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TÍTULO
Riobamba - Ecuador
Junio, 2020
UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ÍNDICE
RESUMEN...................................................................................................................................
Palabras clave:..........................................................................................................................
INTRODUCCIÓN....................................................................................................................1
OBJETIVOS..............................................................................................................................2
Objetivo general......................................................................................................................2
Objetivos específicos...............................................................................................................2
MARCO TEÓRICO.................................................................................................................3
Inmunocromatografia..............................................................................................................3
Fijación de complemento........................................................................................................4
ELISA......................................................................................................................................5
Elisa no competitivos.....................................................................................................................6
ELISA Sandwich............................................................................................................................7
ELISA competitivo.........................................................................................................................7
MATERIAL Y MÉTODOS (PROCEDIMIENTOS)............................................................8
BIBLIOGRAFÍA.........................................................................................................................
ANEXOS......................................................................................................................................
RESUMEN
Las reacciones serológicas se definen como reacciones antígeno anticuerpo que puede ser
observada en diferentes pruebas serológicas como como la fijación de complemento,
inmunocromatografía y ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (Elisa) cada una de estas
pruebas tiene como objetivo el estudio serológico de enfermedades infecciosas, para la
práctica se realizó un análisis serológico basado en inmunocromatografía para la detección de
HCG (gonadotropina coriónica humana) en suero o plasma para lo cual se siguió las
indicaciones descritas en el inserto obteniendo resultado positivos o negativo según lo indique
la prueba , que tiene como fundamento la migración de la muestra a través de una membrana
de nitrocelulosa en la cual la muestra es añadida en la zona del conjugado, el cual está
formado por un reactivo de detección unido a un anticuerpo específico contra uno de los
epítopos del antígeno que se desea detectar en la muestra del paciente. Si la muestra contiene
el antígeno en este caso la HCG, este se unirá al conjugado formando un complejo inmune y
migrará a través de la membrana de nitrocelulosa obteniendo un resultado positivo mientras
que si el antígeno problema ( HCG) no está presente en la muestra, migrarán el conjugado y
la muestra sin unirse es decir un resultado negativo
INTRODUCCIÓN
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Las reacciones de ELISA van a ser técnicas inmunológicas que utilizan marcadores, los
anticuerpos y antígenos marcado con sustancias de actividad propia amplifican el poder de la
prueba, incrementando su sensibilidad. Se basa en la propiedad de algunos anticuerpos y
antígenos de ser absorbidos a un medio sólido que les permite construir una secuencia
ordenada de material biológico (anticuerpo, antígeno, anticuerpo conjugado con enzima) y
que puede ser visualizada por la reacción de color que se produce al agregar el sustrato
específico para la enzima que se encuentra conjugada al anticuerpo, permitiendo así una
adecuada cuantificación del antígeno.[ CITATION 2LE \l 3082 ]
OBJETIVOS
Objetivo general
Analizar los fundamentos de las técnicas inmunocromatografía, fijación de complemento y
enzimoinmunoensayo (Elisa) y ejecutar una prueba serológica basada en
inmunocromatografía siguiendo las recomendaciones del fabricante e interpretando
correctamente los resultados para contribuir al diagnóstico clínico
Objetivos específicos
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MARCO TEÓRICO
Inmunocromatografia
Es una técnica muy sencilla para la detección de todo tipo de proteínas con carácter
antigénico. Su rapidez y su fiabilidad hacen que su uso se extienda cada vez más, tanto para el
diagnóstico de parámetros bioquímicos como microbiológicos. Sobre todo se emplea como
método de screening, de modo que las pruebas con resultado positivo se confirman con otra
técnica analítica que valide el diagnóstico.
Tiene además, la ventaja de que pueden usarse todo tipo de muestras: sangre completa, suero,
heces, etc., en función del antígeno buscado. La preparación de la muestra suele ser muy
sencilla: solo necesita diluirse con un tampón de extracción que aumenta la fluidez de la
muestra y facilita su recorrido a través de la membrana.
