Grille Toxico

Centre d’expertise en analyse environnementale du Québec
Programme d’accréditation
des laboratoires d’analyse
environnementale
GRILLE D’AUDIT
TOXICOLOGIE
Nom du laboratoire :
No du laboratoire :
Date de la visite :
Auditeur(trice) :
DR-12-GAT
Édition : 2004-12-16
1 LOCAUX ET ENVIRONNEMENT C NC
1.1 AMÉNAGEMENT
¾ AMÉNAGEMENT DES LOCAUX
Superficie de plancher d’au moins 20 m2 par personne (incluant les services connexes)
Aménagement adéquat des locaux ou prévoir des espaces séparés pour les activités sui-
vantes :
• Travail analytique (surface de table de travail, 1 m2 par personne, fonctionnel)
• Réception des échantillons
• Réfrigération des échantillons
• Détention des truites
• Essai pour les truites
• Élevage pour les daphnies
• Essai pour les daphnies
• Détention des têtes-de-boule
• Essai pour les têtes-de-boule
• Élevage pour les cériodaphnies
• Essai pour les cériodaphnies
• Culture d’algues
• Essai pour les algues
Commentaires :
C NC
¾ DISPONIBILITÉ DES SERVICES
Les services suivants doivent être rendus disponibles pour le bon déroulement des activités
analytiques :
• Hotte d’évacuation
• Source adéquate d’approvisionnement en eau pour la détention, l’élevage et les essais
de toxicité
• Système adéquat de traitement de l’eau pour la détention, l’élevage, les cultures et
comme eau de dilution
• Système adéquat de conditionnement de la température de l’eau pour chacune des
méthodes
DR-12-GAT Page 3 de 47
• Système de conditionnement de la température pour les salles à température contrôlée
• Système d’air comprimé exempt d’huile
• Système de ventilation
• Système d’éclairage adéquat avec photopériode
Commentaires :
C NC
1.2 SÉCURITÉ
¾ ÉQUIPEMENT DE SÉCURITÉ
L’équipement de sécurité suivant est disponible et fonctionnel :
• Extincteur
• Trousse de premiers soins
• Fontaine oculaire
• Système de détection de la chaleur ou de la fumée
• Lumière d’urgence
• Lunettes de sécurité
• Vêtements de laboratoire
• L’installation électrique doit être compatible avec le travail en présence d’eau
• Plan d’évacuation affiché dans les endroits stratégiques
• Signalisation des endroits dangereux
Commentaires :
Page 4 de 47 DR-12-GAT
C NC
¾ RANGEMENT
Le rangement doit être adéquat et permettre un accès sécuritaire
• Travail analytique
• Réception des échantillons
• Réfrigération des échantillons
• Salle de détention et d’élevage
• Salle d’essais
Commentaires :
C NC
1.3 PROPRETÉ
¾ PROPRETÉ DES ESPACES ET ÉQUIPEMENTS
• Manipulation des échantillons

• Tables de travail
• Laboratoire principal
• Espace de détention, d’élevage et de culture
• Équipements
Commentaires :
C NC
1.4 CONDITIONS AMBIANTES

• Entretien des équipements de maintien des conditions ambiantes (température et
photopériode), instruction disponible et enregistrement
• Absence de bruit et de vibration excessifs
• Moyen pour limiter les poussières excessives
• Arrêt des essais lorsque les conditions ambiantes peuvent affecter les résultats
• Enregistrement des actions correctives
Commentaires :
2 EAU DE LABORATOIRE ET RÉACTIFS C NC
2.1 EAU DÉMINÉRALISÉE

