TP03 : COLIFORMES

B2 : BENDRIHEM AYMENE SALAH & ATIME LOQMAN

ENPC
Objectif
Evaluer la présence des coliformes totaux dans un échantillon d’eau

Définition
Les bactéries coliformes existent dans les matières fécales mais peuvent également se
développer dans certains milieux naturels (sol , végétation) Ce sont des bacilles à gram négatif non
sporogène facultativement anaérobie capable de croitre en présence d’agents de surface ayant des
activités inhibitrices de croissance et capable fermenter le lactose avec production d’acide et de gaz
en 48h à des températures de 35 à 37° C.

Principe
-Ensemencement d’un échantillon d’eau homogénéisée dilué et non dilué dans une série de
tube du milieu BCPL
-Incubation des tubes à 37°C ± 1°C DURANT 48h
-Lecture

Appareillage et verrerie
Etuve ou enceinte thermostatée à 37°C

Pipettes

Milieu de culture
Milieu BCPL

Mode opératoire :
Agiter vigoureusement l’échantillon afin d’obtenir une répartition homogène des micro-organisme .

Procéder à une dilution en cascade

Ensemencement
Transformer à l’aide d’une pipette stérile dans les tubes du milieu BCPL les prises d’essai de 1ml
d’échantillons dilués.

Mélanger l’inoculum et le milieu de façon à obtenir une répartition homogène des microorganismes

Incubation
Incuber dans l’étuve à 37°C pendant 48h

Lecture
L’apparition d’un trouble du a une croissance bactérienne avec un changement de couleur et un
dégagement gazeux dans la cloche de Durham
Répondre aux questions
1-le virage de couleur vers le jaune indique que le ph de milieux descend (prendre une
valeur 7) à cause de transformation du lactose vers l’acide acétique grâce à les bactéries
coliformes qui font fermenter le lactose donc le changement de couleur vers le jaune détecte
la présence des coliformes.
2-la réaction chimique :
C2H6O6+2ADP+2PI 2C3H6O3+2ATP

3-le rôle de la cloche de Duhem :

la cloche de Duhem permet le recueil des gaz libérer de la fermentation à condition que le
milieu ait été agité correctement pour que les bactéries soient bien repartie.