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Faculté polydisciplinaire de Larache Année universitaire 2019/2020

Travaux dirigés
Analyses microbiologiques
Pr : Mounir HASSANI ZERROUK

Exercice 1:
150 colonies bactériennes ont poussé sur un milieu de culture solide ensemencé à partir de 0,1 ml prélevé à partir
d’une dilution de 10-5 d’un échantillon du sol. Combien de cellules par ml estime-t-on dans la culture d’origine ?

Exercice 2 :
On veut déterminer le nombre de bactéries vivantes dans un échantillon A. 0,01 ml de cet échantillon ont été
déposé à la surface d’une cellule de Thoma. Après 30 minutes de repos permettant la décantation des cellules, la
lame est examinée au microscope, au fort grossissement.

1. Calculer la concentration des cellules par ml sachant qu’on a compté 350 cellules dans 10 petits carrés dans
une solution 10 fois plus concentrée de l’urine originale.
Rappel :
La cellule de Thoma est une lame creuse au centre avec un quadrillage d’environ 400 petits carrés. Chaque petit
carré a une surface de 1/400 mm2. La distance entre la grille et la lamelle est de 1/10 mm.
2. Le dénombrement sur boite de pétri a montré que la charge microbienne était : 106/mL. Comparer et
interpréter ?

Exercice 3:
Dans un plan à 3 classes, pour les pâtisseries industrielles, les normes indiquent pour le critère coliformes : n=5,
m=10 UFC/g, c=2.
1. Indiquer pour chaque pâtisserie si elle est conforme à la norme ou pas. Justifier.
Pâtisserie 1 :
échantillon 1 : 40 UFC/g, échantillon 2 : 32 UFC/g, échantillon 3 : 56 UFC/g , échantillon 4 : 95 UFC/g,
échantillon 5= 28 UFC/g.
Pâtisserie 2 :
échantillon 1 : 5 UFC/g, échantillon 2 : 12 UFC/g, échantillon 3 : 10 UFC/g , échantillon 4 : 2 UFC/g,
échantillon 5 : 5 UFC/g .
Pâtisserie 3 :
échantillon 1 : 110 UFC/g , échantillon 2 : 2 UFC/g , échantillon 3 : 20 UFC/g , échantillon 4 : 33 UFC/g,
échantillon 5 : 5 UFC/g .

Exercice 4:
L'analyse bactériologique d'une boisson contaminée donne le tableau de résultats suivant, sachant
que l'on a ensemencé 0,1 ml de chaque dilution par boite de milieu de culture.
Dilution -1 -2 -3 -4
Essai 1 Inc 402 85 5
Essai 2 Inc 501 130 7
Essai 3 Inc 620 110 10
Inc : incomptable

1. Déterminer le nombre de bactéries par ml de boisson ?


Le dénombrement bactérien sur le même échantillon, par la méthode directe au microscope optique, a
donné 1.5.106 bactéries /ml,
2. Comparer les d eux résultats et interpréter.

Exercice 5:
Afin d’évaluer la qualité microbiologique d’un lot des produits alimentaires pasteurisés, des analyses
ont été réalisées et les résultats obtenus sont recueillis dans le tableau 1.

Tableau 1 : Résultats des analyses microbiologiques.

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Variable Unité 1 Unité 2 Unité 3 Unité 4 Unité 5

FMAT (UFC/g) 1,5. 102 1,7. 102 1,5. 103 1,6. 103 1,6. 102

Coliformes fécaux (MPN/g) <3 <3 10 10 10

Clostridium Perfringens (UFC/g) <10 <10 1,2. 10 <10 <10

Salmonelle Absent dans 25 g

S. aureus (UFC/g) <10 <10 1,5. 103 <10 <10

Moisissures (UFC/g) <10 <10 1,1. 103 1,2. 103 <10

Le tableau 2 regroupe les critères microbiologiques établis par la législation.

Paramètres n c m M

FMAT (UFC/g)* 5 2 104 105

Coliformes fécaux (MPN/g)* 5 2 <3 11

Clostridium Perfringens (UFC/g)* 5 2 102 103

Salmonelle** 5 0 0 --

S. aureus (UFC/g)** 5 2 102 103

Moisissures (UFC/g) 5 2 103 104

* Caractère recommandé

** Caractère obligatoire

1. En se basant sur les tableaux 1 et 2, discutez les résultats obtenus ?

2. Donner une conclusion ? (c. à. d est ce qu’on doit accepter le lot ou le refuser)

Exercice 6 :

Le dénombrement bactérien dans trois aliments différents a été réalisé par la méthode du MPN. A partir
de chaque aliment, une suspension de 1g de l’aliment broyé dans 10 ml d'eau physiologique stérile a été
préparée. Des séries de dilutions de 10-2 à 10-7 ont été préparées dans l’eau physiologique à partir de chaque
suspension d’aliment. Ensuite, 1 ml de chaque dilution préparée (10 -1 à 10-7) a été ensemencé dans un milieu de
culture spécifique, à raison de trois répétitions pour chaque dilution. Après incubation à 37°C pendant 1 jour, les
tubes positifs sont détectés par la présence de la turbidité:

Dilution -1 -2 -3 -4 -5 -6 -7
Aliment 1 +++ +++ +++ +++ ++- +-- ---
Aliment 2 +++ +++ ++- --- --- --- ---
Aliment 3 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++

1. Calculez pour chaque type d’aliment, le nombre de germes par gramme d’aliment.
2. Quel serait le résultat si le volume ensemencé était de 0,1 ml.

Tableau de Mc Grady (3 tubes par dilution)

Nombre MPN NombreMPN NombreMNP


Caracté- Caracté- Caracté-

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ristique ristique ristique

000 0,0 201 1,4 302 6,5


001 0,3 202 2,0 310 4,5
010 0,3 210 1,5 311 7,5
011 0,6 211 2,0 312 11,5
020 0,6 212 3,0 313 16,0
100 0,4 220 2,0 320 9,5
101 0,7 221 3,0 321 15,0
102 1,1 222 3,5 322 20,0
110 0,7 223 4,0 323 30,0
111 1,1 230 3,0 330 25,0
120 1,1 231 3,5 331 45,0
121 1,5 232 4,0 332 110,0
130 1,6 300 2,5 333 140,0
200 0,9 301 4