• Vérification et enregistrement des résultats des paramètres énumérés ci-dessous selon
les fréquences établies
Paramètres Fréquence Résultat attendu
Conductivité 1/semaine < 2 µmhos/cm à 25 oC
pH 1/semaine 5,5-7,5
Chlore résiduel total 1/mois < 0,1 mg/l
Métaux* 1/année < 1 µg/l chacun
BHAA 1/4 mois < 1000 UFC/ml
* Ag, Al, As, Cd, Co, Cr, Cu, Hg, Pb, Ni, Zn
Commentaires :
2.2 EAU POUR LA DÉTENTION, L’ÉLEVAGE, LA CULTURE ET LES ESSAIS DE TOXICITÉ
Les paramètres suivants doivent être vérifiés sur l’eau d'approvisionnement traitée (pour l'eau synthétique
voir section 2.1) et enregistrés aux fréquences établies et selon les limites de détection spécifiées
Critère de Limite de détection(2) requise ou
Paramètre Fréquence
qualité (1) précision
Alcalinité (mg CaCO3/l) 1/6 mois 20-200 2
Aluminium (mg/l) 1/6 mois < 0,09 0,01
Argent (mg/l) 1/6 mois < 0,0001 0,0001
Arsenic (mg/l) 1/6 mois < 0,05 0,001
Azote ammoniacal (mg N/l) 1/6 mois - - - (3) 0,02
BHAA (UFC/ml) 1/6 mois < 2 000 1
Cadmium (mg/l) 1/6 mois < 0,001 0,001
Carbone organique total (mg C/l) 1/6 mois < 30 3
Chlore résiduel (mg Cl/l) 1/semaine Non détectable(4) 0,01-0,1(4)
Chlorures (mg Cl/l) 1/6 mois < 230 20
Chrome (mg/l) 1/6 mois < 0,002 0,002
Cobalt (mg/l) 1/6 mois < 0,005 0,001
o
Conductivité (µhmos/cm à 25 C) 1/6 mois 100-400 10
Cuivre (mg/l) 1/6 mois < 0,002 0,001
Cyanures (mg CN/l) 1/6 mois < 0,005 0,003
Dureté (mg CaCO3/l) 1/6 mois 50-200 5
Fer (mg/l) 1/6 mois < 0,3 0,03
Fluorures (mg F/l) 1/6 mois <2 0,2
Mercure (mg/l) 1/6 mois < 0,0001 0,0001
Nickel (mg/l) 1/6 mois < 0,16 0,01
Nitrates (mg N/l) 1/6 mois < 40 4
Nitrites (mg N/l) 1/6 mois < 0,02 0,02
Phosphore total (mg P/l) 1/6 mois < 0,2 0,02
Plomb (mg/l) 1/6 mois < 0,003 0,001
Potassium (mg/l) 1/6 mois < 10 1
Sodium (mg/l) 1/6 mois < 25 0,1
Sulfates (mg SO4/l) 1/6 mois < 80 8
Zinc (mg/l) 1/6 mois < 0,005 0,001
(1) Critères de qualité pour la toxicité chronique ou concentration maximum généralement mesurée dans les eaux de surface
de l’est du Canada (MENV, 2001; CCME, 1999).
(2) La limite de détection de l'analyse doit permettre de quantifier au moins la concentration spécifiée.
(3) Le critère de toxicité pour l’azote ammoniacal varie beaucoup en fonction du pH et de la température. Les critères sont
spécifiques aux types d’essais et précisés plus loin. De façon générale, l’eau déchlorée devrait avoir une concentration
d’azote ammoniacal inférieure à 0,5 mg/l de N.
(4) Meilleure limite de détection disponible. L’ensemble de dosage de la compagnie Hach permet le dosage dans une plage de
basse concentration équivalente à 0–0,7 mg/l. Le manufacturier ne rapporte pas la limite de détection, mais elle se situerait
entre 0,01 et 0,1 mg/l.
Commentaires :
C NC
2.3 TOXIQUE DE RÉFÉRENCE

¾ REGISTRE DES TOXIQUES DE RÉFÉRENCE
Le registre des toxiques de référence doit contenir les informations suivantes :
• Concentration de la solution mère
• Date de préparation
Vérification de la stabilité des solutions, si applicable
•
• Initiales de l'analyste
Commentaires :
¾ VÉRIFICATION DE LA CONCENTRATION DES SOLUTIONS C NC
• Concentration des solutions mères vérifiée par analyse chimique
Commentaires :
C NC
2.4 AUTRES RÉACTIFS

¾ REGISTRE DES PRODUITS CHIMIQUES
Le registre des produits chimiques doit contenir les informations suivantes :
• Nom du fournisseur
• Nom du produit et numéro de lot
• Date de réception
• Date d'expiration
Commentaires :
C NC
¾ REGISTRE DE PRÉPARATION DES SOLUTIONS
Les renseignements suivants relatifs aux solutions préparées au laboratoire doivent figurer
sur le contenant de solution et dans un registre
• Identification du contenu
• Concentration de la solution
• Date de préparation
Commentaires :
3 ÉQUIPEMENTS C NC
• Vérification de l’application de la procédure
• Vérification de la disponibilité au laboratoire des manuels fournis par le fabricant
• Vérification ou étalonnage de l’équipement avant la mise en service (réception, répa-
ration ou prêt)
• Identification des équipements hors d’usage et de l’état d’étalonnage (lorsque requis)
• Processus d’identification de problème et enregistrement des actions correctives
• Formation du personnel pour l’utilisation de certains équipements (autoclave,
pH-mètre, balance, stérilisateur U-V) et autorisations
Commentaires :
C NC
3.1 INVENTAIRE DES ÉQUIPEMENTS

