République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

Université d’Alger Centre

Faculté de Médecine d’ALGER

Département de PHARMACIE

Validation d’une méthode analytique du

test de dissolution par UPLC du
médicament EXVAL ®
Mémoire de fin d’études

PRESENTE EN VUE DE L’OBTENTION DU DIPLOME DE DOCTEUR EN

PHARMACIE
Session : 2019/2020

Présenté par : Le : 17/10/2020

Bendiaf Bilel
Tiguemounine Sofia

Encadré(s) par : Co-encadré (s) par :

Dr B.Alouache Dr A.Reffai
Maitre-assistant en chimie analytique Assistant en chimie analytique

Devant le Jury :

Pr : CHERIF Redouane (Président)

Dr : SELLAM Yacine (membre) Dr : CHIHAB Walid (membre)
 République Algérienne Démocratique et Populaire
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique
Université d’Alger Centre

Faculté de Médecine d’ALGER

Département de PHARMACIE

Validation d’une méthode analytique du

test de dissolution par UPLC du
médicament EXVAL®
Mémoire de fin d’études

PRESENTE EN VUE DE L’OBTENTION DU DIPLOME DE DOCTEUR EN

PHARMACIE
Session : 2019/2020

Présenté par : Le : 17/10/2020

Bendiaf Bilel
Tiguemounine Sofia

Encadré(s) par : Co-encadré (s) par :

Dr B.Alouache Dr A.Reffai
Maitre-assistant en chimie analytique Assistant en chimie analytique

Devant le Jury :

Pr : CHERIF Redouane (Président)

Dr : SELLAM Yacine (membre) Dr : CHIHAB Walid (membre)

A
 Remerciements

Nous rendons grâce à ALLAH, de nous avoir donné santé, courage, patience et
persévérance durant tout notre cursus.
Nos chaleureux remerciements vont à Monsieur le Docteur ALOUACHE
BACHIR, de nous avoir fait honneur d’accepter de diriger cette thèse, et au
co–promoteur Docteur REFFAI MOHAMED AMINE ATHMANE, pour son
aide, son soutien et sa patience.
Notre gratitude va également à l’ensemble de l’équipe du laboratoire de contrôle
qualité de l’industrie pharmaceutique EL-KENDI, exceptionnellement
Monsieur HAZI FAYCEL manager du laboratoire et Monsieur YAHIAOUI
IDRISS chef de section de validation et co-promoteur sur le terrain, pour leur
amabilité de nous avoir accueillis au sein du laboratoire.
Aussi Monsieur CHEMLOUL MOHAMED EL-AMINE superviseur de
l’unité de validation, pour son temps, sa gentillesse, son expérience bénéfique et
ses explications détaillées.
Enfin, toute notre reconnaissance pour chaque personne qui a contribué de près
ou de loin dans ce travail.

B
 Dédicaces
A mes chers parents, source de toutes mes réussites.
A mes deux sœurs.
A l’âme de ma grand-mère et de mon grand-père qui nous ont quittés cette année ;
qu’ils reposent en paix.
A toute ma famille.
A tous mes enseignants en particulier monsieur Ould Rabah et madame Khadidji.
A tous mes amis.
A tous mes collègues.

BENDIAF BILEL

C
 Dédicaces
Je dédie ce travail à mes deux chers parents, à qui les remerciements et les
éloges du monde ne seront jamais suffisants face à ce qu’ils ont fait pour moi
depuis toute petite, exceptionnellement ma mère qui m’a tant encouragée et
soutenue pour devenir ce que je suis aujourd’hui, la femme intellectuelle, forte
et ambitieuse.

Je le dédie aussi à mon oncle AIT HAMMOU FAREDJ qui est comme un
deuxième père pour moi, son épouse, ainsi qu’à ses enfants : AMER,
BOUSSAD, MAMICHE, DJIDA, LYDIA, GHENIMA qui sont comme mes
frères et sœurs que je n’ai jamais eu.

Sans oublier mes deux petits bouts de choux YANIS et NAYA qui ont égayé ma
vie ; vous êtes les meilleurs neveux du monde !

Très grande dédicace à la mémoire de mes deux grandes mères : AIT

HAMMOU GHENIMA et BEN BACHA NOUARA, qu’elles reposent en paix.

Pour finir, une dédicace très spéciale à tous mes amis sans exception. Vous
étiez, vous êtes et vous serez toujours ma source de sérotonine, je vous aime
tant les meilleurs.

TIGUEMOUNINE SOFIA

D
 Table des matières

Table des matières .........................................................................................................................E

Liste des tableaux ......................................................................................................................... H
Liste des figures ..............................................................................................................................I
Liste des abréviations ................................................................................................................... J
Introduction générale ................................................................................................................... 1
Partie théorique
Chapitre I : Industrie pharmaceutique et médicament...................................................................... 2
I. Industrie pharmaceutique ........................................................................................................ 2
I.1. Organisation..................................................................................................................... 2
I.1.1. Département administratif.......................................................................................... 3
I.1.2. Département d’assurance qualité ................................................................................ 3
I.1.3. Laboratoire de contrôle qualité ................................................................................... 3
I.1.4. Département de pharmacie ......................................................................................... 3
I.1.5. Département commercial ........................................................................................... 4
I.2. Référentiels et normes en industrie pharmaceutique .......................................................... 5
I.2.1. Référentiels réglementaires ........................................................................................ 5
I.2.2. Référentiels normatifs ................................................................................................ 7
I.2.3. CTD et le dossier d'AMM ......................................................................................... 7
I.3. Qualité au sein de l'industrie pharmaceutique .................................................................... 8
I.3.1. Qualité et Assurance Qualité ...................................................................................... 8
I.3.2. Contrôle qualité ......................................................................................................... 9
II. Médicament ........................................................................................................................... 9
III. EXVAL® ........................................................................................................................... 11
III.1. Mécanisme d’action ................................................................................................... 11
III.2. Pharmacocinétique....................................................................................................... 12
III.3. Pharmacodynamie........................................................................................................ 13
III.4.Effets indésirables ....................................................................................................... 13
III.5. Contre-indications ....................................................................................................... 13
III.6. Interactions médicamenteuses .................................................................................... 14
Chapitre 2 : Méthodes de dosage des tests de dissolution .............................................................. 15
I. Test de dissolution ................................................................................................................ 15
I.1. Définition ....................................................................................................................... 15
I.2. Appareillage ................................................................................................................... 15
I.3. Intérêt............................................................................................................................. 17

E
 II. Méthodes analytiques de dosage......................................................................................... 18
II.1. Définition d’une méthode analytique ............................................................................ 18
II.2. Cycle de vie d’une méthode analytique.......................................................................... 18
II.2.1. L’établissement d’un cahier des charges ................................................................. 19
II.2.2. Développement de la méthode ................................................................................ 19
II.2.3. Validation proprement dite ..................................................................................... 19
II.2.4. L’utilisation en routine ........................................................................................... 19
II.2.5. Les transferts .......................................................................................................... 20
II.2.6. Revalidation / complément de validation ................................................................ 20
II.3. Méthode de dosage par UPLC ...................................................................................... 20
II.3.1. Principe de la chromatographie ............................................................................... 21
II.3.2. Chromatographie liquide haute performance (HPLC).............................................. 21
II.3.3 Chromatographie liquide à ultra-haute pression (UHPLC) ....................................... 25
II.3.4. Comparaison entre HPLC et UPLC......................................................................... 26
Chapitre III : Validation d’une méthode analytique du test de dissolution par UPLC ..................... 27
I. Définition de la validation analytique selon le contexte réglementaire .................................... 27
II. Différents types de procédures analytiques à valider............................................................. 28
III. Critères de validation .......................................................................................................... 29
IV. Critères de validation : test de dissolution .......................................................................... 30
IV.1. Spécificité ................................................................................................................... 30
IV.2. Linéarité ...................................................................................................................... 30
IV.3. Exactitude (Justesse) .................................................................................................... 30
IV.4. Précision...................................................................................................................... 30
IV.5. Intervalle de mesure (Ecart d’utilisation)...................................................................... 31
IV.6. Robustesse................................................................................................................... 31
Partie expérimentale
Introduction ................................................................................................................................. 32
Chapitre I : Matériels et méthodes ................................................................................................ 33
I. Matériels et appareillage........................................................................................................ 33
I.1. Produits et réactifs utilisés .............................................................................................. 33
II.2. Instruments et équipements ........................................................................................... 34
II. Conditions chromatographiques ........................................................................................... 37
III. Méthodologie ..................................................................................................................... 38
III.1. Préparation des solutions.............................................................................................. 38
III.1.1. Phase mobile (Solution A) ..................................................................................... 38
III.1.2 Matrice ou diluant (Solution B) .............................................................................. 38
III.1.3. Solution mère concentrée d’AMLODIPINE (Solution C) ...................................... 39
F
 III.1.4. Solution mère concentrée du VALSARTAN (Solution D) ..................................... 39
III.1.5. Standard [AMLODIPINE + VALSARTAN] (Solution E)...................................... 39
III.1.6. Placebo (Solution F) .............................................................................................. 39
III.2. Protocole de validation de la méthode d’analyse de dissolution par UPLC pour le
médicament EXVAL® ......................................................................................................... 39
III.2.1. Spécificité ............................................................................................................. 39
III.2.2. Linéarité................................................................................................................ 40
III .2.3. Exactitude ............................................................................................................ 41
III .2.4. Précision .............................................................................................................. 42
III .2.5. Etude de la stabilité .............................................................................................. 43
Chapitre II : Résultats et discussion .............................................................................................. 44
I. Spécificité ............................................................................................................................. 44
II. Linéarité .............................................................................................................................. 47
II.1 Linéarité d’AMLODIPINE............................................................................................. 48
II.2 Linéarité du VALSARTAN............................................................................................ 50
III. Exactitude .......................................................................................................................... 52
III.1. Exactitude de l’AMLODIPINE .................................................................................... 52
III.2. Exactitude du VALSARTAN ....................................................................................... 53
IV. Précision ............................................................................................................................ 54
IV.1. Répétabilité ................................................................................................................. 54
IV.1.1. Répétabilité de la mesure (injection)...................................................................... 54
IV.1.2. Répétabilité de l’analyse (intra-précision).............................................................. 55
IV.2. Précision intermédiaire ................................................................................................ 56
V. Ecart d’utilisation ................................................................................................................ 57
VI. Etude de la stabilité ............................................................................................................ 58
Conclusion .................................................................................................................................... 60
Bibliographie ................................................................................................................................ 61
Annexes ............................................................................................................................................I

G
 Liste des tableaux

Tableau I : Système LC à haute pression..................................................................................... 25

Tableau II : Comparaison entre HPLC et UPLC......................................................................... 26
Tableau III : Méthodes analytiques et différents critères ........................................................... 29
Tableau IV : Conditions chromatographiques ............................................................................. 37
Tableau V : Préparation des solutions pour le paramètre « spécificité » ................................... 40
Tableau VI : Préparation des solutions pour le paramètre « linéarité » ..................................... 41
Tableau VII : Préparation des solutions pour le paramètre « exactitude » ............................... 42
Tableau VIII : Les valeurs du test de linéarité de l’AMLODIPINE .......................................... 48
Tableau IX : Données pour le tracé de la courbe de linéarité d’AMLODIPINE ...................... 49
Tableau X : Les valeurs du test de linéarité du VALSARTAN ................................................. 50
Tableau XI : Données pour le tracé de la courbe de linéarité du VALSARTAN ..................... 51
Tableau XII : Résultats d’exactitude de l’AMLODIPINE ......................................................... 52
Tableau XIII : Résultats d’exactitude du VALSARTAN ........................................................... 53
Tableau XIV : Résultats de la répétabilité de la mesure pour l’AMLODIPINE ....................... 54
Tableau XV : Résultats de la répétabilité de la mesure pour le VALSARTAN ....................... 55
Tableau XVI : Résultats de la répétabilité de l’analyse d’AMLODIPINE ............................... 55
Tableau XVII : Résultats de la répétabilité de l’analyse du VALSARTAN ............................. 56
Tableau XVIII : Résultats de la précision intermédiaire de l’AMLODIPINE .......................... 56
Tableau XIX : Résultats de la précision intermédiaire du VALSARTAN ................................ 57
Tableau XX : Résultats de la stabilité des échantillons d’EXVAL® (AMLODIPINE) après
24h dans l’auto injecteur ............................................................................................................... 58
Tableau XXI : Résultats de la stabilité des échantillons d’EXVAL® (AMLODIPINE) après
24h dans le réfrigérateur ............................................................................................................... 58
Tableau XXII : Résultats de la stabilité des échantillons d’EXVAL® (VALSARTAN) après
24h dans l’auto injecteur ............................................................................................................... 59
Tableau XXIII : Résultats de la stabilité des échantillons d’EXVAL® (VALSARTAN) après
24h dans le réfrigérateur .............................................................................................................. 59

H
 Liste des figures

Figure 1 : Organigramme de l’industrie pharmaceutique ............................................................. 2

