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PROCEDURE DU SDW AVEC LE REACTIF DE BIORAD

A. Matériels
 Eau physiologique
 Tubes à hémolyse
 Incubateur ou bain-marie
 Gants latex
 Micropipettes P100 et P1000
B. Mode opératoire
1. Méthode classique utilisant l’incubateur à 37 °C
a) Réaliser des dilutions en série du sérum au 1/10 - 1/20 - 1/40 - 1/80 et 1/160
b) Transférer 0,1ml des dilutions réalisées auxquelles il faut ajouter 0,9ml de la suspension
antigénique dans chaque tube. On obtient ainsi une dilution finale allant de 1/100 à 1/1600.
c) Incuber à 37°C pendant 2h.
d) Après incubation, observer, à la lumière, les tubes contenant les suspensions antigéniques H.
Elles forment avec le sérum une agglutination floconneuse et facilement dissociable.
e) Les tubes contenant les suspensions antigéniques O peuvent être laissés à température
ambiante (18-30°C) pendant 24h. A l’observation, les suspensions antigéniques O sont de
fines granulations difficilement dissociables. Lire de préférence à la lumière.
2. Méthode rapide par la centrifugation
a) Procéder à deux dilutions sérielles :
 Sérum : 0,2 0,1
 Eau physiologique : 1,8 1,9
 Dilution finale : 1/10 1/20
b) Disposer 4 tubes à hémolyse pour chaque type d’antigène soit 16 tubes au total et procéder
comme suit :

TUBES 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Sérum 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
1/20
Sérum 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
1/10
Ajouter à TO TO TH TH AO AO AH AH BO BO BH BH CO CO CH CH
chaque
tube 0,9ml
de
suspension
Dilution 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200
finale

c) Centrifuger à 3000tr/mn pendant 5mn, temps nécessaire pour sédimenter les bactéries.
d) Ré suspendre le précipitant en tapotant légèrement le culot du tube :
Résultat négatif : suspension homogène
Résultat positif : présence d’agglutination visible à l’œil nu.

Remarque : Si par exemple TO et TH sont positifs au 1/200 et que le reste est négatif, il est important
de reprendre avec les dilutions 1/40 - 1/80 - 1/160 de sérum de la même manière afin de déterminer
le titre final qui sera soit 1/400 soit 1/800 ou soit 1/1600.