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Exercices – Méthodes chromatographiques

4. Chromatographie en phase gazeuse

EXERCICE 4.1. On souhaite séparer un mélange de n-heptane (téb 98°C) et de n-propanol (téb 97°C) par CPG. Pour
ce faire, on utilise deux colonnes chromatographiques différentes : la première est de type « Squalane » et l’autre
est une colonne « Carbowax ».
a) Quelle est la nature de ces deux phases
A. n-propanol B. n-propanol
stationnaires ? S’agit-il de phases stationnaires n-heptane n-heptane
polaire ou apolaire ?
b) Attribuez les chromatogrammes A et B à la
colonne correcte. Justifiez votre réponse en vous
aidant de la structure des composés.

EXERCICE 4.2. Soit un mélange de 4 n-alcanes homologues (C10 – C14) que l’on injecte en CPG sur une colonne
SPB-35 (35% phényl 65% méthyl polysiloxane) en régime isotherme à 114°C.
a) De quel type de phase stationnaire s’agit-il ?
b) Comment varie la température d’ébullition avec la longueur de la chaîne carbonée ?
c) Donnez l’ordre d’élution des 4 alcanes et justifiez votre réponse.

EXERCICE 4.3. On souhaite déterminer la composition centésimale (en volume) d’un mélange de différents
alcools. Le chromatogramme obtenu suite à l’injection de ce mélange inconnu en CPG est présenté ci-dessous
(chromato. A). Un mélange comprenant des proportions identiques de 4 alcools (méthanol, éthanol, propanol et
butanol) est injecté de la même manière (chromato. B).
a) Identifiez tous les pics sur les deux chromatogrammes.
b) Quel est le % volumique de chaque alcool dans le mélange comprenant les 4 alcools ?
c) Calculez les facteurs de réponse pour les 4 alcools étudiés.
d) Déterminez le % volumique des alcools présents dans le mélange inconnu.
e) Comment s’appelle cette méthode de dosage ?
f) Pourquoi doit-on calculer des facteurs de réponse ?

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A. B.

Mélange Mélange 4 alcools


inconnu

EXERCICE 4.4. Le valproate de sodium ou Dépakine® est un médicament actif dans


diverses formes d'épilepsie. Après administration orale, il est présent sous sa forme
active : l'acide valproïque (Fig. 1). Les concentrations thérapeutiques optimales se
situent entre 40 et 100 µg/mL. Pour adapter la posologie, il est nécessaire de
déterminer le taux sanguin du composé. Ceci est réalisé par CPG.
Fig.1. Structure de l’acide
valproïque

Dans un premier temps, l’acide valproïque est extrait du sérum par un solvant organique, le chloroforme. Ensuite,
il est dérivé au moyen de triméthylchlorosilane avant d’être finalement dosé par CPG en présence d’un standard
interne (avec réalisation d’une droite d’étalonnage au préalable).

Voici les chromatogrammes de 4 injections : un blanc, un témoin acide valproïque, un témoin standard interne et
un mélange acide valproïque - standard interne.

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a) Donnez le temps de rétention de l’ac. valproïque: ……………………… et du standard interne : …………………………..


b) Voici les valeurs de surface des pics obtenus pour 4 étalons en acide valproïque injectés dans les mêmes
conditions :

Concentration Tr Surface y=?


(µg/mL) (min)
100 3.64 33924
4.42 53984
75 3.64 25204
4.43 51336
50 3.63 15875
4.42 46132
25 3.64 10094
4.42 45235

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Exercices – Méthodes chromatographiques

L’équation de la droite d’étalonnage obtenue sur base de ces injections est

y = 0.0054 x + 0.081.

Que représente y ? A partir des données du tableau (et non à partir de l’équation de la droite d’étalonnage !),
calculez y pour chaque étalon (complétez le tableau ci-dessus).

c) Calculez la concentration en acide valproïque d’un échantillon de sérum pour lequel on a obtenu les résultats
suivants :
Tr (min) Surface
3.64 3744
4.42 7142

d) Le chromatographe utilisé nécessite l’emploi de trois gaz différents : le dihydrogène, l’hélium et l’oxygène.
Quel type de détecteur comporte le chromatographe ? Expliquez le rôle de chacun des gaz.
e) Quel est le rôle du triméthylchlorosilane ? Que se passerait-il si on omettait de l’ajouter ? Donnez-en une
explication.

EXERCICE 4.5. Un producteur de beurre fermier décide de faire réaliser une analyse chromatographique de la
matière grasse du beurre qu’il produit pour déterminer la teneur en acide gras polyinsaturés et ainsi, juger de
l’opportunité de changer l’alimentation de son cheptel. En effet, la composition en acide gras du beurre change
selon l’alimentation de la vache et une ration complémentée en tourteaux de colza permettrait d’augmenter le
taux d’acides gras polyinsaturés, meilleurs pour la santé humaine.
a) Après avoir extrait les triglycérides du beurre, ceux-ci sont hydrolysés pour libérer leurs acides gras.
Quelle étape doit-on ensuite effectuer sur ces acides gras avant de pouvoir réaliser une injection dans le
chromatographe en phase gazeuse ? Expliquez.
b) Lors de la préparation des échantillons nécessaires à la réalisation de la droite d’étalonnage et de
l’échantillon de beurre, on ajoute une certaine quantité de standard interne. Pourquoi ? Expliquez.
c) Certaines des conditions opératoires utilisées pour la chromatographie sont présentées dans le tableau
suivant :
Injection Split (1 : 50), 1.0 µL, 270°C
Colonne OV-1 (100% diméthylsiloxane, 0.25 µm), 0.25 mm * 30 m
Détection FID, 300°C
Programme de température 100°C, 2 min ; 30°C/min jusque 160°C, 160°C, 2 min

Sur base de ce tableau, quels sont tous les renseignements que vous pouvez tirer ?

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