Biologia Celular

Métodos de Estudo
 Métodos de Estudo

 Métodos de Exame
o In vivo
A fresco
Com uso de corantes vitais
o Post morten
Permite o preparo do material para ser fatiado em cortes
Fixado por
 Congelação  conserva algumas atividades enzimáticas
 Impregnação em parafina
 Impregnação em parafina
o Fixação
o Desidratação
o Diafanização ou clarificação
o Inclusão em parafina

 Preparação dos Cortes

 Fixação
o Evita a digestão dos tecidos por enzimas celulares e por bactérias
o Preserva a estrutura e a composição molecular das células

 Desidratação
o Uso do etanol para extrair gradualmente a água dos tecidos

 Diafanização
o Torna o tecido translúcido
 o Uso do xilol (ou xileno)

 Inclusão em parafina
o O material é embebido em parafina líquida (60°C) que endurece ao ser
retirada da estufa, formando um bloco rígido que contém os tecidos
o Micrótomo: aparelho utilizado para fazer os cortes utilizados na
microscopia

 Coloração (HE)

 Hematoxilina: corante básico (azul/roxo)

 Eosina: corante ácido (vermelho)
 1) Corte impregnado com parafina
 2) Banho do corte no xilol, a fim de remover a parafina
 3) Banho do corte em diferentes alcoóis (100%, 90%, 75% respectivamente)
 4) Colocar o corte em água
 5) Corar
 6) Lavar com água
 7) Desidratar, utilizando diferentes alcoóis: 70%, 95%, 100% respectivamente
 8) Colocar em xilol
 9) Montagem (com resina especial) e colocação da lamínula

 Microscópios

 O microscópio de luz também pode ser chamado de microscópio de campo

claro
 Microscópio confocal: permite focalizar um só plano de foco (muito delgado)
do espécime
 Microscópio eletrônico:
o MET: transmissão
o MEV: varredura  permite a demonstração de superfícies, como os cílios
o Fotos apenas em preto e branco
 Métodos de Estudo

 Histoquímica e citoquímica
 Imunocitoquímica
 Cultura de células
 Auto-radiografia
 Fracionamento celular

 Histoquímica e Citoquímica

 PAS (ácido periódico de Schiff): demonstra a presença de polissacarídeos

 Métodos: utilização de reações químicas ou interações moleculares para
identificar e localizar substâncias nas células e tecidos.
 Imunocitoquímica

 Antígenos: moléculas estranhas ao organismo

 Anticorpos: moléculas produzidas pelo organismo após ser exposto a
antígenos

 Cultura de células

 Células (tecidos ou órgãos) são separadas mecanicamente ou por tratamento

enzimático
 Células isoladas (culturas primárias) são cultivadas em soluções vitais

 Radio-Autografia

 Células: precursoras radioativas

 Emulsão fotográfica: colocada sobre o tecido no escuro

 Exposição/revelação  cristais de Ag da emulsão

Grânulos pretos de Ag metálica

 Fracionamento Celular
 Centrifugação diferencial  separação de componentes celulares em função
de seus diferentes coeficientes de sedimentação