Figure 2 : Mécanisme d’action AMLODIPINE/VALSARTAN................................................ 12
Figure 3 : Appareil de dissolution à palette ................................................................................. 17
Figure 4 : Cycle de vie des méthodes analytiques ...................................................................... 19
Figure 5 : Types de chromatographie liquide .............................................................................. 21
Figure 6 : Conception générale d'un chromatographe liquide haute performance.................... 22
Figure 7 : Vanne d'injection à six voies avec boucle d'échantillonnage .................................... 23
Figure 8 : Types de colonnes pour HPLC ................................................................................... 23
Figure 9 : Rôle des modules constituant une chaine HPLC ....................................................... 24
Figure 10 : Appareillage UPLC.................................................................................................... 26
Figure 11 : Réactifs utilisés .......................................................................................................... 33
Figure 12 : Les caractéristiques d’EXVAL® .............................................................................. 34
Figure 13 : Fioles jaugées et béchers ........................................................................................... 34
Figure 14 : Pipettes jaugées et pro pipette ................................................................................... 35
Figure 15 : ACQUITY UPLC H-Class ........................................................................................ 35
Figure 16 : Appareil de dissolution .............................................................................................. 36
Figure 17 : Balances analytiques .................................................................................................. 36
Figure 18 : pH mètre de paillasse ................................................................................................. 36
Figure 19 : Bain ultrason (sonicateur) ......................................................................................... 37
Figure 20 : Chromatogramme d’AMLODIPINE (100%) .......................................................... 44
Figure 21 : Chromatogramme du VALSARTAN(100%) .......................................................... 44
Figure 22 : Chromatogramme du diluent..................................................................................... 45
Figure 23 : Chromatogramme du placebo ................................................................................... 45
Figure 24 : Chromatogramme de la phase mobile ...................................................................... 46
Figure 25 : Chromatogramme d’AMLODIPINE et VALSARTAN .......................................... 46
Figure 26 : Chromatogramme d’AMLODIPINE + VALSARTAN + placebo + diluent ......... 47
Figure 27 : Représentation graphique de la linéarité de l’AMLODIPINE ................................ 49
Figure 28 : Représentation graphique de la linéarité du VALSARTAN ................................... 51

I
 Liste des abréviations

AMM : Autorisation de Mise sur le Marché

ANVISA : Agência Nacional de Vigilância Sanitária

ATD : Antidépresseurs

AUC : Aire Sous la Courbe

BPF : Bonnes Pratiques de Fabrication

BPL : Bonnes Pratiques de Laboratoire

Cov : Covariance

CTD : Document Technique Commun

CV : Coefficient de Variation

DCI : Dénomination Commune Internationale

DRH : Directeur des Ressources Humaines

FDA: Food and Drug Administration

GC: Gas Chromatography

HPLC: High Performance Liquid Chromatography

ICH: International Council of Harmonization

ISO: International Organization for Standardization

JP : Japanese Pharmacopeia

LC : Liquid Chromatography

PA : Pression Artérielle

R&D : Recherches et Développement

UPLC : Ultra Performance Liquid Chromatography

USP : United States Pharmacopeia

UV : Ultra Violet

J
Introduction générale
Le médicament n’est pas un produit comme les autres, il s’agit d’un produit de consommation
humaine et animale qui doit répondre à des exigences particulières, c’est pourquoi un
médicament ne peut être enregistré qu’après la fourniture d’une preuve documentée de sa
qualité, de son efficacité et de sa sécurité.

Pour répondre à ces exigences de qualité, d’efficacité et de sécurité, chaque industrie

pharmaceutique doit établir un bon système d’assurance qualité qui doit s’assurer que toutes
les opérations effectuées dans l’entreprise pharmaceutique, que ça soit au niveau du
département de production ou au niveau du laboratoire de contrôle qualité sont conformes.
Cependant, toutes les méthodes d’analyse réalisées au niveau du laboratoire de contrôle
qualité doivent être validées en se référant à des directives comme celles de l’ICH
(conférence internationale d’harmonisation), afin de s’assurer que les résultats obtenus sont
fiables et exacts, et donc la libération des lots peut se faire en toute sécurité.

Notre mémoire de fin d’étude a été réalisé au niveau du laboratoire de contrôle qualité d’El-
KENDI industrie des médicaments, c’est une industrie agréée par le ministère de la santé en
Algérie pour la conception de génériques innovants et la transposition à l’échelle industrielle.

L’objectif de notre travail est de valider une méthode analytique qui s’intéresse au test de
dissolution du médicament EXVAL® par UPLC, ce qui va régler les problèmes de rentabilité
observés avec l’ancienne méthode analytique qui se faisait par HPLC (consommation d’une
grande quantité de réactif, temps d’analyse important).

Notre travail sera organisé en deux parties :

 La première partie (partie théorique) sera consacrée à la présentation de quelques

éléments bibliographiques sur les médicaments et l’industrie pharmaceutique, les
méthodes de dosages des tests de dissolution, la validation des méthodes analytiques,
la chromatographie liquide à ultra performance (UPLC), et un aperçu sur les deux
principes actifs constituant notre médicament, à savoir l’AMLODIPINE et le
VALSARTAN.
 La seconde partie (partie pratique) sera consacrée à la présentation du matériel et
méthodes utilisés dans notre étude, ainsi que la discussion des résultats obtenus.

1
Partie théorique
 Chapitre I : Industrie pharmaceutique et médicament

I. Industrie pharmaceutique

L’industrie pharmaceutique est le secteur économique qui regroupe les activités de

recherches, de fabrication et de commercialisation des médicaments pour la médecine
humaine ou vétérinaire. (1)

I.1. Organisation

L’organisation de l’industrie pharmaceutique définit la façon dont est découpé et coordonné le

travail et le mode de fonctionnement.

L’industrie pharmaceutique est organisé en différents départements qui sont : le département

administratif comprenant les ressources humaines et les finances, assurance qualité,
laboratoire de contrôle qualité, département de pharmacie englobant les affaires
réglementaires, la production et activités R&D, ainsi que le département commercial
constitué de services du marketing pharmaceutique et la délégation.

Figure 1 : Organigramme de l’industrie pharmaceutique

2
I.1.1. Département administratif

Le département administratif comprend : les ressources humaines et les finances :

Les ressources humaines se divisent en deux activités principales : La gestion

des ressources humaines dans une entreprise qui couvre la paie, les aspects juridiques, les
contrats de travail…, et le développement des ressources humaines en entreprise qui
comprend la gestion des carrières, la gestion des compétences et
des performances, le management des ressources humaines, le recrutement, la formation …,
et qui est le plus souvent partagée entre le directeur des ressources humaines (DRH) et des
collaborateurs responsables de tâches ressources humaines spécifiques. (2)
Les finances en entreprise chapote l’ensemble des activités de l’entreprise comme :
-Distinguer les équilibres indispensables à la pérennité de l’entreprise.
-Assurer et maintenir la rentabilité de l’entreprise.
-Garantir la solvabilité de l’entreprise.
-Arbitrer les choix nécessaires pour l’objectif de l’entreprise er gérer les risques.

I.1.2. Département d’assurance qualité

Le/la chargé(e) assurance qualité définit et coordonne la mise en œuvre de la politique

d’assurance qualité (méthodes organisationnelles/processus/audits) relative aux activités
d’exploitation de médicaments. (3)

I.1.3. Laboratoire de contrôle qualité

Durant toutes les étapes qui mènent au conditionnement, le médicament suit un processus
extrêmement réglementé où le contrôle qualité et le respect des bonnes pratiques de
fabrication sont essentiels.
Le département de contrôle qualité est constitué de cinq unités : contrôle des matières
premières, produits fini, analyses microbiologique, stabilité et l’unité de validation.

I.1.4. Département de pharmacie

Le département de pharmacie englobe : les affaires réglementaires, la production, et les

activités de recherches et développement.

3
Les affaires réglementaires couvrent plusieurs activités (l’enregistrement, le contrôle des
documents promotionnels, le rappel de lots…) aussi bien pour les médicaments que les
dispositifs médicaux. Le chargé des affaires réglementaires participe à la mise en application
de la stratégie réglementaire et réalise différentes activités liées à l’enregistrement et au
maintien des homologations et des autorisations de mise sur le marché, sur toute la durée de
vie des produits.
-Pour prendre la pleine mesure du poste, le chargé des affaires réglementaires doit maitriser
les processus réglementaires et les réglementations internationales, maitriser l’anglais pour
assurer la rédaction des dossiers à l’international et exercer un travail de veille juridique pour
être à la pointe des réglementations et législations en vigueur. (4)
La production pharmaceutique regroupe l’ensemble des opérations de transformation des
matières premières en produits finis (médicaments). Elle répond à des normes de qualité
nationales, européennes et internationales très strictes (les Bonnes Pratiques de Fabrication)
garantissant le respect de l’hygiène, de l’environnement et de la sécurité dans le but d’assurer
aux patients un standard de qualité très élevé. (3)
Recherches et développement ou R&D réuni deux démarches différentes : La recherche
qui comprend tout ce qui conduit au choix d’une substance susceptible de devenir un
médicament, et se divise en deux étapes ; La recherche fondamentale et la recherche
appliquée, ainsi que le développement qui étudie les effets du produit sur l’organisme,
apprécie son efficacité pour anticiper le devenir du médicament et détecter ses effets toxiques
afin d’évaluer les risques potentiels pour l’homme.

I.1.5. Département commercial

Le département commercial inclus toutes les activités de la commercialisation du médicament, il

comprend le marketing pharmaceutique et la délégation.

Le marketing pharmaceutique désigne l'application des techniques marketings à la

promotion et à la commercialisation des médicaments et autres produits associés. C’est un
marketing très particulier dans la mesure où les pratiques commerciales et les prix sont
réglementés et par le fait qu'il s'agit d'un marché de prescriptions.
La Délégation est constituée de visiteurs médicaux et visiteurs commerciaux.

4
I.2. Référentiels et normes en industrie pharmaceutique

Afin d'éviter les problèmes de qualité et d'innocuité des médicaments pouvant engendrer des
drames au niveau de la santé publique, les industries pharmaceutiques se doivent de répondre
à une réglementation particulièrement drastique et des normes internationales qui ont été
établies dans le but d'harmoniser et de standardiser les pratiques à travers le monde.

I.2.1. Référentiels réglementaires

L’industrie pharmaceutique doit tenir compte des référentiels réglementaires et veiller au

respect de ces derniers au sein des laboratoires pharmaceutiques.
Plusieurs référentiels réglementaires existent tel que : BPF, BPL, ICH et les différentes
pharmacopées …etc.

I.2.1.1. Bonnes Pratiques de Fabrication

L’OMS définit les bonnes pratiques de fabrication comme suit : « Un des éléments de
l’assurance de la qualité ; elles garantissent que les produits sont fabriqués et contrôlés de
façon uniforme et selon des normes de qualité adaptées à leur utilisation et spécifiées dans
l’autorisation de mise sur le marché ». Les BPF portent sur tous les aspects du processus de
fabrication : un processus de fabrication déterminé, des étapes de fabrication critiques
validées, des locaux, un stockage et un transport convenables, un personnel de production et
de contrôle de la qualité qualifié et entraîné, des installations de laboratoire suffisantes, des
instructions et des modes opératoires écrits approuvés, des dossiers montrant toutes les étapes
des méthodes précises qui ont été appliquées, la traçabilité complète d’un produit grâce aux
dossiers de traitement et de distribution des lots, des systèmes d’enregistrement et d’examen
des plaintes.
Le principe directeur des BPF est que la qualité doit être un élément intrinsèque du produit et
non une simple caractéristique révélée par des tests. Il en résulte que le produit doit non
seulement répondre aux spécifications finales, mais également être fabriqué dans les mêmes
conditions et en suivant les mêmes procédures à chaque fois. Il y a de nombreux moyens de
contrôler ce point, la validation dans le cadre des BPF consiste à s’assurer que les
établissements, leurs systèmes, leur matériel, les procédés et les méthodes d’essai sont bien
contrôlés pour pouvoir fabriquer uniformément des produits de qualité. (5)

5
I.2.1.2. Bonnes Pratiques de Laboratoire

Les principes des bonnes pratiques de laboratoire constituent un système de garantie de la

qualité du mode d’organisation et de fonctionnement des laboratoires (dénommés
"installations d’essai") qui réalisent des essais de sécurité non cliniques sur les produits
chimiques. La finalité des BPL est d'assurer la qualité, la reproductibilité et l’intégrité des
données générées à des fins réglementaires. (6)

I.2.1.3. Pharmacopées

Une pharmacopée est un recueil à caractère officiel et réglementaire destiné à être utilisé par
les professionnels de la santé dans un pays (United States Pharmacopeia - USP, Japanese
Pharmacopeia - JP) ou dans un groupe de pays (European Pharmacopoeia - Eur. Ph.) pour la
fabrication des médicaments.
Les pharmacopées définissent :
 Les critères de pureté des matières premières entrant dans la fabrication des médicaments
(à usage humain et vétérinaire) et/ou des produits finis.
 Les méthodes d'analyse à utiliser pour en assurer le contrôle.
Les pharmacopées sont constituées de différentes monographies. Chaque monographie est un
ensemble de spécifications qui définissent les caractéristiques qualitatives et quantitatives
d'une substance en vue d'assurer une qualité optimale compatible avec les exigences de santé
publique. Les normes de ces référentiels scientifiques, régulièrement mises à jour, font
autorité pour toute substance ou monographie y figurant. (7)

I.2.1.4. La conférence internationale sur l’harmonisation

La conférence internationale sur l'harmonisation des exigences techniques pour

l'enregistrement des produits pharmaceutiques à usage humain. ICH réunit les autorités de
réglementation et l'industrie pharmaceutique en Europe, au Japon et aux USA. Depuis sa
création en 1990, la mission de l'ICH est de parvenir à une plus grande harmonisation pour
s'assurer que des médicaments sûrs, efficaces et de haute qualité sont développés et
enregistrés de la manière la plus efficiente.
Les grands principes de l’ICH ont été définis par son comité directeur :

6
 Mettre en place un forum pour un dialogue constructif entre les Agences du médicament et
l’industrie pharmaceutique sur les différences réelles et perçues quant aux exigences
techniques pour l’enregistrement des médicaments dans l’UE, les Etats-Unis et au Japon.
 Identifier les domaines où des modifications mutuelles des exigences réglementaires, ou
une acceptation mutuelle plus grande des procédures de R&D, entraîneraient une
utilisation plus économique des ressources sans compromettre la sécurité.
 Faire des recommandations sur les moyens pratiques de réaliser une plus grande
harmonisation dans l’interprétation et l’application des directives techniques et des
exigences pour l’enregistrement. (8)

I.2.2. Référentiels normatifs

Les référentiels normatifs ou normes générales sont des textes de référence issus de différents
organismes officiels de normalisation à différents niveaux tel que : ISO et FDA.

