Métodos microbiológicos rápidos

17.1 INTRODUCCIÓN
Las tecnologías de método microbiológico rápido (RMM) tienen como objetivo
proporcionar resultados de prueba más sensibles, exactos, precisos y reproducibles en
comparación con los métodos convencionales basados en el crecimiento. Se puede
interpretar que los RMM incluyen cualquier técnica o proceso microbiológico que aumente
la velocidad o eficiencia de aislar, cultivar o identificar microorganismos en comparación
con los métodos convencionales. Aunque el uso de la palabra "rápido" se usa a menudo
para describir la gama de técnicas empleadas, algunos de los métodos incluidos aquí no dan
un resultado más rápido, sino un resultado más exacto, preciso o detallado, por lo que
proporcionan más información sobre en que basar una decisión. A veces se hace referencia
a métodos alternativos en relación con los métodos rápidos, aunque los métodos
alternativos no necesariamente tienen que ser "rápidos". Cuando se describe una prueba de
compendios (como la prueba de esterilidad), se supone que es el método estándar, y a partir
de esto, un método alternativo es simplemente uno que es diferente del método descrito en
la farmacopea. Los métodos rápidos normalmente implican alguna forma de
automatización, y los métodos a menudo capturan datos electrónicamente. Con varias
tecnologías diferentes disponibles en el mercado, el microbiólogo tiene que tomar una
decisión difícil, y a veces costosa, al seleccionar el método óptimo. Al considerar métodos
rápidos, el nuevo método debe ofrecer un mayor nivel de garantía de calidad. Es necesario
que haya un beneficio claro y demostrable al adoptar el método alternativo. Se discuten
varias ventajas en este capítulo. Este capítulo, si bien aborda algunas de las tecnologías
emergentes, no trata tanto sobre los diferentes RMM que están disponibles; está más
preocupado por las consideraciones que se necesitan para su selección. Como tal, el
capítulo proporciona algunos consejos para que el microbiólogo los tenga en cuenta al
elaborar una justificación para la selección de un método microbiológico rápido o
alternativo. El capítulo describe diferentes tecnologías, pero no describe diferentes
compañías comerciales (hacerlo podría fechar el capítulo y podría arriesgarse a dar
preferencia a un sistema que no es necesariamente el más robusto). El lector interesado en
una determinada tecnología y aplicación debe consultar literatura contemporánea.
17.2 El mundo cambiante de la microbiología
Los métodos microbiológicos convencionales, incluidos los establecidos y descritos en la
farmacopea europea (Ph. Eur.), japonesa y estadounidense (USP), han servido a los
microbiólogos durante el siglo pasado y han ayudado a garantizar la producción de
productos microbiológicamente seguros. Por ejemplo, se ha verificado con éxito una amplia
gama de métodos microbiológicos utilizando métodos de recuento en placa para enumerar e
identificar microorganismos (dentro de un margen de error aceptado). Sin embargo, los
métodos convencionales tienen limitaciones. Estas limitaciones incluyen el tiempo
necesario para producir un resultado y la incapacidad de muchos métodos para recuperar
todos los microorganismos que podrían estar presentes en una muestra. Teniendo en cuenta
estos problemas, el tiempo necesario para producir un resultado se relaciona con el período
de incubación requerido para los métodos convencionales, que dependen del agar como
medio de crecimiento, o para que los microorganismos crezcan en el cultivo de caldo.
Dichos métodos son relativamente lentos y los resultados solo están disponibles después de
un período de incubación (entre 2 y 10 días, según la aplicación). Una limitación adicional
es la capacidad de cultivo y la cuestión de los microorganismos viables, pero no cultivables
(VBNC). Muchas bacterias, aunque mantienen la actividad metabólica, no son cultivables
debido a su fisiología, rigurosidad o mecanismos de adaptación al medio ambiente. Algunas
investigaciones sugieren, por ejemplo, que menos del 10% de las bacterias que se
encuentran en salas limpias son cultivables. Por lo tanto, es cierto que algunos RMM,
especialmente aquellos que no dependen del crecimiento, pueden proporcionar un recuento
de recuperación más alto en comparación con los métodos tradicionales. Algunos métodos
rápidos producen resultados en los que se puede medir la cantidad o tipos de
microorganismos. Con métodos rápidos que no “crecen” directamente los
microorganismos, como los que detectan actividad metabólica, es posible correlacionar las
nuevas mediciones, como una unidad fluorescente, con la medición anterior (es decir, la
unidad formadora de colonias; UFC) y establecer nuevos niveles de aceptación. Estas
preocupaciones con las limitaciones de los métodos convencionales, así como las
posibilidades que ofrecen los avances tecnológicos, condujeron a una nueva generación
emergente de métodos microbiológicos rápidos y alternativos. Los RMM y los métodos
microbiológicos alternativos incluyen cualquier técnica o proceso microbiológico que
aumente la velocidad o la eficiencia de aislar, cultivar o identificar microorganismos en
comparación con los métodos convencionales. En cuanto a qué métodos rápidos son, de
acuerdo con la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA):
Los RMM se basan en tecnologías que pueden ser marcadores celulares basados en el
crecimiento, la viabilidad o los sustitutos de un microorganismo (es decir, a base de ácido
nucleico, a base de ácido graso). Los RMM se automatizan con frecuencia, y muchos se
han utilizado en laboratorios clínicos para detectar microorganismos viables en muestras de
pacientes. Según los informes, estos métodos poseen una mayor sensibilidad para detectar
cambios en la matriz de la muestra (por ejemplo, subproductos del metabolismo
microbiano), en condiciones que favorecen el crecimiento de microorganismos.