Le registre doit contenir les informations suivantes :
• Type d'équipement
• Numéro d'inventaire
• Modèle et numéro de série
• Nom du manufacturier
• Endroit où est placé l'équipement
• Date de la mise en service
• État à la réception (neuf, usagé, remis en état de fonctionnement)
Commentaires :
C NC
3.2 ENTRETIEN ET RÉPARATION
Tous les instruments et équipements nécessaires à l'exécution des analyses doivent être
entretenus correctement :
• Vérification des instructions et des registres d'entretien et de réparation de quelques
équipements
Commentaires :
C NC
3.3 OXYMÈTRE
Cet instrument doit être calibré à chaque journée d'utilisation selon la procédure qui
convient au type d'instrument utilisé. Les résultats doivent être inscrits dans un registre
approprié. Cet appareil doit être capable de détecter entre 0 et 100 % de saturation en
oxygène.
• Calibration à chaque jour d’utilisation
Commentaires :
C NC
3.4 pH-MÈTRE
• Vérification de l'instruction d'étalonnage et de l'enregistrement des résultats
• Vérification de la valeur de la pente
Commentaires :
C NC
3.5 CONDUCTIVIMÈTRE
• Vérification de l'étalonnage de l'appareil avec KCl et enregistrement des résultats
Commentaires :
C NC
3.6 BALANCES
• Vérification et enregistrement de l'étalonnage trimestriel. Les informations suivantes
doivent apparaître dans un registre : la date de calibration, le ou les poids de référence
utilisés, les résultats et les écarts par rapport aux valeurs de références
• Instruction d’étalonnage (poids de référence)
• Identification des balances (liste d’inventaire des balances) et état d’étalonnage
• Présence d’une balance avec une précision de 0,00001 g pour les essais d’inhibition
de la croissance avec le tête-de-boule
Commentaires :
C NC
3.7 THERMOMÈTRES
• Vérification et enregistrement annuels de l'étalonnage
• Instruction disponible
• Vérification aux températures d’utilisation
• Thermomètre de référence (graduation de 0,1 °C)
• Critères d’acceptabilité
• Enregistrement des thermomètres dans l’inventaire ou identification unique et liste des
thermomètres. État d’étalonnage (identification)
Commentaires :
C NC
3.8 LUXMÈTRE
• Cet appareil doit être capable de détecter l'intensité de la lumière ambiante dans la
gamme 0-200 µE/m2/sec. (0–10560 lux)
Commentaires :
C NC
3.9 RÉFRIGÉRATEUR
• Enregistrement de la température une fois par semaine (entre 1 et 4 °C)
• Vérification de la propreté
Commentaires :
C NC
3.10 ÉQUIPEMENT POUR LE TRAITEMENT ET LE CONDITIONNEMENT DE LA

TEMPÉRATURE DE L’EAU
• Équipement permettant de satisfaire aux exigences en toute saison
• Documentation du système de traitement d'eau
• Protocole précisant la nature et la fréquence de l’entretien
Commentaires :
C NC
3.11 AUTRES ÉQUIPEMENTS
¾ ÉTUVE (192)
• Séchage des larves à 100 ± 5 °C pour la détermination du poids sec
Commentaires :
C NC
¾ MICROBALANCE (192)
• Précision de 0,00001 g pour la détermination du poids sec des larves
Commentaires :
C NC
¾ INCUBATEUR OU ENCEINTE (193, 194)