I.2.2.1. International Organization of Standardization

L’ISO est le premier producteur de normes internationales d'application volontaire dans le

monde. Ces normes établissent des spécifications de pointe applicables aux produits, aux
services et aux bonnes pratiques, pour accroître l’efficacité de tous les secteurs de l'économie.
Élaborées dans le cadre d'un consensus mondial, elles aident à supprimer les obstacles au
commerce international. (9)

I.2.2.2. FDA

L’administration américaine des denrées alimentaires et des médicaments, elle est chargée de
protéger la santé publique en garantissant la sécurité, l'efficacité des médicaments humains et
vétérinaires, des produits biologiques et des dispositifs médicaux; et en assurant aussi la
sécurité de l'approvisionnement alimentaire, des cosmétiques et des produits émettant des
radiations aux états unis. (10)

I.2.3. CTD et le dossier d'AMM

Le CTD est un document technique qui a été créé dans la perspective d’harmoniser les
dossiers de demande d’AMM au niveau international. (7)

7
Ce dossier va permettre de regrouper les informations sur la qualité, l’efficacité et la sécurité
d’un médicament. Il se divise en 5 modules.
* Module 1 : Informations administratives spécifiques à chaque région où le dossier est
déposé (exemple Japon ; Union Européenne).
* Module 2 : Sommaire et résumé des parties suivantes
* Module 3 : Partie qualité, elle-même subdivisée en trois sections dont deux sont
développées dans la suite de la thèse :
► 3.2.S : informations sur la substance active.
► 3.2.P : Informations sur le produit fini.
* Module 4 : Rapport des études non cliniques.
* Module 5 : Rapport des études cliniques. (11)

AMM constitue un préalable obligatoire à toute possibilité de commercialisation d’une

spécialité pharmaceutique. Elle est également indispensable avant la demande d’inscription au
remboursement par l’assurance maladie. Pour obtenir une AMM, le demandeur doit présenter
un dossier qui apporte des expertises permettant de garantir les trois critères de qualité,
efficacité, sécurité. (6)

I.3. Qualité au sein de l'industrie pharmaceutique

La qualité est l'ensemble des propriétés et des caractéristiques d'un produit ou d'un service qui
lui confèrent l'aptitude à satisfaire des besoins exprimés et implicites. La qualité d'un
médicament est définie dans le dossier d'AMM.

I.3.1. Qualité et Assurance Qualité

L’assurance qualité est définie selon la norme ISO 8402 comme étant « un ensemble
d’activités préétablies et systématiques mises en œuvre dans le cadre du système qualité et
démontrées en tant que besoins pour donner la confiance appropriée en ce qu’une entité
satisfera aux exigences de la qualité ».
Chaque élément de l’assurance de la qualité est indispensable à l’ensemble, toute insuffisance
ponctuelle aboutit à la mise sur le marché d’un produit défectueux dont l’absorption pourrait
avoir des conséquences graves, voir fatales.

8
Les bonnes pratiques de fabrication sont à la base de cet ensemble. Un gouvernement prend
ses propres responsabilités s’il tolère que, sur son territoire, les entreprises nationales ne
respectent pas les BPF.
Les standards de qualité des médicaments ont été fixés peu à peu, au cours des années, par des
experts de l’industrie, des pharmacopées, des autorités de contrôle et de l’université. Ces
standards sont fondés sur l’expérience. Ils ont pour but d’assurer la sécurité d’emploi et de la
qualité des médicaments, dans l’intérêt des malades. (7)

I.3.2. Contrôle qualité

Le contrôle de la qualité est la partie des BPF qui concerne l’échantillonnage, l’établissement
des spécifications et le contrôle ainsi que les procédures d’organisation, de documentation et
de libération qui garantissent que les analyses nécessaires et appropriés ont réellement été
effectuées et que les matières premières ne sont pas libérées en vue de leur utilisation, ni les
produits finis en vue de la vente ou de la distribution avant que leur qualité ait été jugée
satisfaisante. Le contrôle de la qualité ne se limite pas aux examens de laboratoire, mais doit
intervenir dans toutes les décisions concernant la qualité du produit. (12)

II. Médicament

On entend par médicament toute substance ou composition présentée comme possédant des
propriétés curatives ou préventives à l'égard des maladies humaines ou animales, ainsi que
tout produit pouvant être administré à l'homme ou à l'animal, en vue d'établir un diagnostic
médical ou de restaurer, corriger ou modifier leurs fonctions physiologiques. (13)
Le médicament agit par l'intermédiaire d'un ou plusieurs principes actifs, qui par définition
sont des substances d’origine chimique ou naturelle caractérisée par un mécanisme d’action
curatif ou préventif précis dans l’organisme. Cette ou ces substances actives sont associées à
des excipients qui sont des substances d’origine chimique ou naturelle et qui ont pour but de
faciliter l’utilisation du médicament mais n’ont aucun effet curatif ou préventif. (14)La forme
sous laquelle le médicament se présente est appelée « forme pharmaceutique », « forme
médicamenteuse » ou « forme galénique ». Elle est spécialement conçue de façon à ce qu’elle
soit la plus efficace possible, mieux tolérée, plus facile d’emploi et un mode d’administration
plus adapté.

Il existe plusieurs formes galéniques tels que : comprimé, gélule, suppositoire, sirop, collyre,
crème, solution injectable…Etc. (14)
9
Les comprimés sont des préparations solides contenant une unité de prise d’une ou plusieurs
substances actives. Ils sont obtenus en agglomérant par compression un volume constant de
particules ou par un autre procédé de fabrication approprié tel que l’extrusion, le moulage ou
la cryodessiccation (lyophilisation). Les comprimés sont destinés à la voie orale ; certains sont
avalés ou croqués, d’autres sont dissous ou désagrégés dans de l’eau avant administration,
enfin, d’autres comprimés doivent séjourner dans la bouche pour y libérer la substance active.
(15)
Le comprimé subit de différents contrôles étant comme matière première, en cours de
fabrication et aussi comme produit fini.
Les contrôles que subissent les comprimés terminés (produit fini) sont :
Essai d’uniformité ; englobant l’uniformité de masse et l’uniformité de teneur
Temps de désagrégation
Vitesse de dissolution
Friabilité et dureté
Dosages et réaction d’identité
Essai de conservation (15)
La forme galénique est protégée par plusieurs articles de conditionnement qui englobe tout
élément, y compris les articles imprimés, utilisé lors du conditionnement d’un médicament, à
l’exclusion de l’emballage prévu pour le transport ou l’expédition. Les articles de
conditionnement sont dits primaires ou secondaires selon qu’ils sont destinés ou non à être en
contact direct avec la forme médicamenteuse. (16)
L’étude du devenir d’un médicament dans l’organisme ou pharmacocinétique est déterminée
à l’aide de paramètres pharmacologiques, grâce à qui les voies d’administration et les
posologies pour son utilisation future sont adaptées. Les 4 étapes dans la pharmacocinétique
d’un médicament sont : Absorption, distribution métabolisme et l’élimination (17)
La biodisponibilité se définit comme étant la fraction de la dose du médicament administré
qui atteint la circulation générale et la vitesse à laquelle elle l’atteint. (17)
La mesure de l’effet d’un médicament dans l’organisme dépendant de la dose reçue ou
communément appelée pharmacodynamie a pour but l’évaluation de la relation
concentration-effet et la détermination de l’intervalle thérapeutique. (18)
Tout médicament préparé à l’avance, présenté sous un conditionnement particulier et
caractérisé par une dénomination spéciale. (13)
Le princeps est tout médicament découvert ou synthétisé par un laboratoire pharmaceutique,
et est la propriété de celui-ci. Cette propriété est protégée par un brevet qui confère le
monopole d'exploitation pendant une vingtaine d'année. (19)
10
Le générique est tout médicament qui a la même composition qualitative et quantitative en
principe(s) actif(s), la même forme pharmaceutique, et qui est interchangeable avec la
spécialité de référence du fait de sa bioéquivalence démontrée par des études appropriées de
biodisponibilité. (13)

III. EXVAL®

EXVAL® est un générique anti hypertenseur produit par l’industrie pharmaceutique EL-
KENDI, il est constitué de deux principes actifs qui sont l’AMLODIPINE et le
VALSARTAN.
Il se présente sous forme de comprimé pelliculé ovale, de couleur jaune, à bords biseautés,
portant les inscriptions des dosages d’AMLODIPINE /VALSARTAN en relief avec une
barre de cassure.
L’EXVAL® est utilisé dans le traitement de l'hypertension artérielle essentielle, il est indiqué
chez les patients adultes dont la pression artérielle n'est pas suffisamment contrôlée sous
AMLODIPINE ou VALSARTAN en monothérapie.
L’administration d’EXVAL® est par voie orale et la dose recommandée est d'un comprimé
par jour à prendre de préférence avec de l’eau. EXVAL® peut être pris au cours ou en dehors
des repas.

III.1. Mécanisme d’action (20)

AMLODIPINE/VALSARTAN associe deux antihypertenseurs dotés de mécanismes

complémentaires pour contrôler la pression artérielle chez les patients présentant une
hypertension artérielle essentielle : l'AMLODIPINE appartient à la classe des inhibiteurs
calciques, et le VALSARTAN à la classe des antagonistes de l'angiotensine II (Figure 2).
L'association de ces substances a un effet antihypertenseur synergique, diminuant la pression
artérielle de manière plus importante que chacun des composants administré seul.

11
 Figure 2 : Mécanisme d’action AMLODIPINE/VALSARTAN (20)

III.2. Pharmacocinétique (20)

 AMLODIPINE/VALSARTAN
Après administration orale d’AMLODIPINE / VALSARTAN, les concentrations
plasmatiques maximales du VALSARTAN et de l’AMLODIPINE sont atteintes en 3 et 6 à 8
heures respectivement. La vitesse et le taux d'absorption d’AMLODIPINE/VALSARTAN
sont équivalents à la biodisponibilité du VALSARTAN et de l’AMLODIPINE lorsqu'ils sont
administrés sous forme de comprimés séparés.

 AMLODIPINE
 Absorption : après administration orale de doses thérapeutiques d’AMLODIPINE
seule, les concentrations plasmatiques maximales d’AMLODIPINE sont atteintes en 6
à 12 heures.
La biodisponibilité absolue varie de 64 à 80 %.
 Distribution : le volume de distribution est de 21 l/kg.
L’AMLODIPINE circulante est liée à 97,5 % aux protéines plasmatiques.
 Biotransformation : l'AMLODIPINE est à 90 % métabolisée dans le foie en
métabolites inactifs.
 Elimination : l'élimination plasmatique de l'AMLODIPINE est bi-phasique, avec une
demi-vie d'élimination terminale de 30 à 50 heures.

12
 10% de la molécule mère et 60 % des métabolites sont excrétés dans les urines.
 VALSARTAN
 Absorption : après administration orale du VALSARTAN seul, les concentrations
plasmatiques maximales sont atteintes en 2 à 4 heures.
La biodisponibilité absolue moyenne est de 23 %.
 Distribution : le volume de distribution à l'état d'équilibre du VALSARTAN après
administration intraveineuse est d'environ 17 L
La liaison du VALSARTAN aux protéines sériques est de 94 à 97 %; il se lie
principalement à l'albumine.
 Biotransformation : 20% seulement de la dose sont récupérés sous forme de
métabolites.
Un métabolite hydroxy est un métabolite pharmacologiquement inactif.
 Elimination : Le VALSARTAN est principalement éliminé dans les fèces (83 % de la
dose) et dans les urines (13 % de la dose), essentiellement sous forme inchangée.
La demi-vie du VALSARTAN est de 6 heures.

III.3. Pharmacodynamie (20)

L'association d'AMLODIPINE et du VALSARTAN entraîne une réduction dose-dépendante

et additive de la pression artérielle sur tout l'intervalle de doses thérapeutiques.

III.4. Effets indésirables (20)

Parmi les effets indésirables les plus fréquents : une rhinopharyngite, grippe, asthénie et
fatigue, céphalées …etc.

III.5. Contre-indications (20)

 Hypersensibilité aux substances actives, aux dihydropyridines ou à l’un des excipients.

