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V3 – 24/05/11

Gélose au sang 356-4524


(Base)

DOMAINE D’APPLICATION FORMULE THEORIQUE


Ce milieu enrichi de sang est un milieu qui Peptone 15 g
permet l’isolement des bactéries exigeantes Digestat de foie 2,5 g
sans interférer avec leurs réactions d’hémolyse. Extrait de levure 5g
Chlorure de sodium 5g
REFERENCE(S) NORMATIVE(S) Agar 12 g
MICROBIOLOGIE DES ALIMENTS Eau distillée 1000 ml
• NF EN ISO 11290-2/A1 (Février 2005) : pH (25°C) final = 7,2 ± 0,2
Microbiologie des aliments - Méthode
horizontale pour la recherche et le AUTRES PRODUITS NECESSAIRES
dénombrement de Listeria monocytogenes – NON FOURNIS
Partie 2 : Méthode de dénombrement (IC : V08- • Eau distillée
028-2/A1). • Sang de cheval (code 355-6641)
• Sang de mouton (code 355-6652)
• NF EN ISO 11290-1/A1 (Février 2005) :
Microbiologie des aliments - Méthode hori- Voir Fiche(s) Technique(s) correspondante(s)
zontale pour la recherche et le dénombrement
de Listeria monocytogenes - Partie 1 : Méthode MATERIEL NECESSAIRE NON FOURNI
de recherche (IC : V 08-028-1/A1). (liste non exhaustive)
• Plaque chauffante
• XP V 08-062 (Octobre 2000) : Microbiologie • Agitateur-homogénéisateur
des aliments - Méthode de dénombrement de • Boîtes de Pétri stériles (Ø = 90 mm)
Listeria monocytogenes - Méthode de routine • Pipettes Pasteur stériles (code 355-0751) ou
(IC : V08-062). öse bouclée
• Etaleurs stériles
• XP V 08-058 (Novembre 1995) : Micro- • Bain-marie à 80 °C pour la gélose chocolat
biologie des aliments - Dénombrement de • Bains-marie avec une précision de ± 1°C
Bacillus cereus par comptage des colonies à 30 • Etuve ou enceinte thermostatée avec une
°C - Méthode de routine (IC : V08-058). précision de ± 1°C
• Autoclave
• Norme FIL 143A (1995) : Lait et produits • Tout matériel courant d’un laboratoire.
laitiers - Recherche de Listeria monocytogenes.
PREPARATION DU MILIEU DESHYDRATE
• Méthode de dénombrement de Listeria Toujours agiter avant chaque utilisation
monocytogenes dans les produits végétaux ou Dissoudre 40 grammes de poudre dans un litre
d’origine végétale (BOCCRF du 30 Mai 1992 d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à
rectifié le 5 Septembre 1992). dissolution complète. Répartir à raison de 100
ml par flacon puis stériliser à l’autoclave à
PRINCIPE 121°C ± 1 °C pendant 15 minutes.
La croissance de la plupart des bactéries est
favorisée par les substances nutritives Taux de reconstitution : 40 g/l.
apportées par la peptone et l’extrait de levure. 500 g de poudre permettent de réaliser 12,5
litres de milieu.
PRESENTATION
• Déshydraté PROTOCOLE
500 g code 356-4524 • Ensemencement et incubation
Ce milieu est en général, utilisé pour la prépa-
CONSERVATION/VALIDITE/LOT ration d’une gélose au sang frais :
• Déshydraté : + 15 - 25 °C, flacon soigneu- A 100 ml de base stérile, puis refroidie à 44 °C
sement fermé dans un endroit frais et sec. à 47 °C, ajouter 5 à 10 % de sang stérile de
• La date de péremption et le numéro de lot cheval ou de mouton.
sont indiqués sur le conditionnement. Après agitation ménagée, en évitant les bulles
d’air, le mélange est coulé en boîtes de Pétri.
Ensemencement par étalement en surface ou
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Gélose au sang
(Base)

par isolement et incubation à 37°C ± 1°C Culture des


pendant 24 h ± 2 heures. MICRO-ORGANISMES
Micro-organismes
(suite)
En 24H à 37 °C
Pour les isolements primaires de souches
d’Haemophilus provenant de prélèvements con- Streptococcus groupe C Bonne croissance
tenant une flore associée, il est recommandé CIP A7 Hémolyse β
d’utiliser le sang de cheval.
Pour obtenir de meilleurs résultats, il est Enterococcus faecalis
Bonne croissance
var zymogenes
possible d’étaler 2 gouttes de saponine à 10 % Hémolyse β
ATCC 29212
sur la moitié de la surface de la gélose à
ensemencer (Waterworth, 1955). Streptococcus Bonne croissance
pneumoniae Hémolyse α
Ce milieu de base peut également servir à la ATCC 6303 verdissante
préparation d’une gélose type "gélose chocolat" Neisseria meningitidis
Bonne croissance
(gélose au sang cuit) : (+CO2)
Pas d’hémolyse
Le sang stérile de cheval à 10 % est additionné ATCC 13090
à la base. Les flacons sont maintenus au bain-
marie à 80°C pendant 10 à 15 minutes, sous CONTROLE QUALITE DU FABRICANT
agitation, jusqu’à obtention d’une teinte Tous les produits fabriqués et commercialisés
chocolat. Répartition en boîtes de Pétri. par la société Bio-Rad sont placés sous un
Après ensemencement par étalement en sur- système d'assurance qualité de la réception
face ou par isolement, les boîtes sont incubées des matières premières jusqu'à la commer-
à 37°C ± 1°C pendant 18 à 24 heures. cialisation des produits finis.
Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un
LECTURE ET INTERPRETATION contrôle de qualité et il n'est commercialisé que
Sur cette gélose, les colonies des principales s'il est conforme aux critères d'acceptation.
bactéries ont des tailles, couleurs et aspects
caractéristiques. La documentation relative à la production et au
Le type d’hémolyse est variable selon les contrôle de chaque lot est conservée.
souches.
MOTS CLES
PRECAUTIONS D’EMPLOI Base pour gélose au sang / Bactéries
- Ne pas ajouter le sang dans un milieu de exigeantes / Sang / Isolement / Milieu.
base à une température supérieure à 47°C.
- Respecter les Bonnes pratiques de
Laboratoire.

PERFORMANCES/CONTROLE QUALITE DU
TEST
Les performances culturales sont contrôlées à
l’aide des souches suivantes :

Culture des
MICRO-ORGANISMES Micro-organismes
En 24H à 37 °C
Streptococcus bovis Bonne croissance
CIP 5623 Pas d’hémolyse

Staphylococcus aureus Bonne croissance


ATCC 25923 Hémolyse β
Staphylococcus
Bonne croissance
epidermidis
Pas d’hémolyse
ATCC 12228

Streptococcus pyogenes Bonne croissance


ATCC 19615 Hémolyse β

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