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S E Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 2011 15(1), 95-100

Optimalisation de l’extraction d’ADN génomique de la


morelle jaune (Solanum elaeagnifolium Cav.), une plante
invasive des milieux cultivés en région méditerranéenne
Julie Ripoll, Marie-Claude Bon, Walker Jones
European Biological Control Laboratory-ARS-USDA. Campus International de Baillarguet. CS90013. Montferrier sur Lez.
F-34980 Saint Gély du Fesc (France). E-mail : mcbon@ars-ebcl.org

Reçu le 26 mai 2010, accepté le 30 aout 2010.

L’origine géographique d’une plante invasive des milieux cultivés en région méditerranéenne, la morelle jaune, Solanum
elaeagnifolium Cav. (Solanaceae), doit être identifiée par l’analyse des ressemblances génétiques au moyen de marqueurs
microsatellites entre populations natives et introduites. Au préalable, une méthode efficace et peu couteuse d’extraction
d’ADN génomique à partir de feuilles déshydratées et riches en polysaccharides a été recherchée. Le protocole originel de
Doyle utilisant le détergent cationique, CTAB, a été optimisé avec succès pour permettre l’extraction d’ADN de qualité
significativement supérieure (rapport A260/280 de 1,8 et A260/230 de 1,7 à 2). Les rendements en quantité d’ADN extrait avec ce
protocole ont été supérieurs à ceux obtenus au moyen d’un kit commercial pour une qualité comparable de l’ADN extrait.
L’optimalisation du protocole a été validée par l’amplification de plusieurs loci microsatellites originellement développés sur
l’aubergine, Solanum melongena L.
Mots-clés. ADN, espèce invasive, Solanum elaeagnifolium, microsatellites, tissus foliaires, Nanodrop.

Optimization of the genomic DNA extraction method of silverleaf nightshade (Solanum elaeagnifolium Cav.), an
invasive plant in the cultivated areas within the Mediterranean region. The geographical origin of an invasive plant in the
cultivated area within the Mediterranean region, silverleaf nightshade, Solanum elaeagnifolium Cav. (Solanaceae) should be
identified through the analysis of genetic similarities between native and introduced populations using microsatellite markers.
Beforehand, an effective and less costly method for extracting genomic DNA from dehydrated and polysaccharide-rich leaves
was investigated. The original Doyle’s protocol based on the use of a cationic detergent, CTAB, was successfully optimized
in order to extract high quality DNA (A260/280 ratio of 1.8; A260/230 ratio of 1.7 to 2). The DNA yields obtained with this new
protocol were higher than those obtained with a commercial kit, although quality of the DNA extracted was comparable. The
improvement of the protocol was further proven by the amplification of several microsatellite loci first developed in eggplant,
Solanum melongena L.
Keywords. DNA, invasive species, Solanum elaeagnifolium, microsatellites, leaf tissue, Nanodrop.

