J P i n c e m a i l 1, 2, M M e u r i s s e 3,
R L i m e t 1 e t J O D e f r a i g n e 1,2
MS 95 - Avril 1999 M E D I S P H E R E
C A N C E R O L O G I E
• Protéines oxydées
Les modifications des structures primaire, secondaire et
tertiaire des protéines par les EOA sont à la base de la
formation de dérivés protéiques carbonylés via plusieurs
mécanismes incluant la fragmentation et l’oxydation des
acides aminés. En présence de dinitrophénylhydrazone
(DNPH), ces dérivés carbonylés peuvent être en évidence
(ROOH) qui peuvent être mesurés au niveau plasmatique dans des échantillons biologiques par spectrophotométrie,
avec un kit commercial. Sous l’action de métaux de transition par technique HPLC ou via des anticorps mono-et
(fer, cuivre), les peroxydes lipidiques se décomposent ensuite polyclonaux. Récemment, une méthode ELISA quantitative,
en toute une série de sous–produits dont font partie les sensible et applicable en routine dont les résultats se
aldéhydes. La malonedialdéhyde peut se mesurer par une corrèlent parfaitement avec ceux obtenus par méthode
méthode de chromatographie liquide à haute performance spectrophotométrique, a été mise au point.
(HPLC). Toutefois, son estimation reste un indice peu
représentatif de la présence d’une peroxydation lipidique
puisqu’elle ne représente qu’un pourcent des produits de Figure 2: Taux de 8–épi–PGF2α, un marqueur de la peroxy-
décomposition des peroxydes lipidiques. Plus sensible et dation lipidique, trouvés dans les urines de fumeurs et de
beaucoup plus spécifique est la mesure d’un autre aldéhyde, non fumeurs. Graphique adapté de Reilly et al. Circulation
94:19-25, 1996.
le 4–hydroxynonénal (HNE) provenant de la dégradation des
peroxydes d’acides gras de la famille ω–6. Tout comme la
MDA, le HNE se mesure en routine par une méthode HPLC.
• Isoprostanes
L’interaction des EOA et plus particulièrement du radical
hydroxyle avec l’acide arachidonique conduit à la formation
d’isoprostanes dont la prostaglandine 8–épi–PGF2α est la plus
représentative. Celle-ci est produite dans le sang et puis
ensuite excrétée dans l’urine où elle est dosée par spectro-
métrie de masse. Chez les fumeurs, ce test a permis de
montrer sans équivoque la présence d’un stress oxydatif
particulièrement important (figure 2). Le développement
récent d’une méthode radioimmunologique beaucoup simple
d’application et très rapide va contribuer à populariser ce
dosage encore trop peu connu.
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migrera vers une anode sous la forme d’une queue de comète. (adaptation), soit diminué lorsque l’intensité du stress
Après coloration, les gels sont examinés en microscopie oxydatif est trop importante.
fluorescente. L’intensité relative de la fluorescence mesurée
dans la queue de la comète est directement proportionnelle à Les antioxydants de petit poids moléculaire sont facilement
la fréquence de cassures dans l’ADN. Ce procédé d’analyse dosables en routine par des méthodes spectrophotométriques
très rapide peut être appliqué sans difficulté pour des études (acide ascorbique, glutathion) et HPLC (ubiquinone,
en routine. Avec cette méthode, des dégâts oxydatifs au vitamines A et E, β–carotène). Depuis quelques années, il
niveau de l’ADN ont pu être observés chez des travailleurs existe des kits commerciaux permettant la mesure en routine
manipulant des produits carcinogènes et chez des patients de la SOD et de la GPx dans les globules rouges. Tout
souffrant d’un diabète insulino-dépendant. Depuis peu, un kit récemment, a été commercialisé un premier dosage immuno-
ELISA a vu le jour, ce qui permettra de rendre le dosage en logique permettant l’analyse en routine de la glutathion
routine de l’ADN oxydé encore plus facile. peroxydase plasmatique.
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défenses antioxydantes des globules rouges chez des Indépendamment de cette action, les PMNs peuvent aussi
personnes âgées étaient significativement diminuées en s’activer sous l’action de stimuli extérieurs comme les
comparaison avec des sujets jeunes puisque le temps corres- fragments de protéines, les cytokines, les endotoxines, les
pondant à 50% d’hémolyse est de 69 ± 14 minutes chez les fragments du complément qui sont libérés en grande quantité
sujets âgés contre 109 ± 12 minutes dans la population plus dans l’organisme au cours de différentes situations patholo-
jeune. giques (e. g. traumatisme crânien). Les produits de cette
activation sont cette fois libérés dans le milieu extracellulaire
• Bilan ferrique et ils s’attaquent dès lors à des tissus ou organes sains,
Le fer joue un rôle capital dans l’initiation et la propagation déclenchant ainsi un phénomène inflammatoire aigu. Une
des réactions radicalaires en permettant la formation des élévation des taux plasmatiques de MPO et d’élastase sera
EOA. Dans des conditions physiologiques, la transferrine donc le reflet d’une intense activation leucocytaire, et, par
possède une capacité de fixation importante en fer conséquent, la preuve indirecte que des EOA ont été
puisqu’elle est saturée à +/- 30 % avec ce métal de transition produites dans ces situations pathologiques. Ceci a été
de sorte qu’il n’est pas possible de trouver du fer libre (à l’état montré dans le SDRA et chez les patients soumis à une
actif) dans le sang de sujets en bonne santé. A ce titre, la
circulation extracorporelle lors de pontages coronariens. Des
transferrine est considérée comme un antioxydant important.
tests spectrophotométriques et immunologiques pouvant être
En situations pathologiques, le fer peut toutefois être libéré
de ses protéines de transport (ferritine, lactoferrine) sous utilisés en routine existent pour ces deux enzymes.
l’action des EOA et se retrouver dans le sang sous une forme
libre capable d’initier des réactions radicalaires.
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