 Altération sévère de la fonction hépatique, cirrhose biliaire ou cholestase.
 L’association avec des médicaments contenant de l’aliskiren chez les patients
diabétiques ou une insuffisant rénaux.
 2ème et 3ème trimestres de grossesse.
 Hypotension sévère.
 Insuffisance cardiaque hémodynamiquement instable après un infarctus aigu du
myocarde.
13
III.6. Interactions médicamenteuses (20)

 Autres antihypertenseurs
Les antihypertenseurs couramment utilisés (par ex., alpha-bloquants, diurétiques) et les autres
médicaments qui peuvent provoquer une hypotension comme effet indésirable (ATD)
augmentent l’effet antihypertenseur de l’association.
 Interactions liées à l'AMLODIPINE
Pamplemousse ou jus de pamplemousse.
 Interactions liées au VALSARTAN
- L'administration concomitante de lithium avec les ARAII dont le VALSARTAN cause une
augmentation de la lithémie jusqu'à atteindre des valeurs toxiques. Par conséquent, une
surveillance stricte de la lithémie est recommandée.
-Une surveillance de la kaliémie est conseillée en cas d’association concomitante d’un
médicament modifiant les taux de potassium avec le VALSARTAN.

14
 Chapitre 2 : Méthodes de dosage des tests de dissolution

Au sein du laboratoire du contrôle qualité, la stratégie du contrôle de la qualité des produits

finis comprend plusieurs tests. Parmi ces tests les essais de dissolution qui sont utilisés tout au
long du processus de mise au point du médicament et constituent une exigence pour toutes les
formes galéniques orales en phase solide dans le cadre des essais de libéra tion et de stabilité
du produit. Ces tests de dissolution sont réalisés selon des méthodes d’analyse bien définies.
(21)

I. Test de dissolution

Il ne suffit pas d’administrer un certain nombre de prises unitaires parfaitement dosées en

principe actif pour avoir l’effet thérapeutique désiré. Le principe actif doit franchir plusieurs
étapes entre le moment de son administration et celui de l’obtention de l’effet, la première
étape est la phase biopharmaceutique qui peut être résumée par la libération à partir de la
forme galénique puis la dissolution du principe actif, il s’agit d’une étape primordiale car elle
précède l’absorption et peut la limiter si elle est insuffisante. Cette phase contrôle la
biodisponibilité et donc l’efficacité du médicament puisque seule la partie dissoute atteint
l’organe cible et est pharmacologiquement active. La détermination de la dissolution in vitro
est donc un facteur important dans le développement et le contrôle des formes
pharmaceutiques. (22)

I.1. Définition

L’essai de dissolution est un test pharmacotechnique destiné à déterminer l’aptitude des

formes galéniques à laisser passer en solution, dans un milieu déterminé, le ou les principes
actifs qu’elles contiennent. Le passage en solution est apprécié par le dosage du principe actif
dans des échantillons prélevés du milieu de dissolution à intervalles de temps différents (22)

I.2. Appareillage

Compte tenu de la diversité des formes pharmaceutiques orales solides et des propriétés
physico-chimiques des principes actifs, il n’est pas possible de concevoir un appareil unique
utilisable pour toutes les formes. Il existe un grand nombre d’appareils décrits dans la
littérature dont certains sont dédiés à une seule et unique forme pharmaceutique.
15
Compte tenu de la nécessité de disposer d’un contrôle qualité fiable et reproductible, les
autorités d’enregistrement ont standardisé quatre appareils pour les pharmacopées
(américaine, européenne et japonaise) pour les essais de dissolution des formes orales
solides :
Appareil 1 : appareil à panier
Appareil 2 : appareil à palettes
Appareil 3 : appareil à piston
Appareil 4 : cellule à flux continue (15)
L’appareil de dissolution à palette est un appareil composé des éléments suivants : un
récipient qui peut être couvert, en verre ou autre matériau transparent inerte; un moteur ; un
agitateur constitué d’une tige servant d’axe moteur et d’une palette. Le récipient est
partiellement immergé dans un bain d’eau thermostaté de taille appropriée ou chauffé par un
dispositif approprié. Le bain d’eau ou le dispositif chauffant permet de maintenir à l’intérieur
du récipient une température de 37 ± 0,5 °C et d’assurer un mouvement fluide et constant du
milieu de dissolution.
La tige est positionnée de telle sorte que son axe ne s’écarte en aucun point de plus de 2 mm
de l’axe vertical du récipient et que sa rotation soit uniforme et sans oscillation significative
susceptible d’affecter les résultats. La pale est insérée sur la tige de façon que leurs axes
coïncident et que la surface inférieure de la pale soit exactement de niveau avec l’extrémité de
la tige. La palette est conforme aux spécifications citée dans la figure 3 (15)

16
 Figure 3 : Appareil de dissolution à palette (15)

I.3. Intérêt (23)- (24)

L’essai de dissolution peut intervenir à plusieurs stades de l’élaboration :

En pré formulation
Plusieurs propriétés fondamentales sont étudiées en pré formulation comme la solubilité, la
constante d’ionisation, le coefficient de partage, la vitesse de dissolution, la stabilité,
l’hygroscopicité et le polymorphisme. Il est important de connaître la vitesse de dissolution
d’un principe actif dans le cas des principes actifs très faiblement solubles pour envisager des
solutions permettant de la modifier.
En développement
Au stade de la formulation galénique, des études comparatives de dissolution de plusieurs
formes permettent d’optimiser la formulation et de s’assurer que la libération du principe actif
est complète à partir de la forme galénique. L’établissement des profils de dissolution est
indispensable comme guide de la formulation des formes orales solides et pour la mise en
évidence du degré de pertinence de l’essai de dissolution.

17
Un grand nombre de paramètres de fabrication peuvent intervenir sur la dissolution d’une
forme pharmaceutique solide par voie orale tels que le procédé de fabrication (compression
directe ou granulation humide), la force de compression, la distribution granulométrique… La
nature, les propriétés physiques et les pourcentages d’excipients peuvent jouer un rôle
important sur la libération du principe actif surtout s’ils ont été sélectionnés pour en modifier
la vitesse.
En contrôle de routine
Il sert à démontrer la reproductibilité du procédé de fabrication et la conformité du produit fini
avec les lots précédents. Après fixation de normes de dissolution strictes, il permet d’assurer
la reproductibilité inter lot. Ce contrôle de qualité prend un intérêt prédictif supplémentaire
lorsque des corrélations in vitro /in vivo ont été établies, c’est-à-dire lorsque les variations de
dissolution ont une répercussion définie sur la biodisponibilité.

II. Méthodes analytiques de dosage

Pour réaliser une épreuve d’identification, une analyse des impuretés, des dosages,…, il est
nécessaire d’utiliser une méthode analytique dont les caractéristiques de performance sont
bien définies. Les méthodes de dosage visent à mesurer un ingrédient dans un échantillon
donné.

II.1. Définition d’une méthode analytique

Une méthode analytique est la manière dont une analyse est réalisée. Chaque étape doit être
décrite en détail. Il faut décrire notamment, mais non exclusivement, la préparation de
l’échantillon, de l’étalon de référence et des réactifs, l’utilisation des appareils, la production
de la courbe d’étalonnage, l’application des formules de calcul. (31)
Il existe deux types de méthodes analytiques, instrumentales (méthodes chromatographiques,
spectrophotométriques,…), et chimique en solution (la titrimétrie,….)

II.2. Cycle de vie d’une méthode analytique (25)-(26)

La vie d’une méthode analytique se présente par l’enchaînement de plusieurs étapes pour aller
de son élaboration à son utilisation en routine, ces étapes suivent un processus évolutif et
peuvent être présentées sous la forme d’un cycle (Figure 4).

18
 Figure 4 : Cycle de vie des méthodes analytiques

II.2.1. L’établissement d’un cahier des charges

Le but de cette étape est de définir le besoin de l’entreprise pour l’utilisation de la méthode de
routine ; il s’agit de la sélection de : la méthode (méthode qualitative / quantitative), l’appareil
utilisé, les analytes, … etc.
Cette étape est très importante car si l’estimation des besoins de l’entreprise est mal effectuée,
il s’ensuivra des pertes de temps et d’argent.

II.2.2. Développement de la méthode

Il s’agit de déterminer les paramètres instrumentaux et les conditions opératoires optimales

pour la méthode.

II.2.3. Validation proprement dite

Elle a pour objectif d’apporter des preuves qu’une procédure est suffisamment fiable pour
apporter des résultats de confiance.

II.2.4. L’utilisation en routine

L’objectif final de la méthode analytique dans le cadre du contrôle qualité afin de pouvoir
libérer les produits du laboratoire

19
II.2.5. Les transferts

Si le laboratoire de validation est différent du laboratoire d’application en routine, un transfert

de la méthode devra avoir lieu. Avant cette étape, la méthode doit obligatoirement avoir fait
l’objet d’une validation. L’objectif est de démontrer que le laboratoire receveur maitrise la
mise en œuvre de la méthode dans son environnement de travail (laboratoire, équipement et
personnel) et que les résultats obtenus dans les 2 laboratoires sont équivalents. Les critères
d’acceptation sont établis dans le protocole de transfert, ces critères tiennent compte de la
validation et de l’utilisation en routine de la méthode. La plupart du temps, le transfert
s’effectue en démontrant l’exactitude des résultats par la comparaison des moyennes obtenues
dans chaque laboratoire ainsi que par la répétabilité.

II.2.6. Revalidation / complément de validation

Les méthodes analytiques sont des méthodes vivantes qui peuvent être amenées à évoluer.
L’impact de ces évolutions sur la validation de la méthode sera évalué : cela peut aller d’un
complément de validation à une revalidation complète.
Il est nécessaire de revalider ou d’apporter des compléments de validation à une méthode en
cas de modification (optimisation) des conditions d’analyse en dehors de l’intervalle autorisé
par la pharmacopée ou en dehors des paramètres validés dans la validation initiale, par
exemple en cas de changement des caractéristiques d’appareil, changement de la matrice…
Ces modifications peuvent avoir lieu en cas :
 D’anomalie détectée lors de l’utilisation
 De demande d’évolution

II.3. Méthode de dosage par UPLC

Parmi les méthodes de dosage employées lors des tests de dissolution, on retrouve la méthode
qui se fait par chromatographie liquide ultra performance (UPLC), qui est une méthode
chromatographique très performante avec une consommation de petites quantités de réactif et
un temps d’analyse très réduit, contrairement à la méthode basée sur la chromatographie
liquide à haute performance (HPLC).

20
II.3.1. Principe de la chromatographie

La chromatographie est une technique de séparation, d’analyse quantitative et qualitative.

Le principe de base repose sur les équilibres de concentration des composés entraînés entre
deux phases non miscibles qui sont ; la phase stationnaire, emprisonnée dans une colonne ou
fixée sur un support et la phase mobile qui se déplace.
L’échantillon doit impérativement être soluble dans la phase mobile (solvant d’élution).
Il existe deux grands types de chromatographie en fonction de la phase mobile utilisée : la
chromatographie en phase gazeuse (GC) et la chromatographie en phase liquide (LC) (Figure
5), qui regroupe la chromatographie sur colonne à pression atmosphérique, ou sous pression
communément nommée HPLC pour High Performance Liquid Chromatography,
chromatographie d’échange d’ions, d’exclusion stérique ou encore la chromatographie sur
couche mince. (27)

Figure 5 : Types de chromatographie liquide

II.3.2. Chromatographie liquide haute performance (HPLC )

La chromatographie liquide haute performance (CLHP) est une technique analytique et/ou
préparatrice d’analytes en mélange, très générale d’emploi.
Cette technique est préconisée dans les différentes Pharmacopées pour les tests
d’identification, d’essais et de dosage.

21
II.3.2.1. Appareillage

Un chromatographe en phase liquide, souvent appelé chaîne HPLC, est constitué de quatre
modules principaux (Figure 6) :
- Un système de pompage
- Un injecteur
- Une colonne
- Un détecteur (spectrophotomètre UV-visible, spectrofluorimètre, réfractomètre différentiel,
détecteur à diffusion de lumière…) (27)

Figure 6 : Conception générale d'un chromatographe liquide haute

performance

II.3.2.2. Fonctionnement

Les appareils modernes sont équipés d’un ou plusieurs réservoirs en verre ou en acier
inoxydable contenant chacun au moins 500 ml de solvant. On y adjoint souvent des dispositifs
qui permettent d’en éliminer les poussières et les gaz dissous (Figure 9).
 Les pompes : constituées de six vannes avec boucle d’échantillonnage, et ont pour rôle de
provoquer dans la colonne un écoulement de la phase mobile compatible avec la séparation
chromatographique (Figure 7).

22
Figure 7 : Vanne d'injection à six voies avec boucle d'échantillonnage (28)

 Les colonnes : sont usuellement en acier inoxydable, la plupart des colonnes ont une
longueur de 10 à 30 cm et un diamètre intérieur de 4 à 10 mm, avec des tailles
particulaires de 5 à 10 µm. Le matériau de remplissage le plus courant employé est de la
silice (Figure 8).

Figure 8 : Types de colonnes pour HPLC

 Les détecteurs :
- Les détecteurs suivent en continu l'apparition des solutés et le signal obtenu est enregistré en
fonction du temps.
Les détecteurs doivent réunir un certain nombre de qualité : donner pour chaque composé
détecté une réponse proportionnelle à sa concentration, être sensible, avoir peu de bruits de
fond et stable dans le temps. (28)
Il existe plusieurs types de détecteurs : UV-vis, fluorescence, indice de réfraction,
spectroscopie de masse.

