Protocoles

d’écotoxicologie

CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE
 DOSAGE DE SUBSTANCES DANS L’EAU PAR
CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE

1. BUTS

 Pratiquer une extraction liquide-liquide

 Faire une étude de recouvrement
 Doser des substances à partir d’une matrice réelle (rejets d’aluminerie) en
analyse instrumentale
 Évaluer l'efficacité d'un procédé de biorestauration

2. RÉFÉRENCE

Composés semi-volatils (HAP & Phénols) par Chromatographie gazeuse.

Procédure opérationnelle normalisée, méthode no. 13-011-96, version 1,
mai 1996.

Méthode Phénols et HAP du catalogue de Phénoménex 2003

 Planification du laboratoire

Avant d’entrer au labo :

 Lire l’ensemble des manipulations

 Rechercher le dichlorométhane (toxicité, température d’ébullition,
densité…etc) et en retirer les implications pratiques pour la
manipulation de ce produit.
 Revoir la définition d'étalon interne et d'étalon de recouvrement

À élaborer :

 Organigramme de déroulement du laboratoire et de répartition des tâches

entre les 2 étudiants.
 Organigramme de l’extraction (section 4.4) pour la retraçabilité de la
concentration des HAP dans la matrice initiale. En d'autres mots, identifier les
concentrations d'anthracène dans l'extrait, puis dans chaque étape jusqu'aux
vials.
 Tableaux de la préparation des solutions mères, qualitatives et quantitatives.

 Tableau de la préparation de l’échantillon d’eau.

 Séquence des analyses chromatographiques (qualitatives, quantitatives,

témoins).

 Pour le GC2 : Tableaux préparatoires des résultats comprenant:

o pour courbe d'étalonnage: pesées réelles

o pour les 2 inconnus:
 facteurs de dilution
 valeur en ppm de fluoranthène, d’anthracène, de pyrène telles que données par
chemstation
 valeur corrigée pour facteur de dilution
 valeur moyenne corrigée pour facteur de dilution dans l'extrait
 concentration retracée à l'origine (avant extraction).
3. MATÉRIEL ET PRODUITS

 Pipettes automatiques 1000µl, 100µl, 10µl

 Pipettes de Mohr 10ml, 5ml, 2ml et volumétrique 5ml
 Ballons jaugés 100ml, 10ml
 Vials et septa
 Montage avec ampoule à décantation pour extraction en phase liquide
 Cylindre gadué 25ml, 1000ml
 Béchers variés
 Filtres #41
 Dichlorométhane (Solvant)
 Produits solides :
o Fluoranthène
o Pyrène
o Anthracène
o Sulfate de sodium
 Solutions fournies :
o Solution d’Étalon interne de phénantrène à 1000ppm
o Solution d’Étalon de recouvrement d’anthracène à 2000ppm (solvant :
acétone)
o Solution de Contrôle de Naphtalène à 50ppm
o Échantillon inconnu provenant de la section bioprocédés (déjà extraite tel qu'à la
section 4.4. Volume initial de 500ml).

Note : Se servir de la récupération des solvants halogénés.

4. PARTIE EXPÉRIMENTALE (GC1)

Important : À la session d’hiver, vous travaillez dans les sous répertoires

Biotech dans le logiciel. Logbook = HAP.

Important : Les manipulations suivantes doivent s’effectuer parallèlement à la

préparation des solutions et de l’échantillon :
 Injection de l’échantillon de contrôle (Naphtalène). (Ne pas oublier
de remplir les vials de lavage avec le solvant)
 Remplir le logbook et la carte de contrôle et noter valeurs au
cahier.
 Écriture de la méthode pour les HAP.
 Écriture de la séquence en indiquant la concentration de vos
étalons, les dilutions des échantillons dans le nom. (Ne pas oublier
de placer deux vials de solvant (blanc) et le contrôle dans votre
séquence)
 Imprimer la méthode et la séquence et les faire corriger puis coller
dans le cahier de labo pour la retraçabilité; aussi, noter les
paramètres de la colonne ainsi que la station de travail dans le
cahier.
4.1 PRÉPARATION DES SOLUTIONS MÈRES

 Dans des ballons de 100ml, préparer des solutions de 1000ppm des

produits à doser : Naphtalène, pyrène et anthracène (recouvrement). Le
phénanthrène est déjà fourni à 1000ppm.

