Dans une colonne chromatographique de longueur L = 100 m, calculer:
1- Le volume Vm de la phase mobile dans cette colonne. 2- La vitesse moyenne u des molécules de la phase mobile. 3- Le volume de la phase stationnaire Vs. 4- La vitesse moyenne v des molécules de l’analyte. 5- Le volume de rétention Vr correspondant à l’analyte. 6- Quelle est la relation entre le facteur de rétention Kr, Vr et Vm ? - Calculer alors la valeur de Kr. 7- Quelle est la relation entre Kr et les vitesses moyennes u et v ?
Données: le temps mort: tm = 0.5 min, le temps de rétention de l’analyte: tr = 5 min, le débit de la phase mobile: D = 3 ml/min et le diamètre interne de la colonne est int = 0.02cm
EXERCICE 2
Deux colonnes chromatographiques, à phases stationnaires polaires, sont testées dans la
séparation et l’analyse d’un mélange de deux amines secondaires a et b par chromatographie en phase gazeuse. 1. Calculer le facteur de résolution pour le composé a et b dans le cas de la colonne 1 et 2. 2. Calculer le facteur de séparation et le facteur de résolution dans le cas de la colonne 1 et 2. 3. Calculer la valeur de l’efficacité dans le cas de la colonne 1 et 2. 4. Quelle est la meilleure colonne ( 1 ou 2). 5. A quel type de colonne chromatographique appartient chacune des colonnes 1 et 2 ? 6. Quel est le composé le plus polaire? 7. Quels seront les effets sur les temps se rétention des deux constituants dans le cas de l’accroissement de l’un des paramètres suivants : La longueur de la colonne, la polarité de la phase stationnaire et la température de la colonne. Données :
(m) Colonne 1 75 1.5 3.5 7 0.05 Colonne 2 3 0.2 1.3 2.8 0.125 Exercice 3 La séparation suivante a été obtenue par CLHP . Les conditions expérimentales sont: -Une colonne de 25 cm de long. - Le débit est de 1mL/min. - La phase stationnaire est apolaire. A partir du chromatogramme déterminer : a) le temps mort, et les temps de rétention des composés A , B et C. b) Quel est le composé le plus polaire ? c) L'efficacité pour les composés A, B et C d) L'efficacité moyenne de la colonne e) Le volume mort Vm de la colonne f) Les facteurs de rétention krA, krB et krC des composés A, B et C. g) Les pics A, B et , sont-ils bien séparés? Justifier votre réponse. h) La sélectivité α de la séparation. i) La résolution R de la séparation. Discuter les résultats. j) La résolution de Purnel (RP) de la séparation. k) Si la colonne mesure 30 cm, calculez le temps de rétention du dernier composé.
Exercice 4
Les temps de rétention de 2 herbicides A et B d’un mélange à séparer sont respectivement
égaux à 10,60 et 11,53 min sur une colonne de 25,0 cm. Une espèce non retenue passe sur la colonne en 1,20 min. Les largeurs (à la base) des pics de A et B sont respectivement égales à 1,05 et 1,15 min.
Calculer 1-La résolution de la colonne. 2-la séparation est elle bonne ? 3- Le nombre moyen de plateaux théoriques dans la colonne 4- La hauteur équivalente à un plateau théorique 5- La longueur de la colonne nécessaire pour obtenir une résolution de 1,5 6-La valeur de HETP nécessaire pour obtenir une résolution de 1.5 avec une colonne de 25 cm. 7- Le temps requis pour éluer la substance B sur cette nouvelle colonne. EXERCICE 5
Les coefficients de l’équation de Van Deemter sont déterminés à :
A = 10 cm, B = 0,144 cm . s , C = 10 s -3 2 -1 -3
a) Quelle est la vitesse linéaire moyenne de la phase mobile qui minimise la hauteur d’un plateau théorique? b) Quel serait la hauteur minimale équivalente à un plateau théorique de la colonne ?
II-
On considère deux points particuliers A et B sur cette courbe.
1- Au point A (débit = 1 ml/mn, U = 0,65 mm/s et h = 2), calculer le temps mort et le temps de rétention.
2- Même question au point B (débit = 2,75 ml/mn, U = 1,7 mm/s et h = 2,5).