• Température contrôlée de 24 ± 2 °C et intensité lumineuse de 4300 lux ± 10 %
(domaine 193) ou de 60 à 80 µE/m2/s (3170 à 4225 lux) (domaine 194) pour la
réalisation des essais avec les algues
Commentaires :
C NC
¾ CENTRIFUGEUSE
• Centrifugeuse de laboratoire (193, 194)
• Centrifugeuse à réglage de température munie d’un rotor à microplaque (194, si
applicable)
Commentaires :
C NC
¾ ÉQUIPEMENT DE FILTRATION (193, 194)
Commentaires :
C NC
¾ AGITATEUR ORBITAL (193)
• Agitation à 100 tours/minute
Commentaires :
C NC
¾ COMPTEUR DE PARTICULES (193, 194)
• Compteur de particules (coulter ou autre) permettant le dénombrement cellulaire dans

une classe de tailles de particules variant entre 2 et 10 µm ou le cas échéant, cuvette de
comptage Palmer-Maloney, Sedgwick-Rafter ou hémacymètre si le dénombrement
microscopique est utilisé
Commentaires :
C NC
¾ MICROSCOPE (193, 194)

• Grossissement d’au moins 40X, 100X et 400X ou l’équivalent (le microscope à
contraste de phase est recommandé pour le domaine 194)
Commentaires :
C NC
¾ THERMOSCELLEUSE (194)
Commentaires :
C NC
¾ MICROPIPETTE À MULTICANAUX (194)
• Micropipette à multicanaux de capacité de 10 à 100 µl et 100 à 1000 µl
Commentaires :
C NC
¾ PHOTOMÈTRE À MICROPLAQUE (194, SI APPLICABLE)
Commentaires :
C NC
¾ STÉRÉOMICROSCOPE À DISSECTION
Commentaires :
C NC
3.12 LAVAGE DE LA VERRERIE

• Instructions de lavage écrites et adéquates
Commentaires :
4.4 ORGANISMES VIVANTS C NC
4.4.1 Truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss)

• Acclimatation des poissons de 2 semaines avant les essais et pourcentage de morta-
lité < 2 % (dans les 7 jours précédant l’essai)
• Entretien des bassins
• pH de l’eau de détention doit être entre 6,5 et 8,5
¾ REGISTRE DE SUIVI
• Provenance et identification taxinomique
• Numéro de lot, longueur et poids à l'arrivée
• Nombre de truites mortes/jour
• Suivi du nombre de truites
• Suivi de la longueur et du poids
• Type, quantité et fréquence d'alimentation
• Calcul de la charge en g/l/j
• Comportements anormaux
• Observations visuelles pertinentes
• Débit/taux de renouvellement
Commentaires :
Suivi physico-chimique – Truite arc-en-ciel C NC
Paramètre Fréquence Critère de qualité

Température 1/jour 13-17 °C
Oxygène dissous 3/semaine > 80 % de saturation
Azote ammoniacal 1/semaine < 1,0 mg/N/l
Nitrites 1/semaine < 0,02 mg/N/l
Intensité lumineuse à la surface du bassin 1/2 semaines 100-500 lux
Commentaires :
4 MÉTHODES D’ANALYSE
LÉTALITÉ AVEC LA TRUITE ARC-EN-CIEL (EC et CEAEQ - éditions courantes)
Le laboratoire doit s'assurer de respecter les conditions d'essai spécifiées dans les protocoles analytiques et
dans les Lignes directrices concernant l’application des contrôles de la qualité en toxicologie (SCA-03).
L'ensemble des renseignements pertinents aux conditions d'essai doit être colligé de façon claire et précise.
SCA-03 Exigences C NC
4 Disponibilité de la méthode de l'édition courante
4 Application de la méthode de l’édition courante
PALAE 5.2.5 Formation technicienne attitrée ou technicien attitré
4 Connaissance de la méthode
4 Conformité document écrit versus application au laboratoire
4.2 Validation des méthodes
4.2.1 Identification des facteurs d’interférence
4.2.4 Répétabilité intralaboratoire
4.2.4 Reproductibilité interlaboratoires
4.6 Échantillonnage et conservation des échantillons
4.6 Délai de conservation échantillons 5 jours
4.5 Conditions d’essai
4.5 Individus de 0,3 à 2,5 g
4.5 Mortalité < 2 % dans 7 j précédant l’essai
4.5 Ne pas nourrir dans 16 h précédant l’essai
4.5 Poissons tous du même lot
4.5 Eau de dilution pré-aérée
4.5 Charge ≤ 0,5 g/l
4.5 Jeter sac polyéthylène après essai
4.5 Pré-aération min. 30 minutes (≥ 70 %) et max 120 minutes
4.5 Aucun ajustement pH
4.5 Mesures pH, O2 , temp. début et fin
4.5 Mesure conductivité au début
4.5 pH eau dilution 6,5 à 8,5
4.5 15 ± 1 °C pendant l’essai
4.5 Luminosité 100-500 lux à la surface, photopériode 16 h : 8 h
4.5 Débit aération 6,5 ± 1 ml/minute
4.5 ≤ 15 cm eau dans récipient d’essai
4.5 Min. 5 conc. + 1 témoin par essai
4.5 Min. 10 truites par conc.
4.5 Enlever morts chaque jour
4.7 Système informationnel
Commentaires :
6 ASSURANCE DE LA QUALITÉ C NC
6.1 ÉLÉMENTS DE CONTRÔLE DE LA QUALITÉ
6.1.1 Essais avec toxique de référence ou échantillon de référence
¾ Truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss)