1. Introduction Species in Europe) achevée en 2008 montre que 58 %


des plantes naturalisées en Europe sont présentes dans
L’intensification des échanges commerciaux, notam- les milieux cultivés (Chauvel et al., 2009). Le cas de
ment par transports aériens et maritimes, ainsi que les Solanum elaeagnifolium Cav. (Solanaceae), native des
migrations humaines contribuent à la dissémination états-Unis (sud-ouest des états-Unis, nord du Mexique
accidentelle, ou non, d’espèces hors de leur aire et potentiellement Argentine/Chili) illustre ce constat.
d’origine (Monty et al., 2009). Les populations Sa rapide dispersion au cours du 19e siècle en Europe
d’espèces, dites allochtones car introduites dans des (14 pays) dont le bassin méditerranéen, et ses impacts
nouveaux territoires, peuvent parfois devenir, en négatifs tant sur l’économie (compétition par rapport
l’absence de leur cortège parasitaire d’origine, des aux plantes cultivées, plante-hôte de certains virus des
envahisseurs préjudiciables aux écosystèmes et à la solanacées cultivées), sur l’environnement (réduction
biodiversité (Bossdorf et al., 2005; Sforza et al., 2007). de la biodiversité) et la santé humaine et animale ont
De fait, les milieux cultivés et anthropisés constituent les conduit l’Organisation Européenne et Méditerranéenne
premiers habitats colonisés par les plantes allochtones. pour la Protection des Plantes (OEPP) à la classer
L’étude européenne DAISIE (Delivering Alien Invasive comme organisme de quarantaine (Buck et al., 1960 ;
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Boyd et al., 1984 ; Ehret, 2006 ; Mekki, 2007 ; OEPP, terrain, dans l’aire d’introduction, soit six accessions
2007 ; Tscheulin et al., 2009). Un programme de grecques (Thessalonique, Lesvos A et B, Leukada
lutte biologique classique est envisagé pour certains et Péloponnèse A et B) et dans l’aire native, soit
pays de la région méditerranéenne dont les pays du trois accessions texanes, USA (LaVilla, Faysville et
Maghreb et la Grèce (Bouhache et al., 2004 ; Sforza Bayside). Seules, les dernières paires de feuilles sont
et al., 2007). La lutte biologique classique est définie prélevées puis déshydratées par Silica gel sans cobalt
comme l’introduction intentionnelle d’un agent de lutte pendant au moins une semaine, avant d’être rapportées
biologique exotique, ayant coévolué avec la plante, pour au laboratoire pour y être conservées avec le Silica gel
un établissement permanent et un contrôle à long terme en quarantaine.
(Eilenberg et al., 2001). Pour savoir si les populations
invasives ont subi des changements évolutifs liés à
la colonisation et pour trouver les ennemis naturels 2.2. Méthodes
phytophages les plus spécifiques et efficaces, il est
nécessaire de connaitre l’origine exacte des populations Extraction de l’ADN. Le protocole d’extraction
invasives et d’évaluer l’étendue de la diversité de référence est celui d’un kit commercial, Qiagen
génétique des populations à contrôler (Bossdorf et al., DNeasy Plant Mini Kit (Courtaboeuf, France), sans
2005 ; Ward et al., 2009). Les analyses de la diversité modification. Il limite la quantité de matériel sec à
génétique, de la structuration des populations ainsi extraire à 20 mg. Le protocole de base non commercial
que de l’évaluation des échanges entre les populations est celui de Doyle et al. (1987) à base de détergent
(migration, flux géniques) sont classiquement cationique CTAB (bromure d’hexadécyltriméthyl
appréhendées par des marqueurs moléculaires neutres ammonium) déjà utilisé par Murray et al. (1980). Les
comme les microsatellites (Roderick et al., 2003 ; Ward paramètres testés pour optimiser ce protocole sont
et al., 2009). Les microsatellites, séquences répétées la concentration en chlorure de sodium et en PVP
en tandem de période de une à six paires de bases, du tampon d’extraction, le mode de précipitation et
répartis sur l’ensemble du génome sont hautement de resuspension de l’acide nucléique. Le protocole
polymorphes et codominants (Li et al., 2002). Leur d’extraction optimisé est décrit comme suit, le
utilisation en génotypage via une PCR (Polymerase tampon d’extraction étant composé de 2 % (p/v) de
Chain Reaction) nécessite entre autre une bonne qualité CTAB ; 1,4 M NaCl ; 20 mM Na2EDTA ; 100 mM
d’ADN génomique. Seules, des études en phylogénie Tris-HCl (pH 8) et 1 % de bisulfite de sodium ajouté
moléculaire font état d’extraction d’ADN de morelle extemporanément :
jaune à partir de feuilles fraiches ou déshydratées – environ 20 mg de feuilles déshydratées mises en
en suivant le protocole de Doyle et al. (1987) sans suspension dans 1 ml de tampon d’extraction
indication de la qualité obtenue (Bohs et al., 2001 ; préchauffé à 60 °C sont broyées dans un mortier
Weese et al., 2007). Des essais préliminaires ont autoclavé,
montré qu’il était nécessaire d’optimiser la technique – le broyat est incubé à 60 °C au bain-marie pendant
d’extraction d’ADN compte tenu des facteurs suivants : 1 h avec une agitation manuelle et fréquente par
– la quantité et la qualité de l’ADN extrait en vue du inversion des tubes,
génotypage, – après une centrifugation rapide, 500 µl d’un mélange
– le cout, vu le nombre important d’échantillons à phénol/chloroforme/alcool isoamylique 25:24:1 sont
extraire, ajoutés au surnageant, l’ensemble est agité,
– un protocole utilisable par différents laboratoires centrifugé à 10 000 g pendant 10 min à 4 °C,
dont certains sont peu équipés, – à la phase aqueuse sont ajoutés 500 µl d’un mélange
– la nécessité de travailler sur du matériel déshydraté. chloroforme/alcool isoamylique 24:1, l’ensemble
après agitation est centrifugé à 10 000 g pendant
Dans cette étude, nous avons développé un 10 min à 4 °C, 
protocole simple, efficace permettant d’extraire de – à la phase aqueuse, sont ajoutés 2/3 de volume
façon homogène de l’ADN génomique de qualité à d’isopropanol, le mélange est conservé à -20 °C
partir de feuilles déshydratées de morelle jaune. pendant 30 min;
– après précipitation, l’ensemble est centrifugé à
10 000 g pendant 10 min à 4 °C,
2. Matériel et méthodes – après élimination du surnageant, le culot est séché
dans un évaporateur concentrateur centrifuge sous
2.1. Matériel végétal vide (Speed Vac Savant Instruments, Farmingdale,
USA) pendant 5 min et resuspendu en présence de
L’extraction de l’ADN génomique de la morelle 500 µl de NaCl 1M et de RNase A à la concentration
jaune a été réalisée à partir de plantes récoltées sur le finale de 800 µg.ml-1 pendant 30 min à 37 °C;
Optimalisation de l’extraction d’ADN de la morelle jaune 97

