Salmonelle

Principe
Un processus de recherche correspondant à un pré- enrichissement voire un enrichissement,
est suivi d’un isolement sur milieu gélosé sélectif .

Techniques de préparations Les échantillons.

Pré enrichissement non sélectif :

Dans une bouteille stérile de 250ml, 25g d'échantillon sont pesés et additionnés de 225ml
d'eau peptonée tamponnée. L’ensemble est agité : c’est la solution mère (SM).

Enrichissement sur RAPPAPORT-VASSILIADIS:

Le bouillon de Rappaport-Vassiliadis est utilisé pour l'enrichissement sélectif des

Salmonelles. 1OmL de Rappaport Vasiliadis est ensemencé avec 0,1mL d’eau peptonée dans
un tube à essai stérile. Le tube est incubé à 37°C pendant 24h.

COMPOSITION

Peptone de soja 4,5

Chlorure de sodium 7,2
Dihydrogénophosphate de potassium 1,26
Chlorure de magnésium 6H2O 13,8
Vert malachite 0,036
pH 5,2 ± 0,2
L’isolement
On prend 2 gouttes de bouillon d’enrichissement et on l’ensemence en stries à l’aide de
pipette râteau sur le milieu Hecktoen puis incuber à 37°C pendant 24h.

Culture sur HEKTOEN ENTERIC AGAR (HEA) :

La gélose Hektoen est un milieu d’isolement sélectif des bacilles à Gram négatif non
exigeants et utilisé pour la recherche des Salmonella et des Shigella dans les selles.
 Composition gélose Hektoen

Protéose-Peptone 12,0 g

Extrait de levure 3,0 g

Désoxycholate de sodium 9,0 g

Lactose 12,0 g

Saccharose 12,0 g

Salicine 2,0 g

Bleu de bromothymol 65 mg

Fuchsine acide 100 mg

Thiosulfate de sodium 5,0 g

Citrate ferrique ammoniacal 1,5 g

Chlorure de sodium 5,0 g

Agar 15,0 g

pH = 7,5

Principe
Le milieu HEA solide de couleur marron rougeâtre est sélectif pour Salmonella par la
présence de sels biliaires qui inhibent la croissance de germes indésirables. Le genre
Salmonella produit des colonies bleu-vert après incubation à 37°C pendant 24h.
Mode opératoire
A l'aide d'une anse, l'inoculum est ensemencé en strie sur le milieu HEKTOEN contenu
dans une boîte de Pétri.
Lecture
Les colonies des Salmonelles sont de tailles moyennes, lisses et colorées en bleu violacé
avec un centre noir.