• Minimum de 1/mois
• 1/10 analyses jusqu'à concurrence de 1/semaine au maximum si le laboratoire
effectue plus de 10 analyses par mois
• Un essai par série si le laboratoire effectue moins d’une analyse par mois
• 1/nouveau lot d'organismes
Commentaires :
C NC
6.1.2 Diagramme de contrôle
¾ Truite arc-en-ciel
Commentaires :
C NC
6.1.4 Critères d’acceptabilité
¾ Truite arc-en-ciel
• Pourcentage de mortalité dans le groupe contrôle inférieur ou égal à 10 %
• Pourcentage de comportement atypique inférieur ou égal à 10 % dans le groupe
contrôle
• Résultats de l’essai avec toxique de référence situés à l'intérieur des limites de ± 2s et
essai effectué à la fréquence requise
• Pourcentage de mortalité et état de santé des organismes avant l'essai conformes aux
critères établis
• Respect des conditions d'essai
Commentaires :
4.4.2 Daphnie (Daphnia magna)

• Méthode d’élevage documentée
¾ Registre de suivi
• Confirmation de l’identification taxinomique
• Provenance de la souche et date de mise en élevage
• Type, quantité et fréquence d'alimentation
• Présence d'éphippiums
• Mortalité chez les daphnies adultes
• Fréquence des renouvellements d'eau
• Productivité des élevages
• Observations visuelles pertinentes
Commentaires :
Suivi physico-chimique – Daphnie C NC

Oxygène dissous 2/semaine > 80 % de saturation
Dureté 1/semaine 160-180 mg CaCO3/l
Intensité lumineuse – surface des aquariums 1/2 semaines 500-1100 lux
Commentaires :
4. MÉTHODES D’ANALYSE
LÉTALITÉ AVEC LA DAPHNIE (EC et CEAEQ - éditions courantes)
Traçabilité des néonates utilisées (EC)
Procédure de sélection des néonates
Mesure dureté si conductivité ≤ 100 mhos/cm (EC)
Pré-aération 30 minutes max. si O2 ≤ 40 % saturation sinon aucune pré-
aération
Charge = 1 daphnie/15 ml (EC)
Dureté ≥ 25 mg/l ou ≥ 50 mg/l
Aucun ajustement de pH
Eau de dilution 90-100 % saturation en oxygène
Récipients ouverts ou couvercle non hermétique
Un témoin par essai minimum
Min. 5 conc + 1 témoin
Codification récipients essai + ordre aléatoire
Min. 10 néonates/conc.
Min. 30 daphnies/conc pour essai à conc unique et 3 réplicats (EC)
Groupement des données des 3 réplicats (EC)
Mesures pH, O2 et temp. début et fin
Mesures dureté dans témoin et 100 % immédiatement avant le début de l’essai
(EC)
Détermination de la mortalité au binoculaire
Indication de toutes exigences non respectées
Commentaires :
¾ Daphnie (Daphnia magna)

effectue plus de 10 analyses par 2 semaines
• Un essai par série si le laboratoire effectue moins d’une analyse par 2 semaines
Commentaires :
C NC
¾ Daphnie (Daphnia magna)

Commentaires :
C NC
¾ Daphnie
contrôle
• Résultats de l’essai avec toxique de référence situés à l’intérieur des limites de ± 2s
et essai effectué à la fréquence requise
• Pourcentage de mortalité et état de santé des organismes avant l’essai conformes aux
critères établis
• Respect des conditions d’essai
Commentaires :
4.4.3 Tête-de-boule (Pimephales promelas)

