Quelques étapes de mon parcours • 1985 : Engagée au LCH du CHUV • 1989 : Responsable du laboratoire de sérologie transfusionnelle du CHUV • 2000 : Fusion avec le laboratoire de sérologie transfusionnelle du centre de transfusion de Lausanne -> UMT • 2004 : Responsable qualité • 2007 : Membre de la direction du SRTS VD • 2012 : Nouvelles tâches de direction Quelques constatations • 1989 : – Groupes sanguins en tubes et sur lames, avec des antisérums polyclonaux – Cartothèque avec plus de 120’000 cartes de groupes sanguins – Tests de compatibilité en 3 milieux – Transfusion de conserves et concentrés érythrocytaires, filtrés sur demande
• 2012 : – Détermination des génotypages par biologie moléculaire – Enregistrement informatique, antériorités, corrélations bloquantes de validation et de distribution – Type and screen – Concentrés plaquettaires traités pour l’inactivation des pathogènes Mes phrases favorites « à l’époque »
…En immuno-hématologie il y a plus d’exceptions que de
règles…
…Ne cherchez pas à tout comprendre ni à tout expliquer…
…Peu de notions sont indispensables...il faut réfléchir…et être
logique…. Le SRTS VD c’est: • Des activités de : – Collecte de sang complet ou de composants – Préparation de produits sanguins labiles – Récolte et conservation de cellules souches autologues – Echanges plasmatiques et prochainement saignées thérapeutiques – Distribution de PSL pour tout le canton de Vaud – Laboratoire d’immuno-hématologie patients – Recherche et développement Le SRTS VD c’est: • Des dépendances: – des autres SRTS pour répondre aux besoins transfusionnels du canton de Vaud – du SRTS BE pour l’achat du plasma ad transfusion – du SRTS BE pour les analyses de qualification biologique et de biologie moléculaire – du fractionneur pour la vente du plasma • Des partenariats: – CHUV – SRTS VS et BE (informatique) Le SRTS VD c’est:
• Certification ISO
• Accréditation ISO
• Certification JACIE
• Autorisation Swissmedic Les analyses immuno- hématologiques « patients »
• Gestion simplifiée du suivi des lots de réactifs • Archivage des résultats et des données • Standardisation • … En cas de panne…
• Procédures adaptées • Entrainement de l’ «œil » et du « cerveau » Antisérums monoclonaux
• En majorité IgM • Peu de variation d’un lot à l’autre • …
Mais… • Un même clone pour plusieurs fournisseurs Tests de plus en plus pointus
• Alloabsorption d’alloanticorps avec hématies natives sans LISS
La technique consiste à mélanger le sérum (ou plasma) avec des hématies choisies (portant l’antigène approprié pour l’alloanticorps que l’on veut absorber) en utilisant les conditions optimales de réaction pour l’anticorps en cause. Elle permet d’éliminer un ou plusieurs alloanticorps lors de mélange d’anticorps anti- érythrocytaires. • Test d’inhibition des anti-Chido et anti-Rodgers Les antigènes Chido et Rodgers se trouvent non seulement sur les hématies mais également dans le plasma, fixés sur la fraction C4 du complément. En présence d’anti-Chido ou anti-Rodgers l’ajout de plasma contenant les antigènes correspondant permet de négativer les réactions d’agglutination. Utiliser cette technique lors de suspicion d’anticorps anti-Chido/Rodgers, c’est-à-dire lors d’agglutination de la majorité des hématies-test en Coombs indirect et absence d’agglutination en technique enzymatique. La biologie moléculaire Phénotypes déduits du génotypage Mutation Génotypage Rhésus D dans le sang maternel
Objectifs : • N’injecter de l’anti-D aux mères Rhésus négatives que si le fœtus est Rhésus positif • Orienter les prises en charge des femmes enceintes déjà alloimmunisées Une histoire sans fin… L’antigène D
Du – D faible – D weak – D partiel – D variant - ….
D faible « année 2000 » • Procédure : • Préparer une suspension d’hématies à 3-5 % dans du NaCl à 0.9 % • Identifier 3 tubes • Pipetter une goutte d’anti-D dans les tubes 1 et 2 et une goutte de Rhésus contrôle dans le tube 3 • Ajouter 1 goutte d’hématies à analyser dans les tubes 2 et 3 et une goutte d’hématies Du contrôle dans le tube 1 • Incuber les tubes 15 - 30 min à 37°C • Laver trois fois • Ajouter 2 gouttes de sérum de Coombs dans chaque tube • Centrifuger • Lire • En cas d’absence d’agglutination, ajouter 1 goutte d’hématies contrôles par tube, centrifuger et lire. Si la réaction est négative, recommencer la procédure • Protocoler les résultats RHD$(1205)$ status%pa'ent% status%donneur% Phénotype%à%saisir%(1106)% Polymorphisme%nucléo'dique% Référence%épidémiologique% pos* pos* pos* weak*D*Type*1* 809T>G* Flegel*2006**(How*I*manage…)* pos* pos* pos* weak*D*Type*2* 1154*G>C* Flegel*2006*(How*I*manage…)* pos* pos* pos* weak*D*Type*3* 8C>G* Flegel*2006*(How*I*manage…)* pos* pos* pos* weak*D*Type*5* Flegel*2006*(How*I*manage…)* pos* pos* pos* weak**D*Type*31* 17C>T* Série*BSD* pos* neg* pos* weak*parHal*D*Type*4* see*also*DAR* Denomme*et*al.*2005* pos* neg* pos* weak*parHal*D*Type*11* 885G>T* Série*BSD* pos* neg* pos* weak*parHal*D*Type*15* "faux"*weak* pos* neg* pos* weak*parHal*D*Type*21* "faux"*weak* pos* neg* pos* del* 1227G>A*ou*IVS3+1G>A* Wagner*2001;*Flegel*et*al.*2009;*Körmöczi*et*al*2005* pos* neg* pos* parHal*DII* 1061C>A* Flegel*2002* pos* neg* pos* parHal*DIII* Flegel*2002* pos* neg* pos* parHal*DIV* Flegel*2002* pos* neg* pos* parHal*DV* Flegel*2002* pos* neg* pos* parHal*VI* Flegel*2002* pos* neg* pos* DFR* Denomme*et*al.*2005** pos* neg* pos* DNU* Flegel*2002* pos* neg* pos* DBT* Flegel*2002* pos* neg* pos* DNB* Flegel*2002*
