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Coproculture

Pr. A. Iyane SOW


Bactériologie – Virologie
Objectifs pédagogiques

 Citer les bactéries entéropathogènes


recherchées dans les selles

 Expliquer les modalités de recueil, de transport


et de conservation des selles

 Décrire la méthodologie de la coproculture


1. Généralités
Recherche de bactéries pathogènes dans les
selles, produit pathologique polymicrobien

 Bactéries recherchées :
- Salmonella
- Shigella
- Vibrio
- Escherichia coli
- Campylobacter
 Flore commensale digestive :
Densité flore : 1012 germes/1g selles

/ Bactéries résidentes
- anaérobies > 90%
- aérobies : EB (E. coli) , Enterococcus …
/ Bactéries de « passage »
- Staphylococcus, Bacillus
- Pseudomonas …
/ Portage : Salmonella, Shigella, Vibrio
2. Indications
/ Épisode aigu ou chronique de diarrhée
/ Épidémie de diarrhée
/ Détection de porteurs sains
/ Étude qualité microbiologique
- eau potable : colimétrie
- aliments
/ Études épidémiologiques
 Rappel mécanismes des diarrhées :
/ Implantation de bactéries étrangères
- multiplication locale + toxine
- ulcération muqueuse + toxine
- envahissement de l’organisme
/ Déséquilibre de la flore commensale
- changement de régime alimentaire
- antibiothérapie
/ Intoxication alimentaire
3. Prélèvement
* Recueil de selles :
- Selles fraîches: glaire, sang, mucus
- Récipients stériles (ou propres)
- Avant antibiothérapie,
- à tout moment
* Ecouvillonage rectal :
- Patient inconscient
- Diarrhées profuses
* Conservation : + 4°C, quelques heures

* Transport : rapide, milieu de transport :


Carry Blair, EPHA

* Autre : Papier buvard


4. Etude au laboratoire
3.1. Examen macroscopique :
- Consistance : pâteuse, solide, liquide
- Présence de : sang, glaire, mucus …

3.2. Examen microscopique :


- Recherche de Bactéries : abondance et
prédominance de la flore, mobilité, Gram
Équilibre de la Flore :
- 70% de germes à Gram (-)
- 30% de germes à Gram (+)
- Cytologie : leucocytes, hématies
- Parasites : œufs, larves, kystes, adultes
3.3. Culture et identification : on procède
par élimination
* Salmonella et Shigella :
- Enrichissement des salmonelles (Bouillon)
- Isolement sur milieu sélectif (gélose) :
Gélose SS, gélose Hektoen,
- Identification biochimique : Galerie
d’identification classique (tube), API
- Confirmation sérogroupe et sérotype
- Antibiogramme
Gélose Hektoen, Gélose SS,
Gélose Kligler Hajna
Galerie API 20E
Enrichissement Selles

Isolement

4H 24 H Colonies lactose (-),


SH2 (+) ou SH2 (-)

Uréase (-)

Sérogroupage Galerie d’identification


* Vibrio cholerae :
- Enrichissement (Eau peptonée hypersalée
alcaline : EPHA)
- Isolement sur milieu sélectif (TCBS)

- Identification biochimique des colonies


suspectes : saccharose (+), oxydase (+)
- Confirmation sérogroupe et sérotype :
par agglutination
- Antibiogramme
* Escherichia coli :
- Isolement sur milieu sélectif (EMB : Eosin
Methylen Blue)
- Identification biochimique des colonies
suspectes : reflet métallique
- Confirmation du sérogroupe et du
sérotype pour certains sérovars (ECEP
- Antibiogramme
Gélose EMB
Selles
Macroscopie
Culture Microscopie
Salmonella V. cholerae
Shigella E. coli
EPHA
Bouillon sélénite Gélose TCBS Gélose EMB
Gélose SS
Colonies Sacch (+) Colonies à reflet
Colonies Lactose (-) métallique
Galerie
Uréase (-) Sérogroupage Galerie
ABG Sérogroupage
Galerie Autres
Sérogroupage, ABG ABG
5. Autres recherches
 Campylobacter jejuni :
- Ensemencer une gélose sélective: incuber à
43°C, pendant 48H, en microaérophile
- Choisir 5 colonies grisâtres, plates :
. rechercher une mobilité polaire
. recherche l’oxydase et la catalase
- repiquer chaque colonie sur galerie
- Rendu Résultats au 5e jour
 Clostridium difficile
- milieux sélectifs + anaérobiose
- lecture galerie + identification
- confirmer par test toxinogénèse

 Recherche de Toxines bactériennes


- germes : S. aureus, C. botulinum,
B. cereus
- tests : ELISA, inoculation à l’animal
Rotavirus,
 Recherche de Virus :
Adénovirus 40 et 41, Poliovirus
Techniques: agglutination au latex, ELISA,
Culture cellulaire
MERCI