Aunque el uso de la palabra "rápido" se usa a menudo para describir la gama de técnicas
empleadas, algunos de los métodos incluidos en este colectivo no dan un resultado más
rápido; en cambio, proporcionan un resultado más exacto, preciso o detallado (y, por lo
tanto, se emplea el término "alternativa"). Los RMM se pueden aplicar a una variedad de
pruebas microbiológicas, que incluyen materias primas, agua, productos intermedios,
productos finales y monitoreo ambiental. Existe una gama suficiente de RMM para
proporcionar una evaluación de la calidad microbiológica en toda una operación de
producción. Los RMM también pueden ser utilizados por investigación y desarrollo. Por
ejemplo, para comprender mejor las formulaciones de productos en términos de si es
probable que los microorganismos sobrevivan o se maten.
Los RMM se utilizan esencialmente como alternativas a cuatro tipos principales de
determinaciones microbiológicas convencionales:
● pruebas cualitativas para la presencia o ausencia de microorganismos (p. Ej., Mediciones
de turbidez de enriquecimiento del crecimiento). Por ejemplo, para determinar si
Escherichia coli está en una muestra de agua;
● pruebas cuantitativas para la enumeración de microorganismos (p. Ej., Métodos de
recuento en placa para determinar la carga biológica de una muestra);
● pruebas cuantitativas de potencia o toxicidad (por ejemplo, ¿qué nivel de endotoxina hay
en la muestra?);
● pruebas de identificación (p. Ej., Caracterización bioquímica y morfológica).
17.3 Ventajas de los métodos rápidos.
Al observar algunas de las ventajas que ofrecen los métodos rápidos, además del tiempo
hasta el resultado, otra área importante es el rendimiento. La mayoría de los sistemas
rápidos permiten volúmenes más altos que el método tradicional. En entornos con
volúmenes considerables de materias primas, lotes en proceso y productos finales para
probar, un alto rendimiento puede conferir una ventaja importante para mantener el tiempo
de actividad de fabricación y mover un inventario lo más rápido posible. Además, los
RMM pueden ayudar con:
● diseñar procesos más robustos que puedan reducir las oportunidades de contaminación
(encajar con algunos objetivos de calidad por diseño);
● desarrollar un proceso de acción correctiva y preventiva más eficiente;
● confirmar que el proceso se encuentra en un estado continuo de control microbiológico a
través del monitoreo "en tiempo real" (que cumple con algunos objetivos de prueba
analítica del proceso);
● ayudando con el proceso continuo y la mejora del producto.
Otras ventajas incluyen la eficiencia laboral y la reducción de errores. La reducción de
errores es uno de los mayores beneficios potenciales de la enumeración rápida. Si bien
algunos métodos requieren una intervención humana adicional y, por lo tanto, crean un
mayor potencial de errores, otros automatizan los procesos más propensos a errores. El
conteo microbiano, los cambios de incubación y la entrada de datos pueden ser mucho más
confiables con el equipo adecuado. Podría decirse que los RMM permiten adoptar un
enfoque proactivo en casos de contaminación microbiana, especialmente en relación con
resultados fuera de especificación. Aquí, los RMM permiten respuestas más rápidas a
situaciones fuera de tendencia al proporcionar resultados en tiempo real o casi en tiempo
real. Esto permite tomar acciones correctivas antes. Además, al considerar un RMM, el
nuevo método debe ofrecer un mayor nivel de garantía de calidad. Es necesario que haya un
beneficio claro y demostrable al adoptar el método alternativo.
Ejemplos de esto incluyen:
● la capacidad de tomar decisiones comerciales críticas más rápidamente;
● la prevención de retiros del mercado mediante una mayor sensibilidad del método a los
microorganismos;
● la detección de microorganismos "objetables";
● recuperación de números microbianos más altos o precisos;
● existencias reducidas potenciales mediante tiempos de liberación más rápidos;
● mejora en la eficiencia de fabricación;
● una toma de decisiones más proactiva, en lugar de reactiva.
Debido a estas ventajas, los RMM son áreas de considerable inversión por parte de los
vendedores y atraen el interés de los microbiólogos.