Centre Universitaire NourBachir

Faculté des sciences

Département S.N.V.
Master 2 Biotechnologie microbienne
Module d’Ecologie microbienne

TP N°=03

Mesure des activités PGPR :

La production de l’Acide Indole Acétique (AIA)

La production de l'AIA a été testée sur le bouillon King B supplémenté avec 02 g /L de

tryptophane. Les différents milieux ont été inoculés avec 100 µl de culture bactérienne et incubés à
28°C / 48 h(Silini-Chérif et al., 2012). Le dosage colorimétrique a été réalisé en utilisant la méthode
de Loper et Scroth (1986), les cultures ont été centrifugées à 3000 rpm / 20 min. Deux ml du
surnageant ont été mélangés avec quatre ml du réactif de Salkowski ; 49 ml d'acide perchlorique
(HClO4)à 70 %, 49 ml d’eau distillé et 02 ml de 0,5 M dechlorure de fer (FeCl 3). La DO a été mesuré
à 530 nm. Les concentrations de l’AIA ont été déterminées en utilisant une courbe d'étalonnage d'une
solution d'AIA obtenue dans un intervalle entre 05et 1000µg / ml.

Préparation de la courbed’étalonnage de l’AIA

Pour préparer une solution mère avec une concentration de 1000 µg/ ml d’AIA, on fait
dissoudre 10 mg d’IAA dans 10 ml d’acétone, car ce dernier n’es pas soluble dans l'eau, mais soluble
dans l'acétone.
On ajoute 09 ml du milieu King B liquide à 01 ml de la solution mère déjà préparé avec la
concentration de 1000 µg / ml, on obtient alors une solution avec une concentration de 100 µg/ml.
On transfère 05 ml de la solution à concentration 100 µg/ml dans un autre flacon qui contiens
05 ml de King B liquide, on obtient donc une solution avec une concentration de 50 µg/ml.
La solution à concentration de 20 µg/ml est obtenue par un mélange de 02 ml de la solution à
concentration 100 µg/ml avec 08 ml de King B liquide.
On mélange 01 ml de la solution à concentration 100 µg/ml avec 09 ml de King B liquide,
pour obtenir une solution avec une concentration de 10 µg/ml.
01 ml de la solution à concentration 50 µg/ml est ajouté à 09 ml de King B liquide, pour
concevoir la solution à concentration de 05 µg/ml d’AIA.

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 02 ml de chaqu'une des solutions préparé est mélangé à 04 ml du réactif de Salkowski, y
compris un contrôle sans AIAavec seulement du King B liquide. On incube le tout à une température
ambiante pendant 25 min. Les différences de couleur à travers le gradient de concentrations
devraient être évidentes en quelques minutes. Finalement, La DO a été mesuré à 530 nm.

Silini-Chérif H., Silini A., Ghoul M., and Yadav S. 2012.Isolation and Characterization of Plant
GrowthPromoting Traits of a Rhizobacteria: Pantoeaaggfomerans lma2. Pakistan Journal of
Biological Sciences. 15(6) : 267-276, 2012.