23
 Figure 9 : Rôle des modules constituant une chaine HPLC

II.3.2.3. Grandeurs utilisées en chromatographie (27)

 Facteur de rétention
Le facteur de capacité k’ permet de s’affranchir des paramètres géométriques de la colonne
pour exprimer le temps de rétention tr d’un analyte de façon relative par rapport à t 0, temps
mort de la colonne.
𝑡𝑟 −𝑡0
𝑘′ = ⇒ tr= t0 (1+k’)
𝑡0

 Sélectivité

La sélectivité Alpha α est une grandeur qui permet de caractériser la distance qui sépare le
sommet de deux pics chromatographiques consécutifs 1 et 2.
𝑡𝑟2 − 𝑡0 𝑘′2
𝛼= =
𝑡𝑟1 − 𝑡0 𝑘′1
 Efficacité

L’efficacité d’une colonne est caractérisée par son nombre de plateaux théoriques N.
Afin de pouvoir comparer les efficacités de séparation de colonnes de longueurs L différentes,
on définit la hauteur équivalente à un plateau théorique H.
𝐿 𝑡 2 𝑡 2
H= avec 𝑁 = 16 ( 𝑟 ) = 5.54 ( 𝑟 )
𝑁 𝜔 𝛿

ω: largeur du pic à la base ; d: largeur du pic à mi-hauteur

24
  Résolution

La résolution Rs mesure la séparation entre deux pics chromatographiques.

Plus Rs est grande, meilleure est la séparation. Si les pics chromatographiques sont gaussiens,
la séparation est pratiquement complète pour Rs = 1
(𝑡𝑟2−𝑡𝑟1)
Rs=2
𝜔2 +𝜔1

II.3.3 Chromatographie liquide à ultra-haute pression (UHPLC)

Les récentes avancées en chromatographie liquide concernent principalement le

développement des méthodes plus rapides et plus résolutives que les techniques actuelles.
Pour parvenir à de tels résultats, il est possible de modifier la taille des particules, la pression,
la température ou plusieurs de ces paramètres en même temps.
L’approche qui s’est développée le plus rapidement ces dernières années dans l’industrie
pharmaceutique est l’utilisation des colonnes remplies de particules poreuses de diamètres
inférieur à 2 µm. Cette approche est connue sous l’acronyme UHPLC qui signifie
chromatographie liquide à ultra-haute pression (ou performance) (29)

Tableau I : Système LC à haute pression (29)

Fabriquant Modèle Limite de pression (Bar)

Agilent 1200 Rapid Resolution LC 600
Flux Rheos Allegro Ultra HPLC 1000
Jasco X-LC 1000
Thermo Accela 1000
Waters Acquity UPLC 1000

II.3.3.1. Principe

L'UPLC repose sur l'emploi de phase stationnaire composée de particules < 2 µm.
La courbe de Van Deemter, régie par une équation à trois composantes, montre que la gamme
de débit utilisable pour une bonne efficacité avec un tel diamètre de particules est bien plus
large que pour des diamètres supérieurs. De ce fait, il est possible d'augmenter le débit, et
donc la vitesse d'analyse, et sans altérer les performances chromatographiques.

25
II.3.3.2. Appareillage

Tout comme le HPLC, la chaine UPLC est

également constituée de quatre modules :
1 : Gestionnaire de solvant quaternaire
2 : Echantillonneur réfrigéré
3 : Gestionnaire de colonne
4 : Détecteur UV-Vis

Figure 10 : Appareillage
UPLC
II.3.4. Comparaison entre HPLC et UPLC

Tableau II : Comparaison entre HPLC et UPLC (29)

Paramètres HPLC UPLC

Longueur de la colonne 5 -30 cm 3 – 5 cm
Diamètre des particules 2 -12 µm <2 µm
Pression 50 -350 bar 550 -1000 bar

-En termes de performances, la diminution de la taille des particules entraîne une

augmentation du nombre de plateaux théoriques et une diminution du temps de rétention, ce
qui améliore la qualité de la séparation tout en réduisant le temps d’analyse. (29)

Avantages de l’UPLC

 L’UPLC donne des résultats plus rapides avec une meilleure résolution.
 La réduction de l’utilité dissolvante.
 La longueur de la colonne est plus petite en UPLC

26
 Chapitre III : Validation d’une méthode analytique du test de dissolution
par UPLC

Les méthodes analytiques validées sont essentielles dans le cadre du contrôle de qualité en
industrie pharmaceutique, car elles permettent de libérer des lots de produits finis sur le
marché en toute sécurité.
Elles contribuent aussi à ce que les médicaments assurent leurs différentes fonctions ; cela en
démontrant que leurs teneurs en principe actif est conforme aux spécifications, et qu’ils ne
représentent pas d’impuretés ou solvants résiduels par exemple.

I. Définition de la validation analytique selon le contexte réglementaire

La validation des méthodes analytiques est définie dans divers textes réglementaires :

 La norme ISO/IEC
« La validation est la confirmation par examen et apports de preuves objectives du fait que
les exigences particulières en vue d’une utilisation prévues déterminée sont remplies. » (30)

 ICH Q2 (R1)
« L’objectif de la validation d’une procédure analytique est de démontrer qu’elle est adaptée
pour son usage. » (31)

 USP : Pharmacopée américaine

« La validation d'une procédure analytique est le processus par lequel il est prouvé, par des
études de laboratoire, que les critères de performance de la procédure répondent aux
exigences des applications analytiques prévues. » (32)

 BPF Bonne pratique de fabrication

« La validation est une opération destinée à démontrer, conformément aux principes des
BPF, qu’une procédure, un procédé, un équipement, une matière, une activité ou un système
conduit effectivement aux résultats escomptés. » (16)

 FDA : Administration américaines des denrées alimentaires et médicaments

« La validation représente pour une société une mesure de la compréhension qu’elle possède
de son propre procédé et à le maintenir sous contrôle » (10)
27
 ANVISA : L'Agence brésilienne de réglementation de la santé
« La validation doit démontrer que la méthode analytique produit des résultats fiables et
appropriés pour son utilisation, de manière documentée et avec des critères objectifs. » (33)

II. Différents types de procédures analytiques à valider (31)

La validation des procédures analytiques est dirigée vers les quatre types de procédures
analytiques les plus courants:
- Tests d'identification;
- Tests quantitatifs pour la teneur en impuretés;
- tests de limites pour le contrôle des impuretés;
- Tests quantitatifs de la substance active ou tout autre composant présent dans des
échantillons de produit médicamenteux ou de médicament.
- Les tests d'identification : Ils visent à garantir l'identité d'un analyte dans un
échantillon. Ceci est normalement réalisé en comparant une propriété de l’échantillon
(par exemple, spectre, comportement chromatographique, réactivité chimique, etc.) à celui
d’une norme de référence.
-L’essai des impuretés peut être un test quantitatif ou un test de limite pour les impuretés
dans un échantillon. L'un ou l'autre test est destiné à refléter avec précision les caractéristiques
de pureté de l'échantillon. Différentes caractéristiques de validation sont obligatoires pour un
test quantitatif que pour un test limite.
- Les procédures de dosage ou test quantitatifs : sont destinées à mesurer l'analyte présent
dans un échantillon. Dans le cadre de ce document, le dosage représente une analyse
quantitative du ou des principaux composants de la substance médicamenteuse.
Les critères de validation qui s'appliquent aux médicaments sont similaires à ceux utilisés lors
du dosage de principe actif ou tout autre composant sélectionné. Les mêmes critères de
validation peuvent également s'appliquer aux tests associés à d'autres procédures analytiques
(par exemple, dissolution).
Les critères de validation à prendre en compte sont énumérées ci-dessous:
-Précision :
-Spécificité
-Limite de détection
-Limite de quantification
-Linéarité
28
-Intervalle de mesure.
Cette liste doit être considéré comme typique pour les procédures analytiques citées mais des
exceptions occasionnelles devrait être traitée au cas par cas.
De plus, la revalidation peut être nécessaire dans les circonstances suivantes:
- Changements dans la synthèse de la substance médicamenteuse.
- Changements dans la composition du produit fini.
- Modifications de la procédure analytique.
Le degré de revalidation requis dépend de la nature des changements. Certaine d'autres
modifications peuvent également nécessiter une validation.

III. Critères de validation (31)

Tableau III : Méthodes analytiques et différents critères (31)

Type de procédures Identification Essai de pureté Dosage

analytique Quantitatif Limite
Critères de validation

Exactitude - + - +
Précision Répétabilité - + - +

Précision - +(1) - +(1)

intermédiaire
Spécificité (2) + + + +
Limite de détection - - (3) + -
Limite de quantification - + - -
Linéarité - + - +
Intervalle de mesure - + - +

+ : signifie que ce paramètre est normalement évalué

- : signifie que ce paramètre n'est pas évalué normalement
(1) : dans les cas où la reproductibilité a été réalisée, la précision intermédiaire n'est pas
nécessaire
(2) : le manque de spécificité d'une procédure analytique pourrait être compensé par d'autres
procédures analytiques
(3) : peut être nécessaire dans certains cas
29
IV. Critères de validation : test de dissolution (31)

Les paramètres de validations tels que définis par l’ICH Q2(R1) sont les suivants :

IV.1. Spécificité

-La spécificité d’une procédure analytique est sa capacité à évaluer sans équivoque l’analyte
en présence d’autres composants de la formule qui devraient être présents et interférer dans la
mesure. C’est le cas notamment des impuretés, des produits de dégradation, ou de la matrice.
Autrement dit, une méthode est dite spécifique si elle mesure uniquement l’analyte avec la
garantie que le signal instrumental ne provient que de lui.
-Cette définition a les implications suivantes :
 Identification : Pour garantir l'identité d'un analyte.
 Tests de pureté : Pour garantir que toutes les procédures analytiques effectuées
permettent une déclaration précise de la teneur en impuretés d'un analyte, c'est-à-dire
test des substances apparentées, métaux lourds, teneur en solvants résiduels …etc.
 Dosage : Pour fournir un résultat exact qui permet une déclaration précise sur le
contenu ou la puissance de l'analyte dans un échantillon.

IV.2. Linéarité

La linéarité est la capacité de la méthode (dans une gamme donnée) à obtenir des résultats
directement proportionnels à la concentration d’analyte dans l’échantillon.

IV.3. Exactitude (Justesse)

-L’exactitude d’une procédure analytique traduit l’étroitesse de l’accord entre la valeur

acceptée (soit comme une valeur vraie conventionnelle soit comme une valeur de référence) et
la valeur obtenue par la méthode.

IV.4. Précision

-La précision représente l’étroitesse d’accord sur une série de mesures obtenues sur plusieurs
échantillonnages du même échantillon.

30
-La précision doit être étudiée à l'aide d'échantillons homogènes et authentiques. Toutefois,
s’il n'est pas possible d'obtenir un échantillon homogène, elle peut être étudiée en utilisant des
échantillons préparés artificiellement ou une solution d'échantillon.
-La précision d'une procédure analytique s'exprime généralement par la variance, écart type
ou coefficient de variation d'une série de mesures.
-La précision doit être considérée sur trois niveaux qui sont : La répétabilité, la précision
intermédiaire et la reproductibilité.
 La répétabilité : exprime la précision dans les mêmes conditions opératoires sur un court
intervalle de temps. La répétabilité est également appelée précision intra-essai.
 La précision intermédiaire : représente les variations intra-laboratoires : différents
jours, différents analystes, différents équipements, etc.
 La reproductibilité : démontre la précision inter-laboratoires (études collaboratives,
généralement appliquée à la standardisation de la méthodologie).
La reproductibilité de la méthode n’est pas obligatoire si la précision intermédiaire a été
démontrée.

IV.5. Intervalle de mesure (Ecart d’utilisation)

-L’intervalle de mesure d'une procédure analytique est l'intervalle entre la concentration

maximale et concentration minimale (quantités) d'analyte dans l'échantillon (y compris ces
concentrations) dont il a été démontré que la procédure analytique présente un niveau
acceptable de précision, exactitude et linéarité.
-La limite inférieure de cet intervalle est le seuil de quantification ou de détection. La valeur
haute est dépendante du système de détection.

IV.6. Robustesse

La robustesse d'une procédure analytique est une mesure de sa capacité à rester non affecté
par de petites variations des paramètres de la méthode et fournit une indication de sa fiabilité
lors d'une utilisation normale.

31
Partie expérimentale
Introduction

La partie expérimentale de notre mémoire a été réalisé au niveau du

laboratoire de contrôle qualité de l’industrie pharmaceutique EL-
KENDI.

EL- KENDI est une industrie pharmaceutique algérienne avec investissement direct étranger,
de production de médicaments. C’est une entreprise agréée par le ministère de la santé en
Algérie pour la conception de génériques.
L'usine est située au niveau de la zone industrielle de Sidi Abdellah (Zeralda) regroupant le
laboratoire de production, laboratoire de contrôle qualité, laboratoire de R&D, le maga sin,
l’administration et ressources humaines.

Dans cette partie du mémoire, nous présentons la démarche entreprise pour la validation de la
méthode analytique du test de dissolution par
UPLC du médicament EXVAL®.

L’objectif de cette partie consiste à prouver d’une

manière évidente et convaincante selon les normes
de l’ICH et selon le protocole interne d’EL-KENDI
que le test de dissolution du médicament EXVAL®
analysé par UPLC est un test fiable, précis et exact,
ce qui permet un passage en toute sécurité de
l’ancienne méthode qui se faisait par HPLC et qui
consomme beaucoup de réactif avec un temps d’analyse important, à une nouvelle méthode
qui se fait par UPLC et qui est beaucoup plus rapide et efficiente.

Cette partie sera devisée en deux chapitres :

Chapitre I : consiste à détailler le matériel et les réactifs utilisés ainsi que le protocole suivi
pour la validation de la méthode analytique.

Chapitre II : Dédié à la présentation des résultats ainsi que leurs interprétations.

