Pr G. Pauli
Cours Capacitéd’Allergologie
22 Fev. 2008- Lille
Provenance : sources d ’allergènes
! Acariens ! Pollens
! Mammifères ! Moisissures
D t h id t i (St b )
Extraits
allergéniques
R.A. Cooke
(1880 - 1960)
! Problèmes persistants :
"Impossibilité de préciser à quelle(s) molécule(s) allergénique(s)
le patient est sensibilisé : allergènes majeurs ou mineurs.
"Impossibilité de quantifier les IgE spécifiques dirigées contre
les différents composés moléculaires.
Production des allergènes recombinants :
Principes
! Sélectionner les séquences d'ADNc transcrites à partir des ARNm
Le séquençage de l'ADNc :
"permet de déterminer la structure primaire de la
protéine allergénique.
"permet la comparaison avec des banques de
données d'ADN et permet la mise en évidence
d'identités et d'homologies
(ex. > 80 % pour Bet v 1, Aln g 1, Cor a 1, Car b 1)
Différentes caractéristiques d ’un allergène lui
conférant un caractère majeur
Prevalence of
sensitization Groupe
1
Groupe 4
Groupe
5
Groupe
2/3
Groupe
50%
13
Groupe
11
Groupe
12
Groupe
Groupe 7
10
Barderas R, Purohit A, Papanikolaou I, Rodriguez R, Pauli G, Villalba M. JACI 2005 ; 115 : 51-7
AUTRES TESTS CELLULAIRES
3 cas : IgE spécifiques (+) pour la phléole mais tests cutanés (-)
1 cas : tests cutanés (+) à rPhl p 1 mais IgE spécifiques anti-phléole (-).
Pas de réaction positive chez 10 témoins non allergiques
100
80
60
40
20
0
Australie Danemark France Suède Suisse Canada Japon
(n=29) (n=26) (n=38) (n=35) (n=20) (n=15) (n=20)
% n
n = 78 n Der p 1 91 71
r Der p 2 86 67
n Der p 4 74 58
r Der p 5 18 14
r Der p 7 27 21
r Der p 8 10 8
r Der p 10 6,4 5
Implication pratique des allergènes
recombinants
1. Outil pour améliorer le diagnostic positif.
2. Outil pour confirmer les allergies croisées.
3. Outil pour améliorer l ’interprétation des
sensibilisations cutanées concomitantes.
4. Outil pour améliorer les indications de
l ’immunothérapie spécifique.
Utilisation pour le diagnostic de marqueurs de
sensibilisation spécifiques
30
nombre de patients
25
20
15
10
5
0
0 I II III IV V VI
classes d'IgE spécifiques anti-rBet v1
Betula
Dactyle Dactyle
verrucosa Phléole
glomerata glomerata
Groupe 1
Profiline Groupe 2
Groupe 5
Communauté épitopique
Faible Forte
Apport des allergènes recombinants
aux bases moléculaires des allergies croisées (1)
% entre pneumallergènes :
a) à l ’intérieur de la famille des bétulacées (bouleau,
aulne, noisetier) inhibition du RAST avec rBet v 1
Profiline
Polcalcine
Inhibition studies :
ex. (1) : Fraxinus
Bet v 6 Pyr c 5
Art v 3 Pru p 3
Apport des allergènes recombinants
aux bases moléculaires des allergies croisées (4)
1CQA
Illustration with pathogenesis-related proteins PRs (2)
PR5 thaumatin-like antifungal - Apple, Mal d 2 ; Hsieh, JACI 1995
proteins (TLP) activity - Cherry, Pru av 2 Inschlag, Int Arch 1998
- Paprika ; Leitner, Allergy 1998
- Kiwi ; Gavronic-Jankulovic, JACI 2002
PR10 Bet v 1- like plant steroid - Birch, Bet v 1
proteins hormone Breiteneder, Emb J 1989
transporter - Cherry, Pru av 1
Scheurer, Mol Immunol 1999
Neudecker, J Biol Chem 2001
- Apple, Mal d 1
Bet v 1 Pru av 1 Vaneck-Krebitz, Biophysic 1995
- Celery, Api g 1
Breiteneder, Eur J Bioch. 1995
- Carrot, Dau c 1,
Hofman-Sommergruber
Clin Exp Allergy 1999
- Pear, Pyr c 1
Karamloo, J Chrom Bio 2001
1BTV 1E09 - Soy, SAM22, Kleine-Tebbe, JACI 2002
- Hazelnut, Cor a 1,
Luttkopf, Mol Immunol 2002
Neudecker P, Schweiper K, Nerkamp J, Scheurer S, Vieths S, Sticht H,
Rosch P.