– 500 µl d’un mélange chloroforme/alcool iso- plus cités historiquement sont ceux de Murray et al.
amylique 24:1 sont ensuite ajoutés, les tubes agités (1980), Dellaporta et al. (1983), Doyle et al. (1987) et
manuellement et centrifugés à 10 000 g pendant Rogers et al. (1988). Même si ces méthodes ont prouvé
10 min à 4 °C, leur efficacité, elles sont rarement universellement
– à la phase aqueuse sont ajoutés 2/3 de volume applicables en tant que telles à tous les taxons et types
d’isopropanol, le mélange est conservé à -20 °C de matériels. Dans cette étude, nous avons cherché à
pendant 30 min, optimiser certaines étapes du protocole de Doyle et al.
– après précipitation, l’ensemble est centrifugé à (1987) en vue de proposer une méthode d’extraction
10 000 g pendant 10 min à 4 °C, d’ADN de qualité, relativement simple, peu couteuse,
– après élimination du surnageant, le culot d’ADN applicable par plusieurs coopérateurs de pays où la
est séché à l’évaporateur concentrateur centrifuge morelle jaune est un problème pour l’écologie et
sous vide pendant 5 min et resuspendu dans 30 µl de l’agriculture.
TE (10 mM Tris (pH 8), 20 mM Na2EDTA) toute Cette mise au point a porté sur 180 extractions à
la nuit à 4 °C. Un témoin d’extraction sans matériel partir d’accessions différentes (Texas - États-Unis,
biologique est systématiquement inclus dans la Grèce). Les quantités d’ADN ainsi que les ratios
procédure. d’absorbance 260/280 et 260/230 sont comparés entre
le kit commercial, le protocole de référence de Doyle
La quantité et la qualité de l’ADN (1,5 µl) sont et al. (1987) et le protocole optimisé (Tableau 1).
estimées par dosage au spectrophotomètre Nanodrop Les ajustements apportés au cours de cette
(Thermo Scientific NanoDropTM8000). étude ont permis l’obtention d’ADN en quantités
significativement plus importantes avec le nouveau
Analyses statistiques. Pour chacun des protocoles et protocole ou celui de Doyle par comparaison au kit
accessions (grecques ou texanes) testés, les quantités commercial et ce, quelle que soit l’accession. Les ADN
en ADN, les ratios de densités optiques A260/A280 extraits selon Doyle présentent d’importantes quantités
et A260/A230 sont comparés par analyse statistique d’ARN en dépit du traitement RNase.
à l’aide du logiciel XLstat (Addinsoft). La normalité Le ratio 260/280 est de l’ordre de 1,8 avec le
des données est testée avec un test de Shapiro. Pour les protocole proposé et ce, quel que soit le type d’accession.
variables ne suivant pas une loi normale (p > 0,01), les Il correspond à une valeur attendue de l’ADN purifié
données sont traitées à l’aide du test non paramétrique de 1,8 à 2 (Sambrook et al., 1989). Seules les valeurs
de Kruskal-Wallis avec correction de Bonferroni qui des populations grecques obtenues pour le traitement
permet de garantir un risque alpha d’erreur de 5 % lors Doyle sont significativement inférieures, indiquant une
de comparaisons multiples. possible contamination protéique.
Le ratio 260/230 varie de 1,4 à 1,95 pour le kit
Amplification des marqueurs microsatellites. La commercial et de 0,99 à 1,11 pour celui de Doyle,
qualité de l’ADN est estimée par l’amplification indiquant une forte contamination par des composés
de 16 loci microsatellites dont EM131 développés comme les polysaccharides qui absorbent à 230 nm