• Méthode d’élevage documentée (si applicable)
¾ Registre de suivi si approvisionnement externe
• Date d’achat
• Fournisseur
• État du matériel biologique à la réception (pourcentage de mortalité)
• Température de l’eau à la réception
• Température et conditions physico-chimiques de l’élevage source
• Nombre d’œufs ou de larves
Commentaires :
C NC
¾ Registre de suivi pour l’élevage

• Identification taxinomique
• Provenance
• Taux de renouvellement de l’eau
• Type d’alimentation, quantité et fréquence
• Âge des reproducteurs à la première ponte
• Nombre moyen d’œufs par ponte
• Mortalité chez les individus juvéniles et adultes
• Taux d’éclosion des œufs (moyenne)
• Présence de maladie ou d’infection
• Densité de chargement dans les aquariums
Commentaires :
Suivi physico-chimique de l’eau d’élevage – Tête-de-boule C NC

Oxygène dissous 3/semaine ≥ 80 % de saturation
Azote ammoniacal 1/semaine < 0,5 mg N/l
Nitrites 1/semaine < 0,02 mg N/l
Intensité lumineuse - surface des aquariums 1/2 semaines 400-500 lux
Commentaires :
SURVIE ET CROISSANCE AVEC LE TÊTE-DE-BOULE (EC édition courante)
4.2.3 Détermination du seuil d’effet de la méthode
Larves < 24 h; idéalement 7-24 h
Répartition aléatoire des larves de plusieurs fraies
Échantillonnage unique – 3 sous-échantillons
Pas de pré-aération sauf si O2 ≤ 40 %; 20 minutes max.
25 ± 1 °C (23–27 °C max.)
Max. 500 lux à la surface
Volume d’essai 250 ml min. (500 recommandé)
Min. 3 cm d’eau
Technique de renouvellement du milieu
Eau de contrôle et de dilution 25 ± 1°C; ≥ 90 % O2
Méthode de lavage des récipients
Min. 5 conc + 1 témoin (recommandé 7)
10 larves/contenants et 3 réplicats = 30 larves/conc
3 rép si CI25 et 4 rép si CSEO
Alimentation 2 ou 3 fois /j (1500 à 2500 nauplii/j)
Répartition aléatoire des récipients
Mesures temp début/fin chaque 24 h
Séchage larves 100 °C – 6 h ou 60 °C – 24 h et au dessicateur
Graphique CIp recommandé
Commentaires :
¾ Tête-de-boule (Pimephales promelas), inhibition de la croissance

• 1/5 analyses jusqu'à concurrence de 2/mois si le laboratoire effectue plus de
10 analyses par mois
Commentaires :
C NC

Commentaires :
C NC

• Poids sec moyen dans les contrôles égal ou supérieur à 250 µg/larve
contrôle
• Résultats de l’essai avec toxique de référence situés à l'intérieur des limites de ± 2s et
essai effectué à la fréquence requise
• Pourcentage de mortalité < 5 % pour l’élevage dans la semaine précédant l’essai
Commentaires :
LÉTALITÉ AVEC LE TÊTE-DE-BOULE (USEPA - édition courante)
1-14 jours
Alimentation à 48 h 0,2 ml Artemia
Essai 96 h avec renouvellement 48 h
25 ± 1 °C
Luminosité idem à élevage
Volume d’essai min 200 ml
Renouvellement 80 % à 48 h
Nb. poissons/récipient = 10
Nb. min. poissons/conc. = 20
Réplicats 2 minimum
Aération si O2 < 40 % saturation
Min. 5 conc. + 1 témoin
Commentaires :
¾ Tête-de-boule (Pimephales promelas), létalité

effectue plus de 10 analyses par mois
• 1/nouveau lot d’organismes
Commentaires :
C NC

Commentaires :
C NC

contrôle
• Résultats de l’essai avec toxique de référence situés à l'intérieur des limites de ± 2s
• Pourcentage de mortalité < 5 % pour l’élevage dans la semaine précédant l’essai
Commentaires :
4.4.4 Algue verte (Selenastrum capricornutum)