pos* neg* neg* CdeS* Série*BSD*
pos* neg* neg* RHD\CE(2\9)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)* pos* neg* neg* RHD\CE(3\9)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)* pos* neg* neg* RHD\CE(3\7)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)* pos* neg* neg* RHD\CE(4\9)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)* pos* neg* neg* RHD\CE(8\9)* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)* pos* neg* neg* RHd*psi* Wagner**et*2001*(BMC*GeneHcs)* Les produits sanguins Produits sanguins: principales indications • Concentrés érythrocytaires – Maintenir les capacités de l’organisme à transporter et délivrer de l’oxygène (seuil en général: 80 g/l)
• Concentrés plaquettaires – Assurer l’hémostase primaire (nombre et fonction des plaquettes; seuil 10 G/l pour les patients en aplasie; 50 G/l pour les interventions chirurgicales lourdes)
• Plasma frais congelé
– Maintenir les facteurs de coagulation (facteurs V et XI); suivre TP (>60%), PTT (<45 s) et fibrinogène (> 1 g/l) Prélèvement de sang complet
• Volume prélevé 450 mL ± 50 mL
• Solution anticoagulante: 63 mL Centrifugation des poches Séparation des différents composants Ajout d’une solution additive
• Le SAG-M contient – du chlorure de sodium pour maintenir l’isotonicité – de l’adénine pour soutenir la production d’ATP et de 2,3-DPG – du glucose pour soutenir le métabolisme du globule rouge – du mannitol pour limiter l’hémolyse Filtration des concentrés érythrocytaires Déleucocytation systématique des CE
• Réduction des contaminations
• Réduction des réactions fébriles non
hémolytiques
• Réduction du risque d immunisation HLA
Congélation du plasma
• Livraison au fractionneur (pas de plasma
pour transfusion produit par le SRTS VD) Fabrication de concentrés plaquettaires à partir de buffy coat
• Récupérer les plaquettes contenues
dans une poche de sang total pour produire un concentré plaquettaire. • Il faut entre 4 et 6 buffy coat pour obtenir une dose thérapeutique de plaquettes (> 2.4 x 1011 plaquettes par poche) Extraction des plaquettes après centrifugation Prélèvements par aphérèse
• Concentrés plaquettaires • Plasma Les contrôles de qualité Traçabilité papier et / ou informatique Automatisation de la production Les tests de qualification biologique Tests effectués à chaque don • Tests sérologiques: détectent la présence de protéines d un pathogène donné, ou d anticorps contre ces protéines dans le sang du donneur.
• Tests de biologie moléculaire (NAT): détectent la présence
d ADN ou d ARN du pathogène dans le sang du donneur
supplémentaires (Hépatite A et Parvovirus B19) Les autres risques infectieux Sources de contamination bactérienne
• Bactériémie du donneur • Mauvaise désinfection de la peau du donneur • Pas d élimination des premiers millilitres prélevés • Rupture de stérilité des poches lors de la préparation des produits Pathogènes émergents
• Malaria • Rift Valley Fever • Yellow fever • Chikungunya • West Nile Virus • Dengue Mutation des virus
• Les réactifs utilisés pour la détection
sérologique ou en biologie moléculaire peuvent d un coup se révéler inefficaces pour détecter un virus muté Les mesures préventives Inactivation des pathogènes (Intercept)
Pour les concentrés plaquettaires:
• Ajout d amotosalen • Illumination (UV) • Retrait de l’amotosalen Inactivation des pathogènes pour le plasma ? • Seuls les plasmas des hommes peuvent être utilisés pour la transfusion • Les plasmas issus de sang complet devront être poolés avant traitement (volume minimal à respecter) -> le plasma des nouveaux donneurs ne pourra pas être utilisé (délai à respecter) • Le plasma devra être filtré • Les plasmas traités devront être splités • Prélèvements par plasmaphérèse (donneurs B et AB) Les bases de la sécurité transfusionnelle Les besoins en PSL Distribution de PSL par le SRTS VD Choix des CE à transfuser Les donneurs Vigilance donneurs La promotion du don & le marketing Magazine d’information
• Parution 2 fois/an • Env. 16 pages • Tirage 25’000x • Distribution via les pharmacies, Naville, hôpitaux, etc. Give-away : • Autocollants • Jeux de cartes • e-cleaners iPhone / iPad • Accroche-sacs • Porte-clé • Parapluies • Bloc-notes & crayons • Post-it • Stylos Quelques projets et actions à venir
• Présence sur les réseaux sociaux
• Attitude proactive vis-à-vis des donneurs, en particulier après le 1er don (ex. prise de nouvelles) • Ouverture un samedi matin par mois • Vaccination contre la grippe • Ouverture nocturne avant Noel • … • … • … merci
