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Réalisé par :
Enseignant :
M.Naimi
I.Bachiri
2019/2020
1-Introduction :
La relation entre les aliments les microorganismes et l’homme est une longue
histoire
Les aliments ne sont pas souvent une valeur nutritive pour le consommateur
mais ils constituent souvent des milieux de culture idéaux pour la croissance
microbienne. Les micro-organismes peuvent affecter la qualité des aliments
pendant toutes les phases de la manipulation, depuis le producteur jusqu’au
consommateur final. Une croissance microbienne entraine soit la conservation,
soit la détérioration de la nourriture, selon les micro-organismes impliqués et les
conditions de la conservation
Les levures du genre Saccharomyces sont très connues pour leur utilisation en
industrie agroalimentaire. Elles sont utilisées pour la fabrication du pain, du vin
2-1-Réactif :
- Violet de gentiane
- Liquide de Lugol
- Alcool (agent de décoloration)
- Solution de fuschine ou de safranine
2-2-Milieu de culture :
- GN (Gélose Nutritive)
- VRBG (Violet Red Bile Glucose Agar)
2-3-Matériel :
- Microscope optique
- Lame
- Verre de montre
- Balance
- Bec de bunsen
- Tubes à essai (10-1) (10-2) (10-3) contenant le diluant stérile TSE
- Micropipette et des Embouts stérile 1ml
- 8 boites de pétrie (chaque groupe à utiliser 4 boites)
- Incubateur réglé à 30°C et 42°C pendant 72 heures
- Levure (Saccharomyces cerevisiae) 1G dillué dans solution de 9ml
- Pissette
- Spatules
- Bécher
- papier-filtre
1- Coloration de gram :
Par utilisation gélose VRBG (2 couche), cette gélose qu’il est recommandé pour
la recherche et le dénombrement des coliformes (les germes anaérobies) dans
levure panaire
La coloration de Gram est fondée sur l'action successive d'un colorant d'aniline,
le cristal violet, d'iode puis d'un mélange d'alcool et d'acétone. Dans un premier
temps, le colorant pénètre dans la paroi et le cytoplasme. Dans un second temps,
l'iode réagit avec le colorant et le rend insoluble. La perméabilité plus grande
des bactéries à Gram négatif à l'alcool permet la décoloration. Les bactéries à
Gram positif restent colorées en violet ou mauve. Une contre-coloration (par
exemple en rose) permet de visualiser à nouveau, les corps cellulaires des
bactéries à Gram négatif. Pour faire cette coloration on est besoin de
-Le violet de gentiane
-Liquide de Lugol
Préparation du Frottis :
En effectuant une fixation simple à l'eau et à la flamme ةsur une lame, déposer
une goutte d'eau stérile. Ajouter à l'anse de platine stérilisée une goutte de la
colonie isolée
1-Coloration primaire :
2-Mordançage au lugol :
Dans la première pas on va faire une dilution décimale qu’il est effectuée en
transférant une prise d'essai de 1mL de suspension à diluer dans un tube
contenant 9 ml (10-1/10-2/10-3…)
-Puis il a été transféré dans un tube contenant 9ml puis ce tube doit être bien
agité
- Chaque ces 2 tubes (10-1) (10-2) ont transmis 1 ml dans des boites de pétri (2
boites pour chacun)
-Les mêmes étapes précédente, nos groupe il est reçoit la dilution mère (10-1)
qu’il est prépare par le groupe n02
5-Résultat :
1-Examen microscopique après coloration de gram :
6-Conclusion :
Afin pour cette nouvelle expérience en microbiologie alimentaire je conclu que
le contrôle microbiologique (bactériologique) de Saccharomyces cerevisiae ou
de n’importe quel aliment atteindre seulement une objectif de évaluer le risque
présent par cette matière qu’il est nécessaire pour des diverses productions
alimentaire de groupe brun