UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA

UNAN-LEÓN
VETERINARIA

TEMA:
MEDIOS DE CULTIVO
COMPONENTE:
MICROBIOLOGÍA

AUTORES:
 JULISSA VARGAS
 JAVIER SEVILLA
 CESAR LOPEZ

GRUPO: 01

FACILITADOR:

JOSE LUIS
BONILLA

FECHA:
19 DE MAYO, 2020

“A LA LIBERTAD POR LA UNIVERSIDAD”

Clasificación de los medios de cultivo.
clasificacion de
los medios de
cultivo

Cuando la Segun su estado

Segun su
determina su fisico o
utilización
composición composición

Cuando lo determina su composición

 Medio común: se cultiva con los componentes mínimos necesarios para el
desarrollo de microorganismos no especiales.
 Medio sintético o definido: al ser usadas las sustancias químicas estas van
a incrementar el crecimiento del organismo que se pretenda cultivar.
 Medio semisintético: una combinación entre los dos anteriores.

Según su utilización

 Medio complejo o indefinido: componen sus herramientas químicas de

cultivo con diferentes nutrientes, sin saber su composición.
 Medio de enriquecimiento: no se limitan a los nutrientes normalmente
utilizados, sino que también hace uso de los que tienen características
establecidas.
 Medio selectivo o poli microbiano: es en el que se controla por completo el
crecimiento del microorganismo, diseñando por completo la forma en que
será cultivado y los medios para hacerlo.
 Medio inhibidor: es una variante del selectivo, en el que, en vez del
crecimiento del organismo cultivado, tiene como objetivo detenerlo o
ralentizarlo.
 Medio de transporte: en el que no se cultiva, sino que se mantiene durante
un tiempo hasta su traslado al sitio de cultivo definitivo.
 Medio de multiplicación: es clase de cultivo que se centra en la producción
de microorganismos múltiples, en grandes cantidades.
 Medio diferencial: se clasifican y cultivan los organismos por separado,
dependiendo de sus particularidades. Las sustancias nutritivas utilizadas
son las más indicadas para cada microorganismo.
 Medio de mantenimiento: se caracteriza por promover el crecimiento lento
en vez de rápido, de modo que las células puedan ser cultivadas durante
mucho tiempo sin riesgo a su deceso.
 Medio de identificación: tienen un objeto específico: evidenciar una
característica peculiar del microorganismo, de forma que el conocimiento
del mismo sea más profundo.
Según su estado físico o consistencia
 Medios de cultivo sólidos: con intervención de los líquidos, se preparan
composiciones solidas gelatinosas provenientes de proteína ósea animal o
biopolímeros de glucosa provenientes de algas marinas.
 Medios de cultivo líquidos: los presentados de esta forma, pueden cultivar
una gran variedad de microorganismos en forma suspensoria. Son
utilizados como medios de mantenimiento.
 Medios de cultivo semisólidos: es similar al sólido, pero con un porcentaje
menos de líquido,

Preparación de medios de cultivo

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran

comercializados; normalmente bajo la forma de liofilizados a los que es preciso
rehidratar. En estos casos la preparación del medio de cultivo se reduce
sencillamente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua
destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolábiles,
se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los componentes después de
que estos hayan sido previamente esterilizados en el autoclave y enfriados a
temperatura ambiente o a 40-50ºC si se trata de medios con agar.

Antes de su esterilización los medios líquidos se reparten en los recipientes

adecuados (tubos, matraces, etc.). Si es un medio sólido y se ha de distribuir en
tubos ó en matraces será necesario fundir el agar en baño María u horno
microondas, una vez fundido y homogenizado, se distribuye en caliente a los tubos
o matraces (no en placas Petri) se tapa y se esteriliza en la autoclave.

Una vez finalizada la esterilización los medios se dejarán enfriar a temperatura

ambiente y en el caso de medios sólidos contenidos en tubos deberán, en su
caso, inclinarse para que al solidificarse adopten la forma de agar inclinado o pico
de flauta(slant) si tal es su finalidad.

Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas
y en un ambiente aséptico (por ejemplo, en la proximidad de la llama de un
mechero Bunsen) es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la
operación para evitar que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se
distribuya por igual en todas las placas. También es posible conservar el medio
destinado a preparar placas Petri solidificado y estéril en tubos que se fundirán al
baño María en el momento de la preparación de las mismas.

