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BIOLABO

www.biolabo.fr L.D.H. (LDH-P) M é t h o d e SFBC modifiée


FABRICANT :
BIOLABO SAS, Réactif pour le dosage quantitatif de l’activité Lactate Deshydrogénase
Les Hautes Rives [ EC 1.1.1.27 ] dans le sérum ou le plasma humains.
02160, Maizy, France
REF 92111 R1 1 x 150 mL R2 10 x 15 mL
REF 92011 R1 1 x 60 mL R2 20 x 3 mL
REF 92511 R1 10 x 50 mL R2 10 x 50 mL

CODE CNQ : FO

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SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES
Tel : (33) 03 23 25 15 50
IVD USAGE IN VITRO
Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1) (6) PREPARATION DES REACTIFS


L’activité Lactate Deshydrogénase (LDH) est présente dans toutes les Flacon R2: Utiliser un objet non coupant pour enlever la capsule
cellules de l’organisme. Comparativement au sérum, cette activité est aluminium.
particulièrement élevée dans le foie, le cœur, le rein, les muscles REF 92111 et 92011 : Ajouter sans délai la quantité de réactif R1
squelettiques et les érythrocytes. En plus de leur activité LDH, la (Tampon-Substrat) nécessaire dans un flacon R2 (Coenzyme).
plupart de ces tissus ont une composition isoenzymatique différente
(séparable par électrophorèse). REF 92511 : Verser sans délai le contenu du flacon R2 (Coenzyme)
Suite à un infarctus du myocarde, l’activité LDH totale dans le sérum dans le flacon R1 (Tampon-Substrat).
augmente 12 à 18 h après les premiers symptômes, atteint son Agiter doucement jusqu'à complète dissolution (environ 2 minutes).
maximum après 48 à 72 h et revient à des valeurs proches de la
normale après 6 à 10 jours. STABILITE ET CONSERVATION
Une élévation de l’activité LDH est aussi observée en cas de lésion Stocker à l’abri de la lumière, dans le flacon d’origine bien
rénale, d’hépatites, d’anémies, d’embolie pulmonaire, de cancers, de bouché à 2-8°C.
lésions ou maladies musculaires.
● Avant ouverture, les réactifs sont stables jusqu'à la date de
péremption indiquée sur l’étiquette du coffret, s’ils sont utilisés et
PRINCIPE (4) (5). conservés dans les conditions préconisées.
Méthode de Henry et al (conforme aux recommandations SFBC). ● Après reconstitution, le réactif de travail est stable 30 jours en
Le schéma réactionnel est le suivant : l’absence de contamination.
● Ne pas utiliser le réactif s’il est trouble ou si l’absorbance mesurée à
+ LDH + 340 nm est < 1,100.
Pyruvate + NADH + H L-Lactate + NAD ● Ne pas utiliser le réactif de travail après la date de péremption
La diminution de l’absorbance due à la conversion du NADH en NAD+ indiquée sur l’étiquette du coffret.
, directement proportionnelle à l’activité LDH dans le spécimen, est
mesurée à 340 nm. PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2) (4)
Sérum ou plasma hépariné, non hémolysés, séparés des cellules
sanguines le plus rapidement possible. Les prélévements sur fluorure,
REACTIFS
iodoacétate, citrate de sodium, EDTA, ne conviennent pas.
flacon R1 TAMPON-SUBSTRAT
L'héparinate de lithium ne perturbe pas l'activité LDH mesurée.
Tampon Tris pH 7,2 80 mmol/L
L’activité LDH dans le spécimen est stable 48 h de 4° C à 20° C.
Pyruvate 1,6 mmol/L
La congélation inactive les isoenzymes hépatiques et conduit à une
Conservateur perte d'activité d'environ 10 à 20% après 48 heures.
flacon R2 COENZYME
INTERFERENCES (3) (4)
NADH > 0,20 mmol/L Triglycérides : Pas d’interférence significative jusqu’à 10 g/L
NaCl 200 mmol/L Bilirubine : Pas d’interférence connue
Hémolyse : Interférence positive due à l’activité LDH contenue
dans les érythrocytes.
PRECAUTIONS
Les réactifs BIOLABO sont destinés à du personnel qualifié, pour un Young D.S. a publié une liste des substances interférant avec le
usage in vitro. dosage.
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation.
• Utiliser des équipements de protection (blouse, gants, lunettes). REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES
• Ne pas pipeter avec la bouche.
1. Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales.
• En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment à
l’eau et consulter un médecin. 2. Sérums de contrôle normaux et pathologiques.
• Les réactifs contiennent de l’azide de sodium (concentration < 0,1%)
qui peut réagir avec les métaux tel que le cuivre ou le plomb des
canalisations. Rincer abondamment.
• La fiche de données de sécurité peut être obtenue sur simple
demande.
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.