32
 Chapitre I : Matériels et méthodes

Dans le cadre de validation d’une méthode analytique du test de dissolution par UPLC du
médicament EXVAL®, plusieurs produits et réactifs ont été utilisé ainsi que de différents
appareils.
Ce chapitre décrit en détail le protocole de validation suivi lors de notre travail.

I. Matériels et appareillage

Une panoplie de produits et réactifs, une variété de verrerie ainsi que de différents appareils
ont servi lors de la réalisation de ce travail.

I.1. Produits et réactifs utilisés

Pour la validation de la méthode de dissolution d’EXVAL®, nous avons eu recours aux

produits et réactifs suivants :
 Le working standard d’AMLODIPINE BESILATE à 99.3% de pureté,
 le working standard du VALSARTAN à 99.0% de pureté,
 Placebo,
 Triéthylamine ,
 Acide phosphorique dilué,
 Acétonitrile ,
 Méthanol,
 Hydroxyde de sodium NaOH 5N,
 Phosphate de potassium monobasique,
 Eau purifiée.

Figure 11 : Réactifs utilisés

33
 Figure 12 : Les caractéristiques d’EXVAL®

II.2. Instruments et équipements

Verrerie : Fioles jaugées (20ml, 50ml, 100ml, 200ml)

Béchers (50ml, 100ml, 1000ml, 5000ml)
Pipettes jaugées (1ml, 2ml, 3ml, 10ml, 20ml)
Pro pipette
Eprouvette (10ml)
Seringue

Figure 13 : Fioles jaugées et béchers

34
 Figure 14 : Pipettes jaugées et pro pipette

Appareil : UPLC Acquity H-class de la marque WATERS dotés du software Empower 3

waters, un logiciel d’acquisition, de traitement et de gestion des données chromatographiques.
(Figure 15)

Figure 15 : ACQUITY UPLC H-Class 35

Figure 16 : Appareil de dissolution

Figure 17 : Balances analytiques

Figure 18 : pH mètre de paillasse

36
 Figure 19 : Bain ultrason (sonicateur)

II. Conditions chromatographiques

Plusieurs conditions chromatographiques sont exigées lors de l’utilisation de la chaine UPLC.

Le tableau IV démontre les conditions chromatographiques choisi lors de la validation de la
méthode analytique du test de dissolution par UPLC du médicament EXVAL®

Tableau IV : Conditions chromatographiques

Colonne : AQCUITY UPLC C18 Longueur (mm) : 50

Diamètre (mm) : 2.1
Porosité (µm) : 1.7
Composition de la phase mobile Tampon pH = 3, Méthanol,
Acétonitrile
Longueur d’onde (nm) 237
Débit (ml/min) 0.313
Volume d’injection (µL) 1.4

37
III. Méthodologie

La méthodologie est subdivisée en deux petites parties : la première décrit les différentes
étapes pour préparer les différentes solutions telles que la phase mobile, diluant, solution mère
concentrée d’AMLODIPINE, solution mère concentrée du VALSARTAN, le standard et le
placebo.
La seconde consiste à décrire en détail le protocole de validation de la méthode d’analyse du
test de dissolution par UPLC du médicament EXVAL® selon les directives de l’ICH, et un
protocole interne établi par le laboratoire de contrôle qualité d’EL-KENDI.

III.1. Préparation des solutions

Les solutions préparées durant ce travail sont : Phase mobile (Solution A), matrice ou diluant
(Solution B), solution mère concentrée d’AMLODIPINE (Solution C), solution mère
concentrée du VALSARTAN (Solution D), standard [AMLODIPINE + VALSARTAN]
(Solution E) et le Placebo (Solution F)

III.1.1. Phase mobile (Solution A)

 Préparation de la solution tampon à pH= 3.0 : ajouter 7ml de triéthylamine dans un

bécher d’un litre contenant 900ml d’eau purifiée, ajuster le pH jusqu’à 3.0 en utilisant
l’acide phosphorique dilué, compléter avec de l’eau purifiée jusqu'à 1000ml, bien
mélanger.
 Mesurer 420ml de la solution tampon à pH=3.0, 400ml de Méthanol et 180ml
d’Acétonitrile séparément et les mélanger par la suite.
 Filtrer et dégazer la phase mobile.

III.1.2 Matrice ou diluant (Solution B)

-Préparation d’une solution 5N d’hydroxyde de sodium : Pour 100ml de NaOH 5N, peser
20g de NaOH en pastille (grain), dissoudre dans 100ml d’eau purifiée.
-Pour un litre de diluant, peser 9.1g de phosphate dihydrogène monobasique, dissoudre dans
un bécher d’un litre contenant 900ml d’eau purifiée, ajuster le pH jusqu’à 6.8 en utilisant une
solution 5N d’hydroxyde de sodium NaOH 5N, compléter jusqu’à 1000ml avec de l’eau
purifiée.
5N=5M  n= m/M
M= 40g/mol n= 5moles  m = 200 g
200g  1000ml
20g  100ml

38
III.1.3. Solution mère concentrée d’AMLODIPINE (Solution C)

Mettre une pesée de 77mg d’AMLODIPINE BESILATE dans une fiole de 200ml, ajouter 3ml
de méthanol, mettre la solution dans l’appareil de sonication pendant quelques minutes, puis
compléter avec de l’eau purifiée jusqu’au trait de jauge.

III.1.4. Solution mère concentrée du VALSARTAN (Solution D)

Peser 100mg de VALSARTAN dans une fiole de 200ml, dissoudre avec de l’eau purifiée
jusqu’au trait de jauge.

III.1.5. Standard [AMLODIPINE + VALSARTAN] (Solution E)

Dans une fiole de 50ml, mélanger 2ml de solution mère d’AMLODIPINE BESILATE avec
20ml de solution mère du VALSARTAN, compléter au trait de jauge avec le diluant.

III.1.6. Placebo (Solution F)

Peser 98.45mg du placebo dans une fiole de 200ml, dissoudre avec de l’eau purifiée jusqu’au
trait de jauge.

III.2. Protocole de validation de la méthode d’analyse de dissolution par

UPLC pour le médicament EXVAL®

III.2.1. Spécificité

 Préparation des différentes solutions (Tableau V).

 Double injection pour chacune des solutions pour confirmer les résultats.
 Evaluer les différents chromatogrammes.

39
 Tableau V : Préparation des solutions pour le paramètre « spécificité »

Solution préparation

S1 (A= AMLODIPINE)
Prélever 1ml de (C), mettre dans une fiole de
S2 (A) 50ml, ajuster avec de l’eau purifiée.

S1 (V=VALSARTAN)
S2 (V) Prélever 4ml de (D), mettre dans une fiole de
100ml, ajuster avec de l’eau purifiée.

S1 (PM= Phase mobile)

S2 (PM) Solution A

S1 (Di =Diluant)
S2 (Di) Solution B

S1 (Placébo)
S2 (P) Solution F

S1 (A+V)
S2 (A+V) Solution E

III.2.2. Linéarité

 Préparation de cinq niveaux de concentration (25%, 50%, 100%, 125%, 150%) à partir
des solutions mères concentrées d’AMLODIPINE et VALSARTAN. (Tableau VI)
 Triple injection pour chaque niveau.
 Traçage de la courbe de linéarité et calcul du coefficient de corrélation qui doit se
rapprocher de 1.
Formule :
Cov(X, Y)
R=
σx , σy
Avec :
Cov (x,y) : Covariance des variables x et y
𝜎𝑥 , 𝜎𝑦: Ecart type de x et y
R : coefficient de corrélation compris entre -1 et +1.

40
 Tableau VI : Préparation des solutions pour le paramètre « linéarité »

Niveau 25% 50% 100% 125% 150%

Volume transféré de la solution C 1 1 2 1 3

(ml)

Volume transféré de la solution D 10 10 20 10 30

(ml)

Volume fiole (ml) 100 50 50 20 50

Concentration d’AMLODIPINE 0.002 0.005 0.011 0.013 0.016

(mg/ml)

Concentration du VALSARTAN 0.05 0.1 0.2 0.25 0.3

(mg/ml)

III .2.3. Exactitude

 Pour chaque principe actif, l’exactitude est évaluée à partir de 3 niveaux de concentration
différents (25%, 100%, 150%).
 Pour chaque principe actif, et pour chaque niveau de concentration, effectuer trois pesées
différentes dans le but de préparer trois solutions mères à partir desquelles les solutions filles
seront préparées (dilution 2/50 pour la solution mère d’AMLODIPINE et 20/50 pour celle du
VALSARTAN). Une quantité adéquate de placebo (l’équivalent du niveau 100%) est
rajoutée aux solutions. Chaque solution est injectée deux fois. (Tableau VII)
 Calcul du recouvrement qui doit être compris entre 95 et 105% pour les 18 solutions, en plus
de ça le coefficient de variation de chaque niveau qui doit être inférieur à 2.0%.
Formule :
AUC de l' échantillo n  prise d' essai du Standard
Re couvrement(%)  100
AUC du Standard  prise d' essai de l' échantillo n

41
 Tableau VII : Préparation des solutions pour le paramètre « exactitude »

Niveau 25% 100% 150%

masse d’AMLODIPINE 19.25 19.25 19.25 77 77 77 115.5 115.5 115.5

(mg)

Concentration 0.002 0.002 0.002 0.011 0.011 0.011 0.016 0.016 0.016

d’AMLODIPINE
(mg/ml)

masse du VALSARTAN 25 25 25 100 100 100 150 150 150

(mg)

Concentration du 0.05 0.05 0.05 0.2 0.2 0.2 0.3 0.3 0.3
VALSARTAN (mg/ml)

Volume du placebo 20 20 20
transféré de la solution
mère (ml)

III .2.4. Précision

III .2.4.1. Répétabilité

III .2.4.1.1. Répétabilité de la mesure (injection)

 L’évaluation de la répétabilité de la mesure se fait par la préparation d’un standard pour

l’AMLODIPINE et un autre pour le VALSARTAN.
 Réalisation de 10 injections pour chaque préparation sur un court intervalle de temps.
 Calcul du coefficient de variation qui doit être inférieur à 2.0%.

42
III .2.4.1.2. Répétabilité de l’analyse (Intra précision)

 Utilisation de l’appareil de dissolution à palette contenant six cuves, remplir chacune

de 900ml de matrice (diluant), régler l’appareil à 37°C de température, mettre un
comprimé d’EXVAL ® de 5mg/160mg dans chaque cuve, programmer à 50 tours
par minute pendant une durée de 45 minutes puis prélever et lancer l’analyse. Ce
paramètre doit être fait dans les mêmes conditions opératoires (même analyste,
même appareil, même jour…etc.)
 Calcul du coefficient de variation qui doit être inférieur à 10%.

III .2.4.2 Précision intermédiaire

 Suivre les mêmes étapes que la répétabilité de l’analyse avec changement de

l’analyste, à appliquer un autre jour.
 Calcul du coefficient de variation qui doit être inférieur à 10%.

III .2.5. Etude de la stabilité

 Mise de six échantillons dans le réfrigérateur et laisser 24h.

 Mise de six autres échantillons dans l’auto injecteur pendant 24h.
 Analyse par UPLC.
 Calcul du coefficient de variation qui doit être inférieur à 10%.

43
 Chapitre II : Résultats et discussion

Le but de ce chapitre est de valider la méthode de dissolution d’EXVAL® par

chromatographie liquide ultra performance en mode isocratique avec une détection UV ; cela
par l’interprétation et l’explication des résultats des différents critères de validation.

I. Spécificité

L’objectif de ce paramètre est :

 L’identification des pics des différents analytes grâce à leur temps de rétention.
 Démontrer l’évaluation univoque de la substance à analyser en présence d’autres
composés potentiellement présents ; autrement dit démontrer que la réponse ne provient
que du composé à analyser même en présence d’autres composés tels que les impuretés,
phase mobile, matrice ...Etc.

Figure 20 : Chromatogramme d’AMLODIPINE (100%)

Figure 21 : Chromatogramme du VALSARTAN (100%)

44
Figure 22 : Chromatogramme du diluent

Figure 23 : Chromatogramme du placebo

45
 Figure 24 : Chromatogramme de la phase mobile

Figure 25 : Chromatogramme d’AMLODIPINE et VALSARTAN

46
Figure 26 : Chromatogramme d’AMLODIPINE + VALSARTAN + placebo
+ diluent

Interprétation

 Les figures 20 et 21 donnent le temps de rétention des deux principes actifs à savoir
l’AMLODIPINE et le VALSARTAN.
 Les figures 22 23 et 24 indiquent l’absence du pic du diluent, placebo, phase mobile
respectivement au temps de rétention du pic d’AMLODIPINE et VALSARTAN.
 La figure 25 montre qu’il y a une bonne séparation des pics des deux principes actifs.
 La figure 26 et les données précédentes montrent qu’il n’y a pas de chevauchement sur
le temps de rétention de l’AMLODIPINE et celui du VALSARTAN, ce qui démontre
clairement que le placebo, et le diluent et la phase mobile n’ont aucun effet sur les
deux principes actifs cités ci-dessus.

En conclusion, la méthode est spécifique et permet le dosage du principe actif dans le

produit.

II. Linéarité

La linéarité de la méthode de dosage est vérifiée sur l’intervalle de validation.

L’objectif de ce paramètre est de démontrer qu’il y a une proportionnalité entre les différentes
concentrations et la surface sous la courbe.