Los caldos y medios sólidos pueden conservarse, una vez esterilizados, a

temperatura ambiente, pero para reducir su deshidratación y el consiguiente
cambio en las concentraciones de sus componentes es preferible conservarlos a
4ºC.
Control de calidad de los medios de cultivo:

2.1. Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo, con el

nombre del producto, nombre de la casa proveedora, fecha de recibo, fecha de
expiración, número de lote y fecha en que se abrió el frasco.
2.2. Cada lote preparado de medio de cultivo se debe probar antes de su uso
rutinario, mediante la inoculación de microorganismos cuyo comportamiento se
conoce, tanto para reacciones positivas, como negativas. Para esto pueden
utilizarse cepas bacterianas control de la ATCC (American Type Culture
Collection). Se debe guardar un registro de los resultados obtenidos.
2.3. Para el agar Mueller-Hinton, empleado como medio de soporte para realizar la
prueba de susceptibilidad por el método de difusión en agar (Método de Bauer and
Kirby), el control de calidad debe extenderse hacia la determinación de las
concentraciones de timina/timidina, la concentración de cationes, así como en
medir la profundidad del agar y que ésta sea igual en todo el plato de agar.
2.4. La concentración adecuada de timina/timidina se monitoriza utilizando la cepa
de Enterococcus faecalis ATCC 29212 y el disco de trimetoprin sulfa.
2.5. La concentración adecuada de cationes se monitoriza utilizando la cepa de
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 y el disco de gentamicina.
2.6. Las pruebas básicas de control de calidad de los medios preparados deben
incluir: medición del pH, pruebas de esterilidad, capacidad de crecimiento y
reacción, aspecto, dureza y profundidad del agar.

Los parámetros de incubación de los medios de cultivo

 Temperatura; Una de las condiciones para el cultivo es la temperatura de
incubación, la cual debe brindar condiciones óptimas para el crecimiento de
microorganismos, la mayoría se desarrollan a °35 de T°. Sin embargo, las
temperaturas singenésicas pueden ser altas como °60 típico del desarrollo
de S. faecalis o de °44 para E. coli, pero, también pueden ser bajas, °4 para
el cultivo de Listeria
 Humedad: Se debe mantener una fuente adecuada de humedad necesaria
para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio
 Nivel de C02: Gran cantidad de bacterias puede crecer en una atmosfera
con tensión de oxigeno normal. Los microorganismo anaerobios estrictos
solo se desarrollan adecuadamente en una atmosfera sin oxígeno
ambiental

Parámetros para el control de crecimiento y reacción bioquímica

 pH óptimo: Como la mayoría de las bacterias crecen óptimamente a
pH neutro, es práctica estándar para tamponar los medios de cultivo
cercanos al pH 7.
  Temperatura: la temperatura óptima para el crecimiento de estas
bacterias, denominados mesófilos, mide 37 "C, pueden crecer a
temperaturas entre 20 ° C y 45 ° C.
 Presión osmótica: La célula composición de la pared explica la
capacidad de las bacterias para soportar las presiones osmóticas
cambiantes. Cambio en la celda composición de la pared, inducida
por la acción de la lisozima o de antibióticos como la penicilina,
resultan en protoplastos formación.
Medios de cultivo utilizados frecuentemente en laboratorio de microbiología
 Agar nutritivo: Es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco
exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores de
crecimiento bacteriano.
 Agar Sangre: Medio para propósitos generales, para el aislameiento y
cultivo de numerosos microorganismos. Con la adicion de sangre. El medio
es útil tanto para el aislamiento de cultivo de microorganismos aeronbios y
anaerobios nutricionalmente exigentes, como para la observación de
reacciones de hemolisis.
 Agar: MacConkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos gram
negativos de fácil desarrollo
 Agar S-S (Salmonella-Shingella): Medio utilizado para el cultivo y
aislameitno de Salmonella spp. Y algunas especies de Shingella spp, a
partir de muestras de alimentos, heces y en otros en los cuales se
sospecha su presencia.
 Agar Chocolate (CHOC): es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo.
Es una variante del agar sangre. Contiene glóbulos rojos que han sido
lisados por el suave calentamiento a 56 °C. Este agar se usa para el
delicado y exigente crecimiento de bacterias respiratoria
 Agar Müller-Hinton: El agar Mueller-Hinton se utiliza para la realización del
ensayo de difusión en placa, en tanto que el caldo Mueller-Hinton se
emplea para la determinación de la concentración mínima inhibidora en el
ensayo de diluciones seriadas.
 Agar XLD: Como el agar de Hektoen, este medio es diferencial y selectivo
para Salmonella y Shigella. No necesita ser esterilizado en autoclave. Las
sales biliares inhiben a muchas enterobacterias y microorganismos Gram
positivos. El indicador rojo fenol permite la diferenciación de los no
fermentadores de lactosa (Salmonella y Shigella) como colonias incoloras
(rosa pálido). El citrato de hierro y amonio permite la visualización de
microorganismos productores de sulfhídrico como colonias con centros
negros. Los microorganismos que fermentan los carbohidratos del medio
(xilosa, lactosa y sacarosa) dan lugar a colonias amarillas.
Esquema de los diferentes medios de cultivo y pruebas bioquímicas
utilizadas para llegar al diagnóstico definitivo
Medios de cultivo Pruebas bioquímicas
Prueba Ureasa. Determina la capacidad de
un organismo de desdoblar la urea formando
una molécula de dióxido de carbono y dos
Agar Nutritivo moléculas de amoniaco por acción de la
enzima ureasa. Esta actividad enzimática es
característica de todas las especies de
Proteus y se usa sobre todo para diferenciar
este género de otras enterobacterias que dan
negativo o positivo retardado.
Prueba de Catalasa.La prueba se utiliza para
comprobar la presencia de la enzima
Agar Sangre catalasa que se encuentra en la mayoría de
las bacterias aerobias y anaerobias
facultativas que contienen el citocromo
oxidasa
Prueba de Lactosa. Las peptonas, aportan
los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de
carbono fermentable, y la mezcla de sales
biliares y el cristal violeta son los agentes
Agar MacConkey selectivos que inhiben el desarrollo de gran
parte de la flora Gram positiva. Por
fermentación de la lactosa disminuye el pH
alrededor de la colonia. Esto produce un
viraje del color del indicador del pH (rojo
neutro), la absorción en las colonias, y la
precipitación de las sales biliares. Los
microorganismos no fermentadores de
lactosa producen colonias incoloras.
Prueba de Lactosa y Prueba de Manitol. La
selectividad, está dada por las sales biliares
y el verde brillante, que inhiben el desarrollo
de bacterias Gram positivas, de la mayoría
de los coliformes y el desarrollo invsasor de
Agar S-S (Salmonella-Shingella) Proteus spp. Es diferencial debido a la
fermentación de la lactosa, y a la formación
de acidos sulhidricos a partir del tiosulfato de
sodio. Los pocos microorganismos
fermentadores de lactosa capaces de
desarrollar, acidifican el medio haciendo virar
al rojo el indicador del pH obteniéndose
colonias rosadas o rojas sobre un fondo