par Nunome et al. (2003) sur l’aubergine, Solanum (Varma et al., 2007). Quelle que soit l’accession
melongena L., espèce phylogénétiquement très proche considérée, il est toujours supérieur et proche de la
de la morelle jaune (Weese et al., 2007). Le volume valeur attendue 2 à 2,2 pour le protocole optimisé
pour la réaction PCR finale est de 10 µl et contient du en comparaison au kit commercial, bien que non
Mutiplex Master Mix Qiagen 1X, 0,3 µM de l’amorce significativement différent. Quelle que soit l’accession
sens et antisens et 10 ng d’ADN. Les conditions de la considérée, le traitement retenu a permis d’obtenir de
PCR réalisée dans un thermocycleur Perkin Elmer 9700 façon plus reproductible des ratios 260/280 et 260/230
sont les suivantes : dénaturation à 95 °C et activation proches des valeurs théoriques attendues. Le protocole
de la Taq pendant 5 min et 30 cycles de 30 sec à proposé est le plus approprié pour une application de
94 °C, 30 sec à 52 °C et 1 min à 72 °C, suivi d’une génotypage d’un échantillonnage très divers.
élongation finale à 72 °C pendant 7 min. Le produit Cette qualité de l’ADN extrait a aussi été testée
PCR est déposé sur gel d’agarose à 2 % en présence de par amplification et visualisation sur gel de loci
SybrSafe. Les gels sont visualisés sous UV à 254 nm microsatellites dont EM131 (Figure 1).
au transilluminateur (Fisher Bioblock Scientific). Les paramètres testés pour optimiser ce protocole
par rapport à celui de Doyle et al. (1987) sont listés
dans le tableau 2.
3. Résultats et discussion Les extraits initiaux obtenus selon le protocole de
Doyle et al. (1987) contenaient de grandes quantités
De nombreux protocoles d’extraction d’ADN de plantes d’ARNs, de protéines, de polysaccharides et dans une
existent dans la littérature (Varma et al., 2007) dont les moindre mesure des pigments, autant de composants
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Tableau 1. Comparaison multiple des moyennes pour les trois traitements (Kit commercial, Doyle et al., 1987 et Protocole
retenu) pour chaque accession (grecque ou texane) — Multiple comparisons of means for the three treatments (Commercial
kit, Doyle et al., 1987 and selected protocol) for each accession (Greek or Texan).
Traitements Quantité d’ADN ng.mg-1 matière sèche ± S 260/280 ± S 260/230 ± S
Accessions de Grèce
Kit commercial 146 ± 54a 1,77 ± 0,05b 1,39 ± 0,30b
Doyle et al., 1987 1 182 ± 480c 1,68 ± 0,14a 0,99 ± 0,27a
Protocole retenu 620 ± 269b 1,82 ± 0.06b 1,70 ± 0,28b
Accessions du Texas
Kit commercial 399 ± 214a’ 1,84 ± 0,04a’ 1,95 ± 0,24b’
Doyle et al., 1987 1 960 ± 939c’ 1,81 ± 0,11a’ 1,11 ± 0,94a’
Protocole retenu 1 245 ± 806b’ 1,84 ± 0,04a’ 1,99 ± 0,27b’
L’effectif n = 30 pour chaque paramètre testé (quantité, ratios 260/280 et 260/230) — Sample size = 30 for each parameter tested
(quantity, ratios 260/280 and 260/230) ; S = écart type — standard deviation ; L’ordre alphabétique des lettres fournit le classement des
moyennes par ordre croissant, une même lettre indiquant que les moyennes ne sont pas significativement différentes au seuil retenu
(p = 0,05) — The alphabetical order of the letters is classifying the means by increasing order, a same letter indicating that means are
not significantly different (p = 0.05).