La prueba utiliza como soporte una tira de nitrocelulosa, que puede ir dentro de una cascada o
en forma libre.[ CITATION Rom16 \l 2058 ]
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Si la muestra problema contiene los antígenos buscados, estos reaccionarán con los
anticuerpos libres marcados, dando lugar a complejo Ag-Ac. Al estar en un entorno fluido,
estos complejos migran por capilaridad a través de la membrana y se encuentran con la banda
de anticuerpos fijados no marcados. Se forma así el complejo Ag-Ac. Este complejo es visible
en forma de banda coloreada.
Los anticuerpos marcados libres siguen migrando por la membrana, ya que están en exceso y
se encuentran con los anticuerpos anti- Ig de conejo, dando lugar a otro complejo visible en
forma de banda coloreada. Esta última banda sirve de control para asegurar el correcto
desarrollo de la prueba y debe ser siempre positiva.
En el caso que la muestra no contenga el antígeno buscado, el resultado será negativo para la
banda de los anticuerpos fijados no marcados y será positiva para la banda control. [ CITATION
Rom16 \l 2058 ]
Fijación de complemento
Una propiedad importante del sistema del complemento es que sus componentes son
enzimáticamente alterados durante la reacción, de modo que no reaccionarán en una nueva
secuencia de reacciones, es decir si el complemento es consumido durante las reacciones
antígeno-anticuerpo esto es llamado fijacion de complemento y ocurre cuando un anticuerpo
de tipo IgG o IgM reacciona con el antígeno en presencia de complemento, aun cuando éste
no sea requerido en la reacción.[ CITATION Tor07 \l 2058 ]
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En la segunda fase se añade el sistema indicador que consiste en glóbulos rojos de carnero y
anticuerpos contra glóbulos rojos de carnero. La ocurrencia de hemólisis indica que el
complemento no fue utilizado por lo tanto, en la fase 1 no se ha producido una reacción Ag-
Ac específica.
En cambio, la ausencia de hemólisis, indica que el complemento ha sido fijado y por lo tanto
que en la fase 1 se ha producido una reacción Ag-Ac, en este caso se considera una reacción
de fijación del complemento positiva, mientras que en el primer caso se considera negativa la
reacción de fijación de complemento.
Utilizando un antígeno conocido, esta técnica puede ser empleada para detectar y medir
anticuerpos presentes en sueros. Al ocurrir la reacción del antígeno con los anticuerpos del
suero, ésta reacción Ag-Ac se puede poner de manifiesto mediante una prueba de fijación de
complemento[ CITATION Tor07 \l 2058 ]
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ELISA
El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) se utiliza con frecuencia para medir la
presencia y/o concentración de un antígeno, anticuerpo, péptido, proteína, hormona u otra
biomolécula en una muestra biológica.
Se han adaptado diferentes protocolos ELISA para medir las concentraciones de antígenos en
una variedad de muestras experimentales, pero todos tienen el mismo concepto básico.
La elección del tipo de ELISA para realizar, indirecta, sándwich o competitiva, depende de
una serie de factores, incluyendo la complejidad de las muestras a probar y los anticuerpos
específicos de antígeno disponibles para su uso. El ELISA indirecto se utiliza con frecuencia
para determinar el resultado de una respuesta inmunológica, como la medición de la
concentración de un anticuerpo en una muestra. El sándwich ELISA es el más adecuado para
analizar muestras complejas, como sobrenadantes de cultivo de tejido, donde el analito, o
antígeno de interés, es parte de una muestra mixta.