47
 II.1 Linéarité d’AMLODIPINE

Tableau VIII : Les valeurs du test de linéarité de l’AMLODIPINE

Linéarité et calcul du CV%

Masse théorique Masse théorique Masse réelle Masse réelle Volume Concentration
Préparations d’AMLODIPINE d’AMLODIPINE d’AMLODIPINE d’AMLODIPINE d’AMLODIPINE d’AMLODIPINE AUC Paramètres résultats
BESILATE (mg) (mg) BESILATE (mg) (mg) utilisé (ml) (mg/ml)

1 0,002779 25955
Niveau 1 : 25%

Injections

2 1,0 0,002779 25774

Ecart type 119,24904
Moyenne 25819,666
3 0,002779 25730
CV% 0,46185

1 0,005559 60152
Niveau 2 : 50%

Injections

2 1,0 0,005559 60126

Ecart type 146,07190

Moyenne 60223,000
3 0,005559 60391
CV% 0,24255
12095
1 0,011118
Niveau 3 : 100%

3
Injections

12099
2 2,0 0,011118
55,6 4 Ecart type 36,11556
77,0 55,5 77,1
12092 Moyenne 120956,33
3 0,011118
2 CV% 0,02986
15143
1 0,013897
Niveau 4 : 125%

0
Injections

15119
2 1,0 0,013897
9 Ecart type 157,12097
15113 Moyenne 151253,00
3 0,013897
0 CV% 0,10388
19374
1 0,016677
Niveau 5 : 150%

9
Injections

19389
2 3,0 0,016677
6 Ecart type 212,58489
19416 Moyenne 193937,66
3 0,016677
8 CV% 0,10962

On peut tracer la courbe des surfaces des pics en fonction des concentrations
d’AMLODIPINE (tableau IX)

48
 Tableau IX : Données pour le tracé de la courbe de linéarité
d’AMLODIPINE

Concentration d’AMLODIPINE(%) Surface sous la courbe

25% 25820

50% 60223
100% 120956

125% 151253

150% 193938

Linérité de l'AMLODIPINE
250000

y = 1307.2x - 7210.7
200000 R² = 0.9967
Surface corrigée

150000

100000

50000

0
0 20 40 60 80 100 120 140 160
Concentration de l'AMLODIPINE

Figure 27 : Représentation graphique de la linéarité de l’AMLODIPINE

Interprétation

Selon le graphique de la linéarité d’AMLODIPINE (Figure 27), la courbe est une droite sous
forme de y = a x + b ; avec a= 1307.2 et b = - 7210,7 et un coefficient de corrélation R= 0.998
ce qui répond aux critères d’acceptation indiqués par l’ICH.

Conclusion

Concernant l’AMLODIPINE, la méthode est linéaire pour l’intervalle de validation, soit

pour une teneur en AMLODIPINE allant de 0.002mg/ml à 0.016 mg/ml.

49
 II.2 Linéarité du VALSARTAN

Tableau X : Les valeurs du test de linéarité du VALSARTAN

Linéarité et calcul du CV%

masse théorique du Masse réelle du Volume Concentration du
Préparations VALSARTAN VALSARTAN VALSARTAN VALSARTAN AUC Paramètres Résultat
Stock Solution (mg) (mg) utilisé (ml) (mg/ml)

1 0,050000 475652
Niveau 1 : 25%

Injections

2 10,0 0,050000 473836

Ecart type 1169,63256
Moyenne 474318,33333
3 0,050000 473467
% CV 0,24659

1 0,100000 983874
Niveau 2 : 50%

Injections

10,0
2 0,100000 981989
Ecart type 972,26557

Moyenne 983069,33333
3 0,100000 983345
% CV 0,09890

1 0,200000 1929213
Niveau 3 : 100%

Injections

100,0 100,0 20,0

2 0,200000 1926111
Ecart type 2101,48670
Moyenne 1926843,33333
3 0,200000 1925206
% CV 0,10906

1 0,250000 2459273
niveau 4 : 125%

Injections

2 10,0 0,250000 2453122

Ecart type 4203,27281

Moyenne 2454543,33333
3 0,250000 2451235
% CV 0,17124

1 0,300000 2975396
Niveau 5 : 150%

Injections

2 30,0 0,300000 2975468

Ecart type 1844,84159
Moyenne 2974574,33333
3 0,300000 2972859
% CV 0,06202

50
 On peut tracer la courbe des surfaces des pics en fonction des concentrations du VALSARTAN
(tableau XI).

Tableau XI : Données pour le tracé de la courbe de linéarité du

VALSARTAN

Concentration du VALSARTAN (%) Surface sous la courbe

25% 474318
50% 983069
100% 1926843
125% 2454543
150% 2974574

Linéarité du VALSARTAN
3500000

3000000 y = 19860x - 24759

R² = 0.9996

2500000
Surface corrigée

2000000

1500000

1000000

500000

0
0 20 40 60 80 100 120 140 160
Concentration du VALSARTAN

Figure 28 : Représentation graphique de la linéarité du VALSARTAN

Interprétation

D’après le graphique de la linéarité du VALSARTAN (Figure 28), la courbe est une droite
sous forme de y = a x + b ; avec a= 19860 et b = - 24759 et un coefficient de corrélation R =
1.000 ce qui répond aux critères d’acceptation indiqués par l’ICH.

Conclusion
Concernant le VALSARTAN, la méthode est linéaire pour l’intervalle de validation, soit
pour une teneur en VALSARTAN allant de 0.05mg/ml à 0.3 mg/ml.
51
 III. Exactitude
L’objectif de ce paramètre est de démontrer qu’il y a un étroit accord entre la valeur de référence
et la valeur calculée.

III.1. Exactitude de l’AMLODIPINE

Tableau XII : Résultats d’exactitude de l’AMLODIPINE

Exactitude
Masse réelle
Moyenne % CV
Préparations d’AMLODIPINE AUC Recouvrement
AUC d’AUC
(mg)
125530
Préparation des 125607
77,0 125156 0,38187
standards 124745
124740
Préparation 1 30817
19,2 30773 98,6
Niveau 1 : 25%

Préparation 1 30728 Niveau 1 : 25%

Préparation 2 29878 Ecart type 1,53628
19,2 29858 1,51785 95,7
Préparation 2 29837 Moyenne 97,40501
Préparation 3 30771 % CV 1,57721
19,3 30723 97,9
Préparation 3 30674
Préparation 1 125495
77,0 125411 100,2
niveau 2 : 100%

Préparation 1 125326 Niveau 2 : 100%

Préparation 2 126822 0,56162 Ecart type 0,58875

77,0 126721 101,3
Préparation 2 126620 Moyenne 100.57181
Préparation 3 125298 % CV 0,58540
76,9 125319 100,3
Préparation 3 125340
Préparation 1 191156
115,5 191082 101,8
Préparation 1 191008 Niveau 3 : 150%
Niveau 3 : 150%

Préparation 2 189567 Ecart type 0,44713

115,5 189421 100,9
Préparation 2 189275 0,39620 Moyenne 101,37893

Préparation 3 190412 % Cv 0,44105

115,4 190298 101,5
Préparation 3 190184

52
 Interprétation

Concernant l’AMLODIPINE, les résultats du test de l’exactitude montrent que les coefficients
de variation sont inférieurs à 2.0% pour chaque niveau (Tableau XII) conformément à la
norme exigée par ICH, ajoutant à cela les résultats du recouvrement de chaque préparation qui
sont entre 95.0% et 105.0% ce qui répond aux critères d’acceptation indiqué par l’ICH.

Conclusion

La méthode est exacte pour l’AMLODIPINE.

III.2. Exactitude du VALSARTAN

Tableau XIII : Résultats d’exactitude du VALSARTAN

Exactitude
Masse réelle du
moyenne % CV
Préparations VALSARTAN AUC Recouvrement
AUC d’AUC
(mg)
1934786
Préparation des 1930931
100,2 1931932 0,13536
standards 1928809
1933203

Préparation 1 501427
25,2 501271 103,2
Niveau 1 : 25%

Préparation 1 501114 Niveau 1 : 25%

Préparation 2 500591 0,17798 Ecart type 0,32383
25,0 500183 103,8
Préparation 2 499774 Moyenne 103,53904
Préparation 3 502462 % CV 0,31276
25,1 501758 103,7
Préparation 3 501054
Préparation 1 1920756
100,2 1920529 99,4
Niveau 2 : 100%

Préparation 1 1920302 Niveau 2 : 100%

Préparation 2 1951114 Ecart type 0,83248
100,0 1946133 0,70736 100,9
Préparation 2 1941151 Moyenne 99,98139
Préparation 3 1920127 % CV 0,83263
100,0 1920324 99,6
Préparation 3 1920521
Préparation 1 2898964
150,1 2897176 100,1
Niveau 3 : 150%

Préparation 1 2895388 niveau 3 : 150%

Préparation 2 2905021 Ecart type 0,5330
150,0 2903336 0,55489 100,4
Préparation 2 2901650 Moyenne 100,5459
Préparation 3 2930030 % CV 0,5301
150,3 2930906 101,1
Préparation 3 2931781

53
Interprétation

Concernant le VALSARTAN, les résultats du test d’exactitude montrent que les coefficients
de variation sont inférieurs à 2.0% pour chaque niveau (Tableau XIII) conformément à la
norme exigée par ICH, ajoutant à cela les résultats du recouvrement de chaque préparation qui
sont entre 95.0% et 105.0% ce qui répond aux critères d’acceptation indiqué par l’ICH.

Conclusion

La méthode est exacte pour VALSARTAN.

IV. Précision

IV.1. Répétabilité

IV.1.1. Répétabilité de la mesure (injection)

Tableau XIV : Résultats de la répétabilité de la mesure pour

l’AMLODIPINE

Standard Surface sous la courbe Temps de rétention (RT)

(AUC)
1 59742 1.075
2 59798 1.074
3 60027 1.072
4 59890 1.075
5 59781 1.075
6 59721 1.075
7 59815 1.075
8 59988 1.074
9 60002 1.074
10 59984 1.074
Ecart type 117 0.001
Moyenne 59875 1.074
CV% 0.2 0.1

54
 Tableau XV : Résultats de la répétabilité de la mesure pour le
VALSARTAN

Standard Surface sous la courbe Temps de rétention (RT)

(AUC)
1 189895 1.855
2 189380 1.853
3 189871 1.852
4 189761 1.856
5 189492 1.857
6 189517 1.856
7 189575 1.856
8 189267 1.856
9 189233 1.855
10 189547 1.854
Ecart type 394 0.002
Moyenne 189454 1.855
CV% 0.2 0.1

Interprétation

Les résultats de l’étude de répétabilité de la mesure (Tableau XIV et Tableau XV) montrent
que les coefficients de variation pour les AUC ainsi que pour les RT sont inférieur à 2.0% ce
qui répond à la norme exigée par l’ICH. Donc la répétabilité de la mesure est acceptable.

IV.1.2. Répétabilité de l’analyse (intra-précision)

Tableau XVI : Résultats de la répétabilité de l’analyse d’AMLODIPINE

Analyste Préparation Dosage moyen %

1 95.655567
2 87.402277
3 86.395892
4 86.505552 Ecart type 3.898582649
er
1 analyste
5 92.825401 Moyenne 90.13872633
6 92.047669 CV% 4.32509

55
 Tableau XVII : Résultats de la répétabilité de l’analyse du VALSARTAN

Analyste Préparation Dosage moyen %

1 100,508131
2 97,621954
3 95,713071
4 93,140516 Ecart type 3.39319520
er
1 analyste 5 101,665373 Moyenne 98.284205
6 101,056186 CV% 3.45243184

Interprétation

Les résultats de la répétabilité de l’analyse (Tableau XVI, Tableau XVII) montrent que les
valeurs du coefficient de variation sont inférieures à 10.0% ce qui correspond au critère
d’acceptation donné par l’ICH, et donc la répétabilité de l’analyse est acceptable.

IV.2. Précision intermédiaire

Tableau XVIII : Résultats de la précision intermédiaire de l’AMLODIPINE

Analyste Préparation Dosage moyen %

1 95.655567
2 87.402277

3 86.395892
1er analyste
4 86.505552 Ecart type 3.898582649

5 92.825401 Moyenne 90.13872633

6 92.047669 CV% 4.32509

1 89.94267

2 95.33381

3 92.29864
2e analyste 4 91.32001 Ecart type 1,793097161

5 91.55324 Moyenne 92,11425833

6 92.23718 CV% 1,94660
Ecart type 3,071554249
Moyenne 91,12649233
CV% 3,37065
56
 Tableau XIX : Résultats de la précision intermédiaire du VALSARTAN

analyste Préparation Dosage moyen %

1 100,508131
2 97,621954
3 95,713071
4 93,140516 Ecart type 3.39319520
er
1 analyste 5 101,665373 Moyenne 98.284205
6 101,056186 CV% 3.45243184
1 102,6473
2 102,47641
3 99,781
4 99,03975 Ecart type 2,412339369
2e analyste
5 97,09539 Moyenne 100,6828588
6 103,0573 CV% 2,39598
Ecart type 3,073736085
Moyenne 99,48353196
CV% 3,08969

Interprétation

Les résultats de l’étude de la précision intermédiaire (Tableau XVIII, Tableau XIX) montrent que
les valeurs des coefficients de variation sont inférieures à 10.0% ce qui correspond au critère
d’acceptation donné par l’ICH, et donc la méthode présente une précision intermédiaire
acceptable.

Conclusion

Puisque la méthode est répétable avec une précision intermédiaire acceptable, on

conclue qu’elle est précise.

V. Ecart d’utilisation

Puisque notre méthode présente une linéarité, une exactitude et une précision acceptable dans
l’intervalle [25 - 150] %, donc cet intervalle peut être considérer comme écart d’utilisation.