Ladder Doyle & Kit commercial Protocole Ladder couteux (Loomis, 1974 ; Aljanabi et al., 1999). L’ajout
Témoin PCR

Doyle retenu de PVP, aussi recommandé dans plusieurs protocoles


pour l’adsorption des composés phénoliques à pH bas,
n’est pas apparu nécessaire dans cette étude (Peterson
et al., 1997). Pour des concentrations élevées, le PVP
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 co-précipite avec l’ADN et apparait alors comme un
contaminant (Varma et al., 2007). Les polysaccharides
Figure  1. Visualisation sur gel d’agarose 2  % du locus sont particulièrement problématiques car co-précipitent
EM131 amplifié à partir d’une même concentration d’ADN avec l’ADN. Ils rendent les pipetages et la migration sur
extrait de deux échantillons grecs et un texan pour les trois gel difficiles, causent des anomalies dans les cinétiques
protocoles  —  Visualization on a 2% agarose gel of the de réassociation et interfèrent avec les activités
locus EM131 amplified from DNAs at similar concentration. enzymatiques telles que les ligases, nucléases (Varma
DNAs have been extracted from two Greek and one Texan
et al., 2007). L’addition de NaCl à une concentration
samples for the three protocols.
supérieure à 0,5 M avec le CTAB est connue pour
De gauche à droite : marqueur de poids moléculaire 1 Kb (Smart éliminer les polysaccharides (Fang et al., 1992) et a une
Ladder SF, Eurogentec), 1 à 3 Doyle, 4 à 6 kit commercial, incidence sur les amplifications par PCR (Kawata et al.,
7 à 9 protocole retenu, 10 = témoin négatif de PCR — From 2003). Les concentrations variant de 0,7 à 6 M dépendent
left to right: 1 kb molecular weight marker (Smart Ladder SF, de la plante (Puchoda et al., 2004). Les sels comme NaCl
Eurogentec), 1 to 3 Doyle, 4 to 6 commercial kit, 7 to 9 selected
sont ajoutés pour moduler la concentration des cations
protocol, 10 = negative control of PCR .
dans le tampon d’extraction. Des extractions au phénol-
chloroforme ont amélioré les quantités d’ADN extrait
qui interfèrent avec l’ADN et restent difficiles à éliminer. ainsi que leur qualité par rapport à un lavage chloroforme
La morelle jaune est riche en glycoalcaloïdes comme la seul. Ces lavages avec des solvants organiques favorisent
solanine et solasonine (Boyd et al., 1984 ; Knight et al., l’élimination des protéines dont la polarité dans ces
2003) mais aussi de polysaccharides comme d’autres phases organiques change. La centrifugation à 4 °C
Solanum dont S. nigrum L. (Stankiewicz et al., 2000). au lieu de 25 °C favorise l’obtention d’une interphase
Des antioxydants sont communément utilisés pour limiter plus compacte entre les phases aqueuses et organiques,
l’action des polyphénols qui, après oxydation, sont liés soit après le phénol ou le chloroforme, permettant une
de façon covalente aux protéines et acides nucléiques au meilleure séparation. Ces résultats corroborent ceux
cours de l’homogénéisation. Chez la tomate, Peterson obtenus sur le cotonnier par Benbouza et al. (2006).
et al. (1997) avaient déjà relaté la présence de quantités L’utilisation d’un mélange acétate d’ammonium/
importantes de polyphénols. L’un des antioxydants les éthanol pour précipiter l’ADN entraine la formation
plus utilisés, le β-mercaptoéthanol, a été avantageusement d’un précipité blanchâtre, y compris pour le témoin,
remplacé par le bisulfite de sodium, non toxique et moins attribuable au CTAB, bien que celui-ci soit relativement
Optimalisation de l’extraction d’ADN de la morelle jaune 99

