blanc Blanc et Blanc et Blanc
colonies beige opaque et
jaune

On remarque qu’il y a beaucoup de colonies dans l’air

ambiant et dans les surfaces et leurs tailles est
différentes selon l’endroit où la surface. On remarque
aussi que le nombre de colonies après être lavé les mains
est diminuer.

Ensemencement :

Le but :
 Favoriser la multiplication des bactéries sur un milieu nutritif.
 L’introduction biologique de microbes, de bactéries, dans un
milieu de culture.

La technique d’ensemencement :

 L’ensemencement doit être effectué dans des conditions

d’asepsie rigoureuses à partir d’un prélèvement d’une colonie ou
d’un bouillon bactérien avec une anse de platine ou une pipette
de pasteur, peut être réalisé sur un milieu liquide ou solide.

Afin de pouvoir identifier une espèce bactérienne de façon

convenable et pour cela on multiplie la souche en réalisant des
ensemencements sur une gélose ou dans un milieu liquide adapté.
Techniques d’isolement et de purification :

Principe :

 Isoler consiste à séparer les divers microorganismes

d’un mélange.
 Vérifier la pureté d’une souche étudiée : une souche
pure ne donnera qu’un type de colonie.
 Pour réussir un isolement, il faut donc arriver à
disperser suffisamment les microbiennes et ne se
touchent pas.
I. Ensemencement sur milieu liquide (Bouillon nutritive).

On peut ensemencer un milieu liquide :

o Soit à partir d’un produit liquide, on met quelques

gouttes dans le milieu à ensemencer avec pipette de
pasteur,
o Soit à partir d’un produit solide, écraser la colonie
prélevée à l’aide d’une anse de platine ou pipette de
pasteur sur la paroi du tube, pour obtenir une
suspension homogène.
II. Ensemencement sur milieu solide :
a. Ensemencement à la surface :

Manipulation n°1 :

Résultat : On observe des lignes de colonies blanches et

transparentes et aussi bien différenciés.

b.Isolement sur boite de pétri :

Manipulation n°2 :

Boite de pétri gélosées Gélose Nutritive’

Ensemencement de cet isolement se fait à travers les
étapes suivantes :

On trouve :
Résultat : On distingue trois parties :

-Première partie : une nap de colonies jaune

-Deuxième partie : des lignes de colonies blanches bien

isolés

-Troisième partie : de colonies claires et isolées blancs

c. Ensemencement à par inclusion

Manipulation n° 3 :

Résultat : On trouve une nappe blanche et transparents et

aussi isolés.

d. Isolement sur gélose inclinée milieu PCA :

Après avoir flambée l’anse qui porte la bactérie, stériliser le
col du tube et refermer.

Alors : on trouve pratiquement

Manipulation n° 4 :

Résultat : Dans le fond on voit qu’une nappe opaque mais par

contre au-dessus du tube existe des colonies isolées.

Examen macro/microscopique des culture

Manipulation 1 : examen macroscopique des cultures

1) Aspect de colonies en surface sur milieu solide

- La taille
- La forma
- L’aspect de la surface
- L’opacité
- La consistance
- La couleur
2) Aspect des colonies en profondeur
- Colonies régulières en formes de lentilles
- Colonies irrégulières de formes diffuses et
floues
- Aspect des colonies en surface sur gélose linéaire
3) Aspect de la pousse en milieu liquide :

Résultat : On observe des bactéries mobiles lorsque des

trajets très différents sont observés et autres sont
immobiles. Les bactéries en noir et rond.

Manipulation 2 : l’examen microscopique des bactéries :

L’examen a l’état frais

 A partir d’une culture en milieux liquide

 A partie d’une culture sur milieu solide

Manipulation 3 : après coloration

Le but :
  Observer les bactéries tuées fixées sur une lame
et ayant subi l’action d’un ou plusieurs colorants.
 La réalisation de frottis de bonne qualité est une
condition préalable à toute coloration.

Les techniques :
Dérnierement féxer le frottis en dessus de la flamme du
bec bensen SANS TROP LE CHAUFFER.

Manipulation 4 : coloration simple

Les bactéries sont colorées en bleu sombre. Cette coloration
est intéressante pour l’observation rapide des frottis mais
elle permet seulement l’étude de la morphologie des
bactéries.

Manipulation 5 : coloration de gram

Permet de distinguer les bactéries en gram positives et

gram négatives
 -Des bactéries colorées en violet foncé ; elles ont gardé
le violet elles sont dites Gram positif.
 -Des bactéries colorées en rose ou rouge pâle ; elles ont
perdu le violet elles sont dites Gram négatif.