Allergic cross-reactiviy made visible: solution structure of the major
cherry allergen Pru av 1.
J Biol Chem 2001
Biochem J 2005
Pru av 1 (green)
Bet v 1 (orange)
Apport des allergènes recombinants
aux bases moléculaires des allergies croisées (4)
% entre trophallergènes :
Protéines de Transfère les lipides - Pêche, Pru p 3
transfert des entre les liposomes Sanchez-Monge, JACI 1999
lipides LTPs et les membranes. - Pomme, Mal d 3
cellulaires Pastorello, JACI 1999
- Abricot, Pru ar 3
Pastorello, JACI 2000
LTP Maïs - Châtaigne, LTP
Diaz-Perales, Clin Exp 2000
- Maïs,
Pastorello, JACI 2000
- Cerise, Pru av 3
Scheurer, JACI 2001
- Prune, Pru d 3
Pastorello, J Chromato 2001
- Noisette, Cor a 8
Pastorello, JACI 2002
Syndrome oral fréquent
CCD allergie croisée avec les rosacées
Réaction in vivo
non confirmée (allergène
Cor a 1
thermosensible)
Cor a 9 (famille Fruits
des vicilines) Profiline Pertinence
Noisette Légumes clinique non
Allergie confirmée ?
Réaction
croisée systémique
avec
LTP
l ’arachide
Cor a 8 rare
Pen m 2
Sand
shrimp
Lobster
Cray fish
Crab
BSA
"Profilin
$IgE against r Bet v 2 8.33 kU/L
$IgE against r Phl p 12 9.10 kU/L
100
50
Allergènes
recombinants r1 r2 r3 r4 rn
0
r1 r2 r3 r4
r1 r1r3 r3 r4 rn
allergènes hybrides épitopes T épitopes B Conjugaison
recombinants - CpG
Valenta et al., JACI 2007
P<0.004
150
P<0.001
100
Mean wheal areas (mm2)
50
histamine GP HM HM HM HM
(4) (12) (36) (108)
G. Pauli, A. Purohit,
J.P. Oster, F. de Blay et coll.,
Clin Exp Allergy 2000, 30, 1076-84
Applications thérapeutiques :
la désensibilisation
2) Désensibilisation avec les extraits hypoallergéniques.
Etude multicentrique : Vienne - Stockholm - Strasbourg
3 groupes : placebo - trimères - fragments
84 patients exploitables (présentation EAACI 2003).
17 64 26
20 68 33
23
34
29
41
30
10 43
32
46
37
48
38
49
39
50
1 51
56
57
58
61
0 ,1
0,7 0,6 0,8 0,8 0,2 24** 20** 2* 0,2 62** 22** 3**
1,3 1,4 1,8 1,4 0,4 89 30 7 1,5 71 25 7
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Désensibilisation
! Jutel et coll. (injection ) : Phl p 1, Phl p 2, Phl p 5a, Phl p 5b,
Phl p 6.
"Augmentation IgG1 et IgG4 ! réponse immunologique
"29 actifs, 28 placebo
"Différence de score symptômes-médicaments : 38,9 % (p =
0,04)
JACI 2005
! Etude multicentrique (injection) : Bet v 1 (France, Suède,
Danemark, Autriche)
32 nBet 1 33 rBet v 1 33 bouleau 36 placebo
EAACI 2006
ITT
ITTPopulation)
Primary efficacy analysis
Total ( (RC)
Population)
Totalsymptom
symptom score
scoreof
ofrhinoconjunctivitis
rhinoconjunctivitis
Daily average total score of RC by treatment group Daily average total score of RC by treatment group
Pollinic peak 2004 Pollinic peak 2005
9 9
8 8
7 7
6 6
Mean score.
Mean score.
5 5
4 4
3 3
2 2
1 1
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22