Tableau  2. Paramètres testés pour les étapes importantes de l’extraction de l’ADN en référence au protocole de
Doyle — Parameters tested for the main steps of the DNA extraction protocol with reference to Doyle’s protocol.
étape Doyle et al., 1987 Gamme testée Protocole final
Tampon 1,4 M 0,7 ; 1,4 ; 2 M 1,4 M
d’extraction : 0,2 % β-mercaptoéthanol 1, 2, 3 % sodium bisulfite 1 % sodium bisulfite
NaCl antioxydant 0 % PVP 360 0, 1, 2, 3 % (p/v) PVP 360 0 % PVP 360
Lyse 60 °C pendant 1 h - 60 °C pendant 1 h
Purification Chloroforme/alcool isoamylique Phénol/chloroforme/alcool Phénol/chloroforme/alcool
par solvant (24:1) isoamylique (25:24:1) & isoamylique (25:24:1) &
organique chloroforme/alcool isoamylique chloroforme/alcool
(24:1) ou chloroforme/alcool isoamylique (24:1)
isoamylique (24:1)
Centrifugation 6 000 g, 10 min, 25 °C 4 °C, 25 °C 10 000 g, 10 min, 4 °C
Précipitation Isopropanol, 25 °C Acétate sodium & éthanol, Isopropanol, -20 °C
ADN isopropanol -20°C
Lavage après éthanol 76 %, éthanol 70° -
précipitation acétate d’ammonium
Resuspension Tampon TE et RNase A TE ou NaCl 1 M et RNase A NaCl 1 M et RNase A
ADN & RNase (10 µg.ml-1) (10-200-800 µg.ml-1) (800 µg.ml-1)
Purification - Chloroforme/alcool isoamylique Chloroforme/alcool
(24:1) isoamylique (24:1)