Made in France Dernière version : www.biolabo.fr Version : 31/10/2011


CALIBRATION MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)
La validité des résultats dépend de l’exactitude de la calibration de Porter les réactifs et spécimens à température ambiante.
l’instrument, du juste décompte du temps, du respect du rapport
volume réactif / volume spécimen et du contrôle de la température. Introduire dans une cuve thermostatée de 1 cm de trajet optique :
• Utiliser le facteur théorique (§ CALCUL).
Réactif 1 mL
• ou REF 95015 BIOLABO Multicalibrator (valeur attribuée sous
contrôle métrologique, par traitement statistique des données) Laisser la température s'équilibrer à 30° C ou 37° C puis ajouter :
• ou un multicalibrateur sérique enzymatique raccordé sur une
solution ou une méthode de référence Spécimen 20 µL

Mélanger. Après 30 secondes, lire l'absorbance initiale à 340 nm (ou 334 nm)
CONTRÔLE DE QUALITE CODE CNQ : FO puis toutes les minutes pendant 2 minutes.

• BIOLABO EXATROL-N Taux I REF 95010. Calculer la moyenne des variations d’Absorbance par minute (∆Abs/min).
• BIOLABO EXATROL-P Taux II REF 95011.
• Tout autre sérum de contrôle titré pour cette méthode. Remarque : Des procédures spécifiques sont disponibles pour les
• Programme externe de contrôle de la qualité. analyseurs automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants :
• Au moins un contrôle par série. CALCUL
• Au moins un contrôle par 24 heures.
• Changement de flacon de réactif. Le résultat est déterminé d’après la formule suivante :
• Après opérations de maintenance sur l’analyseur.
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de Avec facteur théorique :
confiance indiquées, appliquer les actions suivantes : Ul/L = (∆Abs/min) x 8095 à 340 nm
1. Répéter le test en utilisant le même contrôle.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, préparer un
sérum de contrôle fraichement reconstitué et répéter le test. UI/L
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, vérifier les µKat/L =
60
paramètres de l’analyse : longueur d’onde, température, volume
spécimen/volume réactif, temps de mesure et facteur de
calibration. Avec multicalibrateur sérique :
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
Activité LDH = (∆Abs/min) Dosage x Activité du Calibrant
flacon de réactif et répéter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le (∆Abs/min) Calibrant
service technique BIOLABO ou le revendeur local.
REFERENCES
INTERVALLES DE REFERENCE (4)
(1) TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R.
Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 668-672.
Activité LDH chez l’adulte : à 37° C : 200-400 UI/L (2) Clinical Guide to Laboratory Test, 4th Ed., N.W. TIETZ (2006) p. 648-651
(3) YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995)
(Méthode SFBC) à 30° C : 140-280 UI/L p.3-372 à 3-377.
Note : Les valeurs usuelles chez l'enfant sont d'autant plus élevées (4) VASSAULT A., MAIRE I., SEBILLE L. ET BOZON D., Recommandations pour la
mesure de la concentration catalytique de la lactate déshydrogénase dans
que l'enfant est jeune. le sérum humain à +30° C, Ann. Biol. Clin. (1982), 40, p.123-128
Il est recommandé à chaque laboratoire de définir ses propres valeurs (5) HENRY R.J.et Al., Am. J . Clin. Path. (1974), 61, p.108
de référence pour la population concernée. (6) Bernard S. Bioch. Clin. 2ème éd. (1989), Edition Maloine, Paris, p.183-184

PERFORMANCES
Intra-série Taux Taux Inter-série Taux Taux
N = 20 normal élevé N = 42 normal élevé
Moyenne UI/L 221 1464 Moyenne UI/L 340 922
S.D. (UI/L) 2,15 8,52 S.D. UI/L 12,26 31,6
C.V. (%) 0,97 0,58 C.V. % 3,61 3,43

Limite de détection : environ 20 UI/L


Sensibilité pour 810 UI/L : environ 0,100 Abs/min à 340 nm.
Comparaison avec réactif du commerce :
y = 1,05 x - 25,41 r = 0,9992

LIMITE DE LINEARITE
La réaction est linéaire jusqu’à 1500 UI/L (25,5 µKat/L).
Au-delà de 0,185 ∆Abs./min, diluer le spécimen au (1 + 4) avec une
solution NaCl à 9 g/L et refaire le dosage en tenant compte de la
dilution. La limite de linéarité dépend du rapport de dilution
spécimen/réactif.

IVD REF LOT →


Fabricant Date de péremption Usage “In vitro” Température de conservation Référence Produit Consulter la notice Numéro de lot Conserver à l’abri de la lumière Suffisant pour diluer avec

Made in France Dernière version : www.biolabo.fr Version : 31/10/2011

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