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Immuno-

dosages

Méthodes
optiques
Introduction
à la chimie Chimie
ana
analytique
appliquée
Méthodes
séparatives

Méthodes
électro-
chimiques
Charlier C.
Bac2 – Technologie animalière
HELHa – Fleurus
2017
7. La chromatographie en phase liquide

Phase mobile Phase stationnaire


LIQUIDE 5 phénomènes de rétention des planaire ou dans une
solutés par la phase stationnaire colonne

Phase
mobile

Signal

Chromatographie 13
La chromatographie échangeuse d’ions
3 étapes

FIXATION
LAVAGE ELUTION

Par modification du pH

Par compétition

Chromatographie 14
La chromatographie échangeuse d’ions

Elution par palier en NaCl


Elution par gradient de NaCl v
v
v
v
v

Chromatographie 15
La chromatographie d’affinité
3 étapes

FIXATION LAVAGE ELUTION Par


modification
du pH ou de la
force ionique

Par compétition

Elution par compétition avec


l’imidazole

Chromatographie 16
La chromatographie d’exclusion de taille

Chromatographie 17
Chromatographie 18
La chromatographie liquide d’adsorption et de partage

Phase stationnaire
solide Phase stationnaire
liquide

Adsorbants Liquide fixé sur un


polaires support
Support stationnaire
chimiquement modifié

Adsorbants
non polaires

Résolution limitée ou temps d’élution fort long !


Chromatographie 19
HPLC = Chromatographie Liquide Haute Pression
Chromatographie Liquide Haute Performance
(High Performance Liquid Chromatography)

20
Chromatographie
Chromatographie Liquide Haute Performance
Valve d’injection et boucle d’échantillonnage

LOAD

INJECT

Chromatographie 21
Chromatographie Liquide Haute Performance
Colonnes chromatographiques

• 5 à 25 cm de long
• 3 à 5 mm de diamètre intérieur
• 3 à 5 µm de taille pour les particules

Phases stationnaires
Solide
• Chromatographie d’adsorption
Echangeuse d’ions
• Chromatographie de partage

Phase normale
Phase inverse

Chromatographie 22
Chromatographie Liquide Haute Performance
Phases stationnaires en chromatographie de partage

Chromatographie 23
Chromatographie Liquide Haute Performance
Choix de la phase mobile (éluant)

Mode isocratique ou gradient d’élution


Chromatographie 24
Chromatographie Liquide Haute Performance
Détecteur

• Spectrophotomètre UV-visible

• Spectrofluorimètre

• Spectromètre de masse

Chromatographie 25