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République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministre de L’Enseignement Supérieure et de la Recherche


Scientifique

École Normale Supérieure de Laghouat

TRAVAUX PRATIQUE TECHNIQUE


Chromatographiques

GROUPE : 02

Mr. H.BenAbed

Réaliser par : .S.Hachani

Younsi ahmed

ANNEE UNIVESITAIRE : 2019/2020


TP01 : Rèvèlation des aminès et protèines
chromatographie sur couche mince(CCM)

TP02 : La chromatographie sur colonne du sirop de menthe

: Rèsume-
L objectif de ce travail est de faire révélation des asides aminès,et utilisant
méthode séparation chromatographie sur couche mince(CCM), ou nous avons
placè 3 spot de la plaque polyester qui sont compses inconnus,trp et arg, le
rèsulta est que le composè inconnu contient 4 composes , 2 d entre eux ont le
. meme RF avec arg et le trp , et deux composes inconnus

-Mot clé : chromatographie sur couche mince(CCM)

Rèvèlation des aminès et protèines


Chromatographie sur couche mince
INTRODUCTION :

La chromatographie est une technique de séparation des substances chimiques


(mélange homogène liquide ou gazeux) qui repose sur des différences de
comportement entre une phase mobile courante et une phase stationnaire (ou
phase fixe).
On peut classer les méthodes chromatographiques d'après la nature des phases
utilisées ou celle des phénomènes mis en œuvre dans la séparation.
Selon la technique chromatographique mise en jeu, la séparation des
composants entraînés par la phase mobile, résulte soit de leur adsorption et de
leur désorption successive sur la phase stationnaire, soit de leur solubilité
différente dans chaque phase.
Dans ce travail pratique, on s’intéressé a la chromatographie de surface (CCM)

LE BUT :

Séparation et identification des espèces chimique dans un mélange (M)


II. Matériel et méthodes :
II.1. Matériels :
-tous les produits utilisés dans ce travail sont présentes
dans le tableau suivant (tableau 1)
Tableau 1 : Standard utilisé dans ce travail

Produit Firme
Plaques polyester recouvertes de gel de silice Macherey-nagel
Butanul Macherey-nagel
Acide acétique glacial (50%) Macherey-nagel
Sloution éthanolique de ninhydrine Macherey-nagel
Arg . trp. Milange(M) Macherey-nagel

II.2.METHODES :
1/Protocole expérimental
1. Introduire dans la cuve, l'éluant (6 m l de n-butanol et 4m l d'acide
acétique glacial (50%)).
2. 2. Préparer la plaque (SIL G UV254= Plaques polyester recouvertes de
gel de silice) en y déposant un spot du mélange (M), un spot d'arginine
(A) puis un spot tryptophane (1)
3. 3. Plonger alors la plaque dans la cuve et attendre que le front de l'éluant
arrive à lam du bord supérieur de la plaque (environ 6 0m in)
4. . 4. Retirer la plaque et observer.
2/ Exploitation
1. Remplir le pulvérisateur de 5 a 7 m l de solution éthanolique de
ninhydrine avec chauffage ultérieur pendant environ 5 min a 110 c
2. Cerle les taches avec un crayou.

III.Résutlats et discussion 
Apres l’expérience on observe que chaque échantillon a déplacé d’une certaine
vitesse est certaine distance on calcule les rapports fronteaux on trouve :
Rf= dX /D

M Arg Trp

1. Mode d’opératoire Résultats et interprétation :

darg=1.4cm dtrp=4.3cm dM2=2.6cm Dm3=3.3cm D=6.5 cm


dM1=1.4cm dM4=4.3cm
Rf= dX /D

Rfarg= darg/ D=1.4/ 6.5=0.21=RfdM1

Rftrp= dtrp/ D=4.3/ 6.5=0.66=RfdM4

RfM2= dm2/ D=2.6/6.5=0.4

RfM3= dm3/ D=3.3/6.5=0.5

Rfarg=RfM1<RfM2<RfM3 <Rftrp=RfM4
Interprétation :

D’après les valeurs de Rf, on remarque que l’échantillon n’est pas pur

Donc il est constitué de plusieurs constituants.

le composè inconnu contient 4 composes , 2 d entre eux ont le meme RF avec


arg et le trp , et deux composes inconnus .

I. Conclusion :

La technique du CCM est une technique fiable et rapide, plus le composé est
polaire plus il sera adsorbé et moins vite il se déplace les composants de
l’échantillon ont des vitesses variables selon leur solubilité, les composants plus
solubles migrent lentement.

: Rèsume
L objectif de ce travail et de réaliser une chromatographie sur colonne d'un
sirop de menthe (zikavi, de comprendre le principe de la chromatographie
d'adsorption, afin de déterm iner quels sont les colorants qui sont responsables
de la couleur vert de ce sirop

-Mot clé : sirpe de monthe ,chromatoghraphie sur coloone

INTRODUCTION :
La chromatographie d'adsorption est une technique de séparation de
composés basée sur la différence d'affinité existant entre ces composés, la phase
mobile, qui entraîne les composés, et la phase stationnaire. En effet, selon la
plus ou moins grande affinité entre les solutés et la phase stationnaire ou
mobile, les constituants du mélange migrent à des vitesses différentes et sont
ainsi séparés.

La technique présentée ici est la chromatographie sur colonne, elle utilise une
phase stationnaire introduite dans une colonne de verre. C'est une technique
très largement utilisée notamment lors de réaction en chimie organique, pour
séparer et purifier les différents constituants d'un mélange.

Au cours de cette séquence nous verrons sur l'exemple d'un mélange de


colorants, extraits du sirop de menthe( zikuv), le principe de cette technique en
utilisant comme phase stationnaire la silice (SiO2).

LE BUT 

Le but de ce travail et de réaliser une chromatographie sur colonne d'un sirop


de menthe (zikavi, de comprendre le principe de la chromatographie
d'adsorption, afin de déterm iner quels sont les colorants qui sont responsables
de la couleur vert de ce sirop.

II. Matériel et méthodes :


II.1. Matériels :
-tous les produits utilisés dans ce travail sont présentes
dans le tableau suivant (tableau 1)
Tableau 1 : Standard utilisé dans ce travail

Produit Firme
Ethanol C2H5OH Macherey-nagel
NaCl Macherey-nagel
Poudre de silice Macherey-nagel
Sirop de menthe(zikuv) Macherey-nagel
Arg . trp. Milange(M) Macherey-nagel