soluble dans l’éthanol. Il a été avantageusement Remerciements


remplacé par l’isopropanol, réduisant le précipité blanc
et a permis d’améliorer considérablement la qualité de Les auteurs remercient Javid Kashefi (EBCL, Thessalonique,
l’ADN. Malgré l’utilisation d’isopropanol en première Grèce) et Randy Coleman (USDA-ARS, USA) pour les
précipitation, un précipité mucilagineux est toujours récoltes et l’envoi du matériel végétal, Mélanie Jeanneau et
obtenu, à l’exception du témoin. Ces mucilages, de nature Fatiha Guermache (EBCL) pour leurs conseils techniques
exopolysaccharidique, sont composés de polymères de et Dominique Coutinot (EBCL) pour l’obtention du permis
glycoprotéines. Très présents dans plusieurs groupes de d’importation et de détention de ce matériel de quarantaine
plantes, dont les plantes succulentes, ils sont facilement (10LR013) et enfin, le Centre de Biologie et de Gestion des
détectables en phase de resuspension dans le TE ou après Populations (CBGP) à Montpellier en France pour l’utilisation
précipitation par l’isopropanol (Cota-Sanchez et al., de son Nanodrop.
2006). La contamination de l’ADN par ces mucilages
induirait des amplifications aléatoires, voire inhiberait Abréviations
les PCR (Fang et al., 1992 d’après Cota Sanchez et al.,
2006 ; Ghosh et al., 2009). La suspension de l’ADN dans CTAB : Bromure d’hexadécyltriméthyl ammonium
une solution de NaCl 1 M plutôt que dans du TE a permis PVP : Polyvinylpyrrolidone 360
d’éliminer ce culot gélatineux. L’utilisation de tampon
très salin pour la resuspension de l’ADN précipité Bibliographie
permettrait non seulement de réduire la viscosité du
mucilage, mais aussi augmenterait la spécificité de la Aljanabi S.M., Forget L. & Dookun A., 1999. An improved rapid
RNase comme rapporté dans Chen et al. (2004) et Ghosh protocol for the isolation of polysaccharide and polyphenol-
et al. (2009). free sugarcane DNA. Plant Mol. Biol. Rep., 17, 1-8.
Les modifications apportées au protocole de base de Benbouza H., Baudoin J.-P. & Mergeai G., 2006. Amélioration
Doyle et al. (1987) ont permis de proposer un protocole de la méthode d’extraction d’ADN au CTAB appliquée aux
d’extraction d’ADN de bonne qualité et de qualité feuilles de cotonnier. Biotechnol. Agron. Soc. Environ., 10,
constante pour des échantillons très divers en vue de 73-76.
génotypage par microsatellites d’un grand nombre de Bohs L. & Olmstead R.G., 2001. A reassessment of Normania
populations qui sera réalisé ultérieurement par analyse and Triguera (Solanaceae). Plant Syst. Evol., 228, 33-48.
des fragments sur séquenceur capillaire. De plus, ce Bossdorf O. et al., 2005. Phenotypic and genetic differentiation
protocole s’avère relativement simple et moins couteux between native and introduced plant populations.
qu’un kit commercial. Oecologia, 144, 1-11.
100 Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 2011 15(1), 95-100 Ripoll J., Bon M.-C. & Jones W.

