TRAVAUX PRATIQUES DE BIOCHIMIE T STL

DOSAGE POTENTIOMÉTRIQUE DE LA GLYCINE

1. LA GLYCINE
La glycine est un acide aminé neutre (ne possédant pas de fonction ionisable sur la chaîne latérale). En
solution aqueuse, elle se présente sous forme d’un ion bipolaire (zwittérion).
1
La charge nette de la molécule est nulle à pH = pHi avec pHi = (pK1 + pK 2 )
2
Titration de la fonction carboxylique par un acide fort : pk 1
+
O +
O
H 3N CH C + +
+ Cl- H 3N CH C + Cl-
- H
O OH
H H

Titration de la fonction aminée par une base forte : pk 2

O O
+
H 3N CH C + Na + + OH- H 2N CH C + Na + + H 2O
-
O O-
H H

2. TITRATION DE LA GLYCINE
2.1. Dosage par la soude
Dans un bécher forme haute de 100 mL placer E = 10 mL de solution de glycine à ≈ 0,05 mol.L-1 .
Ajouter une quantité suffisante d'eau distillée pour que les électrodes de mesure du pH-mètre
plongent sans risque. Mesurer le pH et verser la solution de soude de concentration exactement
0,0500 mol.L-1 , par fractions de 0,2 mL ou de 0,5 mL en notant le pH à chaque ajout. Verser jusqu’à
15 mL.
Les volumes d’ajout seront choisis afin d’avoir le maximum de précision dans la zone du point
d'équiva lence.
2.2. Dosage en présence de méthanal (Formol-titration de Sörensen)
Recommencer le même dosage après avoir ajouté aux 10 mL de glycine environ 5 mL de méthanal1
(C) à 40 % neutralisé.
2.3. Dosage de la glycine par l'acide chlorhydrique
Refaire le dosage du § 2.1. mais en remplaçant la solution de soude par une solution d'HCl de
concentration exactement 0,0500 mol.L-1 .

3. COMPTE RENDU
Tracer sur un même graphique, les courbes pH = f(V NaOH ) obtenue sans et en présence de méthanal.
En utilisant des abscisses négatives tracer pH = f(V HC l ).
À partir du graphique déterminer le volume de soude versée à l’équivalence et les valeurs des pK1 et
pK2 de la glycine.
Déterminer la concentration de la glycine.
Le tracé se fera avantageusement à l’aide du logiciel Regressi : saisir sur la première page pH =
f(VNaOH ), sur la seconde pH = f(V NaOH ) en présence de méthanal et sur la troisième page pH = f(V HCl ).en
saisissant des volumes négatifs .
Tracer le graphique en superposant les pages.
L’utilisation du curseur tangente sur le graphique représentant la courbe de neutralisation en pré -
sence de méthanal permet de localiser le point d’équivalence du dosage et d’en déduire les caractéris-
tiques des courbes de neutralisation : la détermination des pK pourra alors se faire en positionnant le
curseur réticule à la demi-équivalence.
Un nouveau traçage des tangentes permet d’afficher automatiquement les valeurs des pK.
Voir les informations données au tableau.

1 Méthanal : toxique - R : 23/24/25 - 34 - 40 - 43 et S : 26 - 36/37/39 - 45 - 51

TP - titrage des AA page 1 DH - 06/03/06

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TITRAGE DES ACIDES AMINÉS

Pour la manipulation on utilisera des solutions d’acide chlorhydrique et d’hydroxyde de sodium de
concentration identique égale à 0,050 mol.L -1 .
Les acides aminés sont des composés amphotères (acides en présence d’une base et basiques en présence
d’un acide).

+
O ± H+ +
O ± H+ O
H3N CH C H3N CH C H2N CH C
OH O- O-
R R R

Acide Zwitterion Basique

Le but de la manipulation est de doser une solution de glycine et de déterminer expérimentalement (par
titration) les valeurs des 2 pK de la glycine.
On utilise un pH-mètre équipé d'une électrode mixte (électrode de verre dont le pH varie avec [H+ ] et une
électrode de référence au Calomel). Ces électrode fournissent des résultats fiables pour des pH allant de 2
à 10. Dans le cas du dosage d'un acide aminé par une base ou un acide fort, les pH des points d'équiva-
lence sont situés en dehors de cette zone. Il faut donc utiliser un artifice pour pouvoir situer le point
d'équivalence sur la courbe de titration.
On y parvient en réalisant le dosage en présence d’un excès de méthanal (formol titration) qui se fixe sur
la fonction NH+3 , selon le schéma suivant :
HOH 2C + O
O
+
H 3N CH C + 2 HCHO NH CH C
OH méthanal HOH 2C OH
R R
Dérivé N-dihydroxyméthylé
amine tertiaire

La fonction amine tertiaire ainsi dihydroxyméthylée est nettement plus acide, ce qui permet de détermi-
ner graphiquement le point équivalent, puis de déterminer le pK de la fonction impliquée dans cette ré-
action.

1 : courbe en présence de méthanal 2 : courbe de dosage par NaOH 3 : courbe de dosage par HCl

Doc - titrage des AA page 1/1 DH - 06/03/06

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Titrage de la glycine

PRODUITS
HYDROXYDE DE SODIUM EXACTEMENT 0,050 mol.L-1 50 mL / ÉLÈVE
-1
HCL EXACTEMENT 0,050 mol.L 25 mL / ÉLÈVE
SOLUTION DE GLYCINE ≈ 0,05 mol.L-1 50 mL / ÉLÈVE
MÉTHANAL Á 40 % (V/V) NEUTRE 15 mL / ÉLÈVE
TAMPONS POUR STANDARDISER LES pH-MÈTRES

MATÉRIEL
pH-MÈTRE + ÉLECTRODE DE VERRE + BARREAU AIMANTÉ + AGITATEUR MAGNÉTIQUE
BURETTE DE GESLER
BECHER FORME HAUTE

Matière d’œuvre - titrage des AA page 1 DH - 06/03/06