57
VI. Etude de la stabilité

L’objectif de ce paramètre est de vérifier la stabilité des solutions par comparaison entre les
échantillons et les solutions initiales.

Tableau XX : Résultats de la stabilité des échantillons d’EXVAL®

(AMLODIPINE) après 24h dans l’auto injecteur

Stabilité d’AMLODIPINE

Echantillons Initial Après 24h dans l’auto injecteur

Résultats Résultats CV%
1 95.65557 97.32517 1.22353
2 87.40227 88.81393 1.13292
3 86.39589 86.49670 0.08246
4 86.50555 87.76107 1.01889
5 92.82540 96.80747 1.49391
6 92.04767 92.44920 0.30778

Tableau XXI : Résultats de la stabilité des échantillons d’EXVAL®

(AMLODIPINE) après 24h dans le réfrigérateur

Stabilité d’AMLODIPINE
Echantillons Initial Après 24h dans le réfrigérateur
Résultats Résultats CV%
1 95.65557 98.87398 2.33976
2 87.40227 90.50993 2.47026
3 86.39589 90.68214 3.42316

4 86.50555 88.39127 1.52479

5 92.82540 96.05858 2.42075
6 92.04767 89.12277 2.28317

58
 Tableau XXII : Résultats de la stabilité des échantillons d’EXVAL®
(VALSARTAN) après 24h dans l’auto injecteur

Stabilité du VALSARTAN
Echantillons Initial Après 24h dans l’auto injecteur

Résultats Résultats CV%

1 100.50813 100.14078 0.25891

2 97.62195 97.39388 0.16539

3 95.71307 95.86505 0.11219
4 93.14052 92.91658 0.17021
5 101.66537 101.56226 0.07175
6 101.05619 100.63404 0.29600

Tableau XXIII : Résultats de la stabilité des échantillons d’EXVAL®

(VALSARTAN) après 24h dans le réfrigérateur

Stabilité du VALSARTAN
Echantillons Initial Après 24h dans le
réfrigérateur
Résultats Résultats CV%
1 100.50813 101.73575 0.85843
2 97.62195 98.07345 0.32627
3 95.71307 97.16816 1.06688
4 93.14052 94.09029 0.71740
5 101.66537 102.43778 0.53520
6 101.05619 101.55732 0.34978

Interprétation

Les résultats de l’étude de stabilité (Tableau XX, XXI, XXII, XXIII) montrent que les valeurs
des coefficients de variation des échantillons après 24h dans l’auto injecteur et dans le
réfrigérateur ne dépassent pas 10 % ; ce qui répond à la norme exigée par l’ICH.

Conclusion
Les échantillons restent stables pendant 24h dans le réfrigérateur et l’auto injecteur.

59
Conclusion

La validation des méthodes analytiques est un maillon indispensable pour le système

d’assurance qualité, elle permet d’avoir des résultats fiables et exacts, et donc elle contribue à
l’obtention d’un médicament qui répond aux exigences de qualité, d’efficacité, et de sécurité.

La validation des méthodes analytiques se fait selon des paramètres déterminés par l’ICH
(spécificité, linéarité, précision, exactitude, etc.), l’évaluation de ces paramètres est réalisée
grâce à des éléments statistiques comme le coefficient de variation, le coefficient de
corrélation, le recouvrement, …etc.

Les paramètres de validation obtenus lors de notre étude reflètent :

 Une bonne spécificité qui se manifeste par l’absence d’interférence entre le placebo, la
phase mobile, le diluant, et nos deux principes actifs.
 Une linéarité acceptable dans l’intervalle de concentration choisit pour les deux principes
actifs, avec des coefficients de corrélation qui s’approchent de 1.
 Une exactitude prouvée avec des coefficients de variations inferieurs à 2.0% pour chaque
niveau de concentration et un taux de recouvrement compris entre 95 et 105% pour chaque
préparation.
 Le test de précision qui inclue la répétabilité, et l’inter précision, a montré des résultats
dans les normes.
 Pour les tests complémentaires, les résultats obtenus mènent à conclure que nos deux
principes actifs restent stables dans le réfrigérateur et dans une température ambiante
pendant au moins 24h.

De ce fait, on peut conclure que la méthode analytique du test de dissolution pour le

médicament EXVAL® réalisée par UPLC est validée, et peut être utilisée dans le contrôle des
lots de routine. Cette validation va permettre à El-KENDI industrie des médicaments une
réduction du temps d’analyse et une diminution de la quantité de réactif utilisée, et donc un
gain de temps et d’argent.

60
Bibliographie

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l’Investissement Direction Générale de l’Intelligence Economique, des Etudes et de la
Prospective rapport sectoriel N°1 : industrie pharmaceutique.[consulté le 30 juin 2020]
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métiers partie référentiel "métier chargé d'assurace qualité" et b) production rubrique: la
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réglementaire [consulté le 30 juin 2020]
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produits de santé.[ consulté avril 2020]
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du diplôme de docteur en pharmacie : Validation du nettoyage d'une ligne de production des
formes pâteuses par l'approche du "worst-case". Université d’Alger centre. F. [consulté avril
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médicaments. [consulté le 2 juillet 2020]
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208 et 210 [consulté le 4 mai 2020]
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université.[consulté le 3 mai 2020]
18. Medatice université Joseph Fourier Grenoble 1, U6-Pharmacologie chapitre 1 aspects
pharmacodynamique année 2011/2012.[consulté le 3 mai 2020]

61
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21. www.bruker.com : site officiel de BRUKER entreprise de fabrication d’instrumentation
scientifique. [consulté le 15 septembre 2020]
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biopharmaceutique des formes orales solides. In: Wehrlé P, Pharmacie galénique: Formulation et
technologie pharmaceutique. Paris : Maloine.[consulté le 10 octobre 2020]
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méthodes d’analyses. [consulté le 5 juin 2020]
26. Validation analytique, application de la procédure SFSTP 2003-2006. [consulté le 5 juin
2020]
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séparation. In Techniques de l’Ingénieur, p. 456.[consulté le 10 juin 2020]
28. analyse chimique de méthodes et techniques instrumentales moderne édition francis
rouessac, annick rouessac.[consulté le 12 juin 2020]
29. Rocca, J.L. 2006. Évolution des Techniques Séparatives vers les Temps d'Analyse Plus
Courts. Conférence au Club Lyonnais de Chromatographie de l'AFSEP.[consulté le 13 juin
2020]
30. ISO/IEC 17025, 2005 clause 5.4.5.1. [consulté le 15 mai 2020]
31. ICH (Q2), validation des méthodes analytiques : texte et méthodologie. [consulté le 9
mars 2020]
32. USP40-NF35 <1225>, validation des procédures officinales. [consulté le 16 mai 2020]
33. résolution du conseil des collégiats RDC, n°:166 (24juillet2017): Chapitre2. [consulté le
16 mai 2020]

62
 Annexes

Annexe I : Test de linéarité ......................................................................................................... II

Annexe II : Test d’exactitude ..................................................................................................... V
Annexe III : Test de précision .................................................................................................... X
Annexe IV : Test de stabilité ..................................................................................................XVI

I
 Annexe I
Test de linéarité

Figure 1 : Chromatogramme du niveau 1 : 25%

Figure 2 : Chromatogramme du niveau 2 : 50%

II
Figure 3 : Chromatogramme du niveau 3 : 100%

Figure 4 : Chromatogramme du niveau 4 : 125%

III
Figure 5 : Chromatogramme du niveau 5 : 150%

IV
 Annexe II
Test d’exactitude

Figure 6 : Chromatogramme du standard

Figure 7 : chromatogramme du niveau 1 : 25% préparation 1

V
Figure 8 : Chromatogramme du niveau 1 : 25% préparation 2

Figure 9 : Chromatogramme du niveau 1 : 25% préparation 3

VI
Figure 10 : Chromatogramme du niveau 2 : 100% préparation 1

Figure 11 : Chromatogramme du niveau 2 : 100% préparation 2

VII
Figure 12 : Chromatogramme du niveau 2 : 100% préparation 3

Figure 13 : Chromatogramme du niveau 3 : 150% préparation 1

VIII
Figure 14 : Chromatogramme du niveau 3 : 150% préparation 2

Figure 15 : Chromatogramme du niveau 3 : 150% préparation 3

IX
 Annexe III
Test de précision

Figure 16 : Chromatogramme du standard injection 1 et 2 (répétabilité de

l’injection)

X
Figure 17 : Chromatogramme du standard injection 3 et 4 (répétabilité de
l’injection)

XI
Figure 18 : Chromatogramme du standard injection 5 et 6 (répétabilité de
l’injection)

XII
Figure 19 : Chromatogramme du standard injection 7 et 8 (répétabilité de
l’injection)

XIII
Figure 20 : Chromatogramme du standard injection 9 et 10 (répétabilité de
l’injection)

XIV
Figure 21 : Chromatogramme du 1er analyste (intra précision)

Figure 22 : Chromatogramme du 2e analyste (inter précision)

XV
 Annexe IV
Test de stabilité

Figure 23 : Chromatogramme du standard après 24h dans l’auto injecteur

Figure 24 : Chromatogramme du standard après 24h dans le réfrigérateur

XVI
 -Nom et prénom 1 - Nom et prénom 2

BENDIAF Bilel TIGUEMOUNINE SOFIA

-Adresse mail -Adresse mail

bendiafbilel@gmail.com tiguemouninesofia@gmail.com

Résumé :
Dans un domaine aussi réglementé que l’industrie pharmaceutique, la validation des méthodes
analytiques s’impose, afin de garantir que les médicaments fabriqués répondent aux exigences de
qualité, d’efficacité, et de sécurité.
Notre travail réalisé au niveau du laboratoire de contrôle qualité de l’industrie pharmaceutique El-
KENDI, a pour objectif la validation d’une méthode analytique du test de dissolution par UPLC pour
le médicament EXVAL®, ce qui va réduire le cout et le temps d’analyse.
En se référant aux directives de l’ICH, on a réalisé plusieurs tests, à savoir : la spécificité, la précision,
la linéarité, l’exactitude, l’écart d’utilisation. Ces tests visent à démontrer la validité de notre méthode.
Les résultats obtenus montrent que notre méthode présente une spécificité et une linéarité adéquates,
avec une bonne exactitude, précision, et stabilité, ce qui confirme que la méthode est validée.
De ce fait, cette méthode analytique rentable, peut être utilisée dans le contrôle routinier de ce
médicament.
Mots clés :
Validation, méthodes analytiques, Contrôle qualité, Test de dissolution, UPLC.
Abstract:
In an area as regulated as the pharmaceutical industry, validation of analytical procedures is required
to ensure that manufactured medicines meet the requirements of quality, efficacy and safety.
Our work at the El-KENDI Pharmaceutical Industry Quality Control Laboratory aims to validate an
analytical procedure of the UPLC dissolution test for the EXVAL® drug, which will reduce the cost
and time of analysis.
Referring to the ICH guidelines, several tests were performed, namely: specificity, precision, linearity,
accuracy, range. These tests are intended to demonstrate the validity of our method.
The results obtained show that our method has adequate specificity and linearity, with good accuracy,
precision, and stability, confirming that the method is validated.
Therefore, this cost-effective analytical method, can be used in routine control of this drug.
Key Words:
Validation, analytical procedures, Quality control , Dissolution test , UPLC.
 -Nom et prénom 1 - Nom et prénom 2

BENDIAF Bilel TIGUEMOUNINE SOFIA

-Adresse mail -Adresse mail

bendiafbilel@gmail.com tiguemouninesofia@gmail.com

Résumé :
Dans un domaine aussi réglementé que l’industrie pharmaceutique, la validation des méthodes
analytiques s’impose, afin de garantir que les médicaments fabriqués répondent aux exigences de
qualité, d’efficacité, et de sécurité.
Notre travail réalisé au niveau du laboratoire de contrôle qualité de l’industrie pharmaceutique El-
KENDI, a pour objectif la validation d’une méthode analytique du test de dissolution par UPLC pour
le médicament EXVAL®, ce qui va réduire le cout et le temps d’analyse.
En se référant aux directives de l’ICH, on a réalisé plusieurs tests, à savoir : la spécificité, la précision,
la linéarité, l’exactitude, l’écart d’utilisation. Ces tests visent à démontrer la validité de notre méthode.
Les résultats obtenus montrent que notre méthode présente une spécificité et une linéarité adéquates,
avec une bonne exactitude, précision, et stabilité, ce qui confirme que la méthode est validée.
De ce fait, cette méthode analytique rentable, peut être utilisée dans le contrôle routinier de ce
médicament.
Mots clés :
Validation, méthodes analytiques, Contrôle qualité, Test de dissolution, UPLC.
Abstract:
In an area as regulated as the pharmaceutical industry, validation of analytical procedures is required
to ensure that manufactured medicines meet the requirements of quality, efficacy and safety.
Our work at the El-KENDI Pharmaceutical Industry Quality Control Laboratory aims to validate an
analytical procedure of the UPLC dissolution test for the EXVAL® drug, which will reduce the cost
and time of analysis.
Referring to the ICH guidelines, several tests were performed, namely: specificity, precision, linearity,
accuracy, range. These tests are intended to demonstrate the validity of our method.
The results obtained show that our method has adequate specificity and linearity, with good accuracy,
precision, and stability, confirming that the method is validated.
Therefore, this cost-effective analytical method, can be used in routine control of this drug.
Key Words:
Validation, analytical procedures, Quality control , Dissolution test , UPLC.