Dif :

Laboratoire est un Lieu d'exercice de chercheurs où sont réalisées des observations ou

des expériences, ainsi que toute autre activité scientifique.
 Il peut s'agir de prélèvement de sang, de peaux, d'urines, de selles ou
de muqueuses.
La microbiologie est une branche spécialisée de la biologie, la science qui étudie les organismes microscopiques,
les micro-organismes, donc des êtres vivants qui ne peuvent être reconnus à l'oeil nu souvent
pour déterminer un germe ou une bactérie, un virus, etc. La microbiologie s'intéresse
aux cellules, unicellulaires (cellule unique), multicellulaires (colonie de cellules), ou acellulaires (dépourvue de
cellule). Cette science englobe de nombreuses sous-disciplines, y compris
la virologie, mycologie, parasitologie et bactériologie.

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Le Laboratoire de Microbiologie étudie les processus régissant l’organisation,
l’évolution des bactéries et des bactériophages,
Les bactéries et les phages que nous étudions sont des organismes modèles intéressants aussi bien pour la
recherche fondamentale que pour les applications dans les domaines des biotechnologies, de l’industrie
alimentaire et de la santé.

La microbiologie s'intéresse à l'étude des microorganismes, qu'il s'agisse des bactéries, des

champignons, des protozoaires ou des virus. Une connaissance approfondie de leur
physiologie, de leur génétique et des interactions entre eux facilite notre compréhension du
monde vivant à l'échelle microscopique

Defferent type des labo

GROUPE 1 (P1) : « … n’est pas susceptible de provoquer une maladie chez l’homme »

 Place de travail tenue propre et en ordre.

 Ports de gants uniquement dans les laboratoires.
 Lavage des mains avant et après manipulation.

GROUPE 2 (P2): « …peut provoquer une maladie chez l'homme et constituer un danger pour les
travailleurs; sa propagation dans la collectivité est improbable; il existe généralement une
prophylaxie ou un traitement efficace »

*Porte et fenêtres fermées pendant la manipulation

 Port de blouse uniquement dans les zones confinées

 Éviter les plus possible la création d’aérosols, centrifugeuses fermées

 Désinfection régulière, et en fin d’activité, des plans de travail avec alcool 70%, désinfectant, etc…

 Liste des personnes autorisées sur la porte, supervisées par le responsable de projet
 GROUPE 3 (P3) : « …peut provoquer une maladie grave chez l'homme et constituer un danger
sérieux pour les travailleurs; il peut présenter un risque de propagation dans la collectivité, mais il
existe généralement une prophylaxie ou un traitement efficace »

 Toutes les surfaces doivent être lisses et faciles à nettoyer

 Aucun raccordement avec l’extérieur

 Tout matériel contaminé doit être autoclavé dans le laboratoire avant de sortir

 Uniquement des vêtements destinés au P3 sont portés et ne sortiront pas du laboratoire sans être
préalablement autoclavés

GROUPE 4 (P4) : « …provoque des maladies graves chez l'homme et constitue un danger sérieux pour
les travailleurs; il peut présenter un risque élevé de propagation dans la collectivité; il n'existe
généralement pas de prophylaxie ni de traitement efficace »

Les fonctionnement

Les matériels ;

 Pipettes pasteure
 Boite de pétri
 Lames / lamelles
 Bouillon / gélose
 Colorants / réactifs
 Disques d’antibiotiques
 Verrerie
 Microscope
 Pissettes

Equipements ;

 Autoclave : est un récipient dont le couvercle est glissé à l'intérieur de l'enveloppe du

récipient et qui se ferme hermétiquement sous l'effet de la pression intérieure de la vapeur.
 Centrifugeuse : est un appareil destiné à imprimer une accélération,
 Hotte d'aspiration
 Incubateur
 Osmoseur (ou distillateur)
 Réfrigérateur
 Etuve
 Four pasteur
 Bain-marie
Identifiction bacterienne

Dif de ensemecment :

En microbiologie : l’ensemencement est l’étape de transport entre votre milieu ou bactéries

recherchées (repiquage, bouillon, …) et votre milieu de culture. Comme tout transport, une
concurrence est présente pour déposer votre simple milieu mère.

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c'est déposé dans un milieu de culture stérile des germes prélevés à partir d'1 culture mère
ou pure.

Matériel :

Boite de pétri : , elle est utilisée en microbiologie pour la mise en culture de micro-

organismes

Gélose nutritive : est un milieu d'isolement non-sélectif.

Pipette pasteur ( ou écouvillon stérile)  : sont des tubes fins généralement en verre dont
l'extrémité a été effilée .

Technique ens.
L’ensemencement, c’est-à-dire le transport des bactéries dans un milieu de culture neuf, doit
être fait dans des conditions d’asepsie totale. Les cultures sont faites en milieux liquides ou
en milieux solides.
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La technique d'ensemencement : Stériliser l'instrument servant à prendre la souche
bactérienne d'origine (pipette dans le cas de bouillon, anse dans le cas d'une colonie)
Prélever la souche à ensemencer. Stériliser l'ouverture du flacon de bouillon stérile.

Etude macroscopique :

La forme
L’evation
La taille
Chromogénése
Opacité
Consistance
Surface
Odeur
2.2.3. Colorations différentielles : Les microorganismes se différencient entre eux
chimiquement et physiquement. Ils peuvent réagir différemment à des colorants donnés. Les
colorations différentielles sont des méthodes permettant de distinguer entre eux les
différents types bactériens.
Coloration de Gram : C’est la coloration de base en pratique bactériologique. Elle permet de
reconnaitre les bactéries présentes et leur caractère « Gram-positif » ou « Gram-négatif »
selon qu’elles ont gardé la coloration violette ou non.
- Préparer et fixer une suspension de la souche bactérienne.
- Recouvrir le frottis d’une solution de violet de gentiane ; laisser agir une minute.
- Entrainer le violet par la solution de lugol. Recouvrir la lame de lugol et laisser agir 1minute
sans laver à l’eau.
- Décolorer aussitôt par l’alcool acétone ; pour cela, verser l’alcool à la surface de la
préparation placée obliquement et observer sa couleur en s’écoulant, il est d’abord violet
puis bleuté et enfin incolore ; arrêter à ce stade.
- laver rapidement à l’eau courante (eau distillée).
- Recouvrir la lame de solution de fuchsine et laisser agir 20 à 30 secondes.
- Laver et sécher entre deux feuilles de papier filtre.
- Observer en immersion. Les Gram+ (Gram positifs) apparaissent en violet-noir, les Gram-
(Gram négatif) apparaissent en rose.