4.2 PRÉPARATION DES SOLUTIONS QUALITATIVES

 À partir des 4 solutions mères, dans des ballons de 10ml, préparer des
solutions de 50ppm de chacun des produits.
 Remplir 4 vials.

4.3 PRÉPARATION DES SOLUTIONS POUR L’ÉTALONNAGE (GC2)

 Dans des ballons de 10ml, préparer une série de solutions étalons

contenant :

o 10ppm, 25ppm, 50ppm, 75ppm, 100ppm de Naphtalène, pyrène et

anthracène.

Note : La concentration de l’étalon interne doit être de 100 ppm dans toutes les
solutions à analyser.

4.4 EXTRACTION DES HAP EN PHASE LIQUIDE

 Notez la date d'échantillonnage :______ et le # Puits : ______

 Après avoir brassé vigoureusement, transvider une des 2 bouteilles dans
une ampoule à décantation de 1 litre en verre, notez le volume:_________
(environ 500ml)
 Ajouter 5ml de la solution d’étalon de recouvrement de 2000ppm (fourni)
 Ajouter environ 25ml de dichlorométhane et agiter vigoureusement
pendant 2 minutes.
 Laisser les 2 phases se séparer.
 Passer la phase organique à travers un papier filtre #41 contenant 10g de
sulfate de sodium anhydre (quelques grammes - masse sera spécifiée au
labo), à l’aide d’un entonnoir de verre placé sur un ballon jaugé de 100ml.
 Bien égoutter
 Reprendre l’extraction 2 fois avec environ 25ml de dichlorométhane.
 Combiner ces deux extraits avec le premier dans le ballon jaugé de 100
ml.
 Rincer le filtre et le sulfate de sodium avec un peu de dichlorométhane.
 Compléter au trait de jauge.
 Effectuer trois dilutions d’au plus 1/10 (ex: 2/10, 4/10 ou 8/10) dans des
ballons de 10ml.
5. TRAITEMENT DES DONNÉES (GC3)

Note : Vous devrez ajuster les échelles du chromatogramme pour votre analyse
dans la section « Signal Options ». Par exemple, le time range doit être >
5min pour annuler le signal du dichlorométhane
Note :Vous devrez ajuster l’intégration des pics dans le chromatogramme dans
la section « Integration Events » et si nécessaire, effectuer des
intégrations manuelles.
Note :Vous devrez peut-être changer la fenêtre de recherche du temps de
rétention dans la section : « Calibration »/ »Calibration settings ». En effet,
la fenêtre d'intégration est à 5% par défaut - mettre à 1%.

 Effectuer l’analyse qualitative puis l’analyse quantitative.

 Imprimer vos tableaux et droites d’étalonnage et les coller dans le cahier
de labo.
 Sortir le chromatogramme du contrôle dans votre méthode et calculer
l’erreur relative de votre droite.
 Sortir chacun des chromatogrammes de vos échantillons en complétant
votre tableau. Faire attention aux surfaces de l’étalon interne (doivent être
constantes) et au fait que l’on ne calcule pas en dehors de l’étalonnage.
 Compléter le logbook inconnus.

Note : Le volume d’eau que vous avez mesuré servira à calculer la concentration
des HAP dans votre échantillon.

Retracer aux concentrations d'origine tout en corrigeant pour le recouvrement.

Comparer ces résultats aux normes du gouvernement du Québec (eaux
intérieures) et non du gouvernement fédéral (fleuve, grands lacs, océans). Les
normes considérées devront être en lien avec la mise en situation. Le site
suivant pourrait vous aider:

http://www.mddelcc.gouv.qc.ca/EAU/criteres_eau/index.asp

Vérifier si la technique de décontamination mise à l'essai par votre firme sur ces
polluants permet de réduire la charge toxique de l'effluent jusqu'à atteindre un
niveau acceptable.

Nous vous demandons ici de faire preuve de

discernement et de n’imprimer que ce qui est
nécessaire!!!