Agar Müller-Hinton
rojizo
Prueba de Citrato. Este medio contiene
citrato de sodio y fosfato de amonio como
fuentes de carbono y de nitrógeno
respectivamente, y azul de bromotimol, como
indicador de pH. Sólo las bacterias capaces
de metabolizar el citrato podrán multiplicarse
en este medio y liberarán iones amonio lo
que, junto con la eliminación del citrato
(ácido), generará una fuerte alcalinización del
medio que será aparente por un cambio de
color del indicador de pH, de verde a azul.

Cultivos Bacterias que se desarrollan

Agar Sangre Brucella, Corynebacterium, Listeria,
Neisseria, Vibrio, Staphylococcus
epidermis, Streptococcus pneumoniae,
Alfa Streptococus pyogenes
Agar Mueller Hinton estafilococos, enterococos, miembros
de la especie Enterobacteriaceae y
bacilos gram negativos aerobios (por
ej., Pseudomonas spp).
Agar MacConkey El cristal violeta inhibe las bacterias
gram positivas, en especial los
enterococos y estafilococos.

Agar Chocolate Neisserias, Haemophilus, N.

Gonorrhoeae, Streptococcus.
Agar S-S (Salmonella-Shingella) Salmonellaabony, Shingella flexneri, E.
coli, Enterococcus faecalis, Proteus
mirabilis
Bibliografía
 Poli, G., 2017. Microbiologia E Immunologia Veterinaria. Milano:
Edra.
 Juarez Parez, Ramon Antonio.1997, Bioquimica de los
microorganismos, Reverté S.a, Edra
 Quinn, P.J, Markey, B.K, Carter, M.E, Veterinary Microbiology and
Microbial Disease, Blackwell Sciense. Edra
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0doXI3MXnuM64D7_
 https://www.google.com/url?
sa=t&source=web&rct=j&url=https://www.bd.com/resource.aspx
%3FIDX%3D31333&ved=2ahUKEwj-vtvNs7jpAhUDh-
AKHcwEBtkQFjACegQIDRAI&usg=AOvVaw11-
TW8lW943G3zQgCABh4G
 https://www.google.com/url?
sa=t&source=web&rct=j&url=http://www.scielo.sa.cr/scielo.php
%3Fscript%3Dsci_arttext%26pid%3DS1017-
85462005000100002&ved=2ahUKEwiTi6Prs7jpAhXHUt8KHdc2CVc
QFjACegQIDRAH&usg=AOvVaw1cOFDljjpIJrTuE_E4J5Yd
 https://www.monografias.com/trabajos73/manual-control-calidad-
microbiologia/manual-control-calidad-microbiologia2.shtml