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Por último, el ELISA competitivo se utiliza con mayor frecuencia cuando sólo hay un
anticuerpo disponible para detectar el antígeno de interés. Los ELISA competitivos también
son útiles para detectar un pequeño antígeno con un solo epítopo de anticuerpos que no puede
acomodar dos anticuerpos diferentes debido a la obstrucción estática..[ CITATION Sul \l 2058 ]
Elisa no competitivos
La IgM puede estudiarse previa absorción de los anticuerpos IgG, aunque este isotipo debe
evaluarse preferentemente con ensayos de captura IgM. Los ensayos indirectos presentan una
alta detectabilidad que depende de la densidad de epítopos de relevancia diagnóstica presentes
en la fase sólida.[ CITATION Fel12 \l 2058 ]
ELISA Sandwich
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Los ensayos sándwich doble antígeno, son usados para la detección de anticuerpos y
son muy útiles para la evaluación de la respuesta inmune inducida por vacunas; en
estos ensayos, al igual que en los indirectos, los antígenos capturan los anticuerpos,
pero en esta ocasión en lugar de un conjugado anti-inmunoglobulina-enzima, usamos
antígeno-enzima, de esta forma se alcanza la máxima sensibilidad y detectabilidad al
no ser necesario diluir las muestras; sin embargo, detectamos todas las clases de
inmunoglobulinas, lo que en ocasiones no es conveniente.[ CITATION Fel12 \l 2058 ]
ELISA competitivo
Los pasos de un ELISA competitivo son diferentes de los utilizados en ELISA indirecto y
sándwich, siendo la principal diferencia el paso de unión competitivo entre el antígeno de
muestra y el antígeno "add-in". El antígeno de la muestra se incuba con el anticuerpo primario
sin etiquetar. Estos complejos de anticuerpos y antígenos se añaden a la placa ELISA, que ha
sido pre-revestida con el mismo antígeno. Después de un período de incubación, cualquier
anticuerpo no unido se lava. Existe una correlación inversa entre la cantidad de anticuerpos
libres disponibles para unir el antígeno en el pozo y la cantidad de antígeno en la muestra
original.[ CITATION Gan13 \l 2058 ]
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La prueba contiene un control interno (línea C) que debe presentar una línea de color vino
tinto del inmunocomplejo de anticuerpo de control independientemente del desarrollo de color
en la línea T. De otro modo el resultado de la prueba no es válido y la muestra debe ser analizada
de nuevo con otro dispositivo.[ CITATION AdB17 \l 3082 ]
Procedimiento:
1. Se le pedirá al paciente que se siente y que descubra sus brazos para elegir el sitio de
punción y una vez elegido el sitio de punción se debe colocar el Torniquete, 4 dedos
por encima de la flexión del codo.
2. Desinfectar la zona de punción con alcohol, desde el centro de la zona hacia afuera.
3. Introducir la aguja en la vena, con un ángulo de 15º y con el bisel hacia arriba.
4. Con una mano se debe fijar la capsula, mientras que con la otra mano empujar el tubo
de tapa lila hacia el interior del soporte y cuando él tuvo este lleno se debe retirar del
soporte y homogenizar inmediatamente.
5. Se debe retirar el torniquete
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Suero
1. Recolecta la muestra de sangre en un tubo con tapa roja (el cual no contiene
anticoagulantes, en Vacutainer) mediante punción venosa.
2. Separa el suero por centrifugación tan pronto como sea posible para evitar hemólisis.
Utilizar sólo especímenes claros, no hemolizados.
3. Extraiga con cuidado el suero en un tubo nuevo etiquetado previamente.
Analice las muestras de suero y plasma tan pronto como sea posible luego de su recolección.
No dejes los especímenes a temperatura ambiente durante largos períodos de tiempo.
Almacene las muestras a 2-8°C, si no se prueba inmediatamente por hasta 48 horas. Los
especímenes deben congelarse a -20°C para un almacenamiento más largo.
GRAFICO PROCEDIMIENTO
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5. Programe el cronometro
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INTERPRETACION DE RESULTADOS
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BIBLIOGRAFÍA
1. 1. HESKETH LM, ROWI_ATT JA, GAY NJ et al Child hood in England and Wales.
Communicable Disease Report. CDR Review. 7(4): RGO-3,1997 Public Health
Laboratory Preston UK.
5. Suleyman A. A short history, principles, and types of ELISA, and our laboratory
experience with peptide/protein analyses using ELISA.; 2015.
8. Ad-Bio. ad-bio hCG Combo Rapid Test (Suero / Plasma / Orina). [Online].; 2017.
Available from:
http://www.annardx.com/productos/images/productos/diagnostica/pruebas-
rapidas/ad1001chcgsuero,plasmayorinareve798258034.pdf.
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