Bouhache M., Baye Y., Ameur A. & Taleb A., 2004. Mekki M., 2007. Biology, distribution and impacts of
Quelques éléments de la biologie de la morelle jaune. In : silverleaf nightshade (Solanum elaeagnifolium Cav.).
12e Colloque international sur la biologie des mauvaises EPPO Bull., 37, 114-118.
herbes, 31.08-02.09.2004, Dijon, France, 20-31. Monty A. & Mahy G., 2009. Évolution des traits d’histoire
Boyd J.W., Murray D.S. & Tyrl R.J., 1984. Silverleaf de vie lors des invasions végétales. Biotechnol. Agron.
nightshade, Solanum elaeagnifolium, origin, distribution, Soc. Environ., 13, 449-458.
and relation to man. Econ. Bot., 38(2), 210-217. Murray M. & Thompson W.F., 1980. Rapid isolation of high
Buck W.B., Dollahite J.W. & Allen T.J., 1960. Solanum molecular weight plant DNA. Nucl. Acids Res., 8, 4321-
elaeagnifolium, silver-leafed nightshade poisoning in 4325.
livestock. J. Am. Vet. Med. Assoc., 137, 348-351. Nunome T., Suwabe K., Iketani H. & Hirai M., 2003.
Chauvel B. & Fried G., 2009. Dans la jungle des milieux Identification and characterization of microsatellites in
cultivés. Pour la Science, 65, 32-37. eggplant. Plant Breeding, 122, 256-262.
Chen R.H. & Chen W.Y., 2004. Rheological properties of OEPP/EPPO, 2007. Solanum elaeagnifolium. Data sheets
the water soluble mucilage of a green laver, Monostroma on quarantine pests. EPPO Bull., 37, 236-245, http://
nitidum. J. Appl. Phycol., 13, 481-488. www.eppo.org, (08.04.2010).
Cota-Sanchez J.H., Remarchuk K. & Ubayasena K., 2006. Peterson D.G., Boehm K.S. & Stack S.M., 1997. Isolation
Ready-to-use DNA extracted with a CTAB method of milligram quantities of nuclear DNA from tomato
adapted for herbarium specimens and mucilaginous (Lycopersicon esculentum), a plant containing high
plant tissue. Plant Mol. Biol. Rep., 24, 161-167. levels of polyphenolic compounds. Plant Mol. Biol.
DAISIE (European Invasive Alien Species Gateway), 2008. Rep., 15, 148-153.
Solanum elaeagnifolium, http://www.europe-aliens.org/ Puchoda D., Shahnoo S.-U. & Khoyratty S., 2004. Genomic
speciesFactsheet.do?speciesId=, (08.10.2010). DNA extraction from Victoria amazonica. Plant Mol.
Dellaporta S.L., Wood J. & Hicks J.B., 1983. A plant DNA Biol. Rep., 22, 195a-195j.
minipreparation: version II. Plant Mol. Biol. Rep., 1(4), Roderick G. & Navajas M., 2003. Genes in new
19-21. environments: genetics and evolution in biological
Doyle J.J. & Doyle J.L., 1987. A rapid DNA isolation control. Nat. Rev. Genet., 4, 889-899.
procedure for small quantities of fresh leaf tissue. Rogers S.O. & Bendich A.J., 1988. Extraction of DNA from
Phytochem. Bull., 19, 11-15. plant tissues. In: Gelvin S.B. & Schilperoort R.A., eds.
Ehret P., 2006. Plantes exotiques envahissantes en France Plant molecular biology manual, A6. Boston, MA, USA:
métropolitaine. Quelles observations pour quelles Kluwer Academic Publishers, 1-10.
interventions ? In : AFFP, 1ère Conférence sur l’entretien Sambrook J., Fritsch E.F. & Maniatis T., 1989. Molecular
des espaces verts, jardins, gazons, forêts, zones cloning. A laboratory manual. Vol.3. Cold Spring
aquatiques et autres zones non agricoles, 11-12.10.2006, Harbor, NY, USA: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Avignon, France, 1-7. Sforza R. & Jones W.A., 2007. Potential for classical
Eilenberg J., Hajek A. & Lomer C., 2001. Suggestions biocontrol of silverleaf nightshade in the Mediterranean
for unifying the terminology in biological control. bassin. EPPO Bull., 37, 156-162.
BioControl, 46, 387-400. Stankiewicz M., Gadamski G. & Gawronski S.W., 2000.
Fang G., Hammer S. & Grumet R., 1992. A quick and Genetic variation and phylogenetic relationships of
inexpensive method for removing polysaccharides from triazine-resistant and triazine susceptible biotypes of
plant genomic DNA. Biotechniques, 13, 52-57. Solanum nigrum – analysis using RAPD markers. Weed
Ghosh R., Paul S., Ghosh S.K. & Roy A., 2009. An Res., 41, 287-300.
improved method of DNA isolation suitable for PCR- Tscheulin T., Petanidou T., Potts S.G. & Settele J., 2009.
based detection of begomoviruses from jute and other The impact of Solanum elaeagnifolium, an invasive
mucilaginous plants. J. Virol. Methods, 159, 34-39. plant in the Mediterranean, on the flower visitation and
Kawata M. et al., 2003. Analysis of extraction buffer seed set of the native co-flowering species Glaucium
components from plant tissue by polymerase chain flavum. Plant Ecol., 205, 77-85.
reaction. Anal. Biochem., 318, 314-317. Varma A., Padh H. & Shrivastava N., 2007. Plant genomic
Knight A.P. & Walter R.G., 2003. A guide to plant poisoning DNA isolation: an art or a science. Biotechnol. J., 2, 386-
of animals in North America. Jackson, WY, USA: Teton 392.
NewMedia Publisher, http://www.ivis.org, (08.04.2010). Ward S.M. & Jasienuck M., 2009. Review: sampling weedy
Li Y.C. et al., 2002. Microsatellites: genomic distribution, and invasive plant populations for genetic diversity
putative functions and mutational mechanisms: a review. analysis. Weed Sci., 57, 593-602.
Mol. Ecol., 11, 2453-2465. Weese T.L. & Bohs L., 2007. A three-gene phylogeny of the
Loomis W.D., 1974. Overcoming problems of phenolics genus Solanum (Solanaceae). Syst. Bot., 32(2), 445-463.
and quinones in the isolation of plant enzymes and
organelles. Methods Enzymol., 3l, 528-545. (37 réf.)