- Déterminer la stabilité membranaire des globules rouges puis de tracer la
courbe de LEVEY- JENNINGS. - Doser la glycémie
II. Matériels, appareils et réactifs
- Tubes à hémolyse - Eau physiologique - Eau distillée - Réactifs pour le dosage du glucose - Cônes, micropipettes - Centrifugeuse - Spectrophotomètre
III. Manipulation
1ère manipulation : stabilité membranaire
Etudes de la stabilité des membranes
La lyse des membranes peut être étudiée chez le globule rouge (hématies), par mesure directe de l'hémolyse
L'hémolyse consiste à mesurer la quantité d'hémoglobine qui sort des globules
rouges. Cette mesure est simplement faite en séparant par centrifugation l'hémoglobine et les cellules intactes; en mesurant l'absorption du surnageant, contenant l'hémoglobine libérée, on peut savoir la proportion des cellules brisées.
I. Manipulation
- Disposer de 11 tubes à hémolyses
- Distribuer de façon décroissante de l’ordre de 100ul d’eau distillée ; de 900ul à 100ul du tube 1 au tube 9 et y ajouter de l’eau physiologique de l’ordre de 100ul du tube 9 au tube 1 (pour un volume total de 1 ml par tube). - Centrifuger à 3000 tours pendant 5minutes - Lire le surnageant au spectrophotomètre
2ème manipulation : dosage de la glycémie
Principe : On utilise les propriétés réductrices du glucose. À chaud et en milieu alcalin, il y a réduction de l'acide 3,5-dinitrosalycilique ou DNS (aussi appelé acide 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoïque) qui joue le rôle d'oxydant, le glucose étant le réducteur
- Disposer de 10 tubes à hémolyses
- Pipeter 1ml du réactif dans les tubes - Ajouter 10ul du sérum de l’échantillon - Incuber à température ambiante pendant 10 minutes - Homogénéiser puis passer au spectrophotomètre
Le diagramme de Levey-Jennings est un graphique sur lequel des données de contrôle de qualité sont tracées pour donner une indication visuelle du bon fonctionnement d’un test de laboratoire. Le système de Westgard Le système de Westgard comporte 6 règles élémentaires. Ces règles permettent de décider si un résultat de contrôle interne peut être déclaré acceptable ou non. Globalement, on définit comme « conforme » tous les résultats de CQI se situant à l’intérieur des seuils d’avertissement.
La lyse des membranes peut être étudiée de deux façon chez le globule rouge (hématies), par mesure directe de l'hémolyse et par mesure de la déformation cellulaire.
L'hémolyse consiste à mesurer la quantité d'hémoglobine qui sort des globules
rouges. Cette mesure est simplement faite en séparant par centrifugation l'hémoglobine et les cellules intactes; en mesurant l'absorption du surnageant, contenant l'hémoglobine libérée, on peut savoir la proportion des cellules brisées.
Principe[modifier | modifier le code] On utilise les propriétés réductrices du glucose. À chaud et en milieu alcalin, il y a réduction de l'acide 3,5-dinitrosalycilique ou DNS (aussi appelé acide 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoïque) qui joue le rôle d'oxydant, le glucose étant le réducteur. Réaction de réduction de l'acide 3,5-dinitrosalicylique en acide 3-amino-5-nitrosalicylique (aussi appelé acide 3-amino-2-hydroxy-5-nitrobenzoïque) :
Le glucose, quant à lui, est oxydé en divers produits d'oxydation :
Glc → produits d'oxydation + ne– L'acide 3-amino-5-nitrosalicylique est un composé rouge. Cette réaction n'est pas stœchiométrique : il n'y a pas de bilan d'oxydoréduction. L'intensité de la coloration rouge est proportionnelle à la concentration de l'ose si l'on opère dans des conditions physico-chimiques constantes. Les droites d'étalonnage ne passent pas toujours par l'origine. Cette méthode n'est pas applicable au dosage d'un mélange complexe de glucides réducteurs.
Protocole[modifier | modifier le code] Matériel[modifier | modifier le code]
Spectrophotomètre et ses cuves
Tubes à essai lavés et secs Pipette automatique Béchers Fioles jaugées
Qu’est-ce qu’un diagramme de Levey-Jennings?
Le diagramme de Levey-Jennings est un graphique sur lequel des données de contrôle de qualité sont tracées pour donner une indication visuelle du bon fonctionnement d’un test de laboratoire. La valeur moyenne est la valeur attendue pour le contrôle
La distance par rapport à la moyenne est mesurée en écarts-types (ou SD pour