• Méthode de culture documentée
¾ Registre de suivi
• Observation microscopique de la souche mère (1/mois)
• Vérification de la méthode de conservation de la souche mère
• Fréquence du repiquage
• Courbe de croissance de la population
Commentaires :
INHIBITION DE LA CROISSANCE AVEC L’ALGUE SELENASTRUM (EC – édition courante)
4.2.3 Seuil d’effet
Culture de départ sur gélose et transférer aseptiquement pour former une
culture mère
Densité culture mère de 2 à 3 X 106 après 7-14 j
Renouvellement hebdomadaire de la culture mère
Vérification de la contamination sur Pétri
Repiquage culture mère sur milieu solide
Redémarrage culture mère aux 2 mois
Performance culture 8-10 j; min. 2 fois/an
Filtration sur 0,45 µm/milieu enrichissement
Durée de l’essai = 72 h
24 ± 2 °C
4300 lux ± 10 %
Microplaque 96 cupules fond rond ou en U
Volatilité; microplaque individuelle ou scellage avec polyéthylène
Eau qualité de type réactif filtrée sur 0,45 µm
Inoculum 10000 cell/ml de culture 4-7 j
3 réplicats
Évaporation max 10 % (microplaque CQ)
Milieu enrichissement (13,75 X) stériliser par filtration
Centrifugation inoculum à 2000 g, 15 min, remise en suspension dans
NaHCO3 et compte au Coulter
Préparation de la microplaque – dilution
Mesure du pH début et fin; changement pH < 1,5
Microplaque CQ; changement pH < 1,5
Méthode de mesure de la densité cellulaire (compteur cellule 70 µm)
Démo équivalence si absorbance ou fluorescence pour min. 3 puits X
3 concentration par compte cellulaire
Analyse des résultats par essai de tendance Mann-Kendall pour D2-D5 et D8-
D11 (vérification de la contamination par des composés volatils)
Comparer densité cellulaire du témoin avec le témoin des autres essais
Commentaires :
¾ Algue verte (Selenastrum capricornutum), inhibition de la croissance – Env.

Canada)
• 1/10 analyses jusqu'à concurrence de 1/semaine si le laboratoire effectue plus de
10 analyses par 2 semaines
Commentaires :
C NC

Canada)
Commentaires :
C NC

Canada)
• Croissance des algues dans les témoins normalisés ne doit pas être significativement
différente (α = 0,05) de celle des algues dans la microplaque de contrôle de qualité
• Nombre de cellules algales dans les répétitions de témoins normalisés doit s’être
accru de plus de 16 fois en 72 heures
• pH des témoins ne doit pas varier à plus de 1,5 unité
• Coefficient de variation entre les répétitions de témoins normalisés doit être
acceptable (< 20 %)
et essai effectué à la fréquence requise. Tous les résultats situés à l’extérieur des
limites de ± 3s doivent être rejetés. Si le résultat se situe entre les limites de ± 2s et
± 3s, il peut être acceptable selon le cas, s'il est démontré qu’il ne s’inscrit pas à
l’intérieur d’une tendance hors contrôle
• Dans le cas où la CSEO et la CMEO sont calculées, les résultats sont acceptables
seulement si l’écart entre ces deux paramètres de mesure est limité par l’usage d’une
gamme de dilutions suffisamment serrée pour obtenir une bonne progression des
réponses d’inhibition dans la zone de la relation concentration/réponse située entre 0
et 50 % d’effet
• Respect des conditions d'essai (température, éclairement, etc.)
Commentaires :
INHIBITION DE LA CROISSANCE AVEC L’ALGUE Selenastrum (CEAEQ - édition courante)
PALAE 5.2.5 Formation technicienne attitrée ou d’un technicien attitré
Délai de conservation échantillons 3 jours
Confirmation taxinomique
Préparation solution mère milieu de culture
Concentrations finales milieu de culture
Présence/absence EDTA
Stérilisation milieu de culture
Culture de départ sur gélose et transférer aseptiquement pour former une
culture mère
Densité culture mère de 2 à 3 X 106 après 7-14 j
Renouvellement hebdomadaire de la culture mère
Vérification de la contamination sur Pétri
Repiquage culture mère sur milieu solide
Redémarrage culture mère aux 2 mois
Performance culture 8-10 j; min 2 fois/an
Filtration sur 0,45 µm
Milieu enrichissement – 10 ml/L
Durée de l’essai = 96 h
24 ± 2 °C
4300 lux ± 10 % continu
Inoculum 4-7 j – 10000 cell/ml
Volume solution = 10 ml
Milieu sans EDTA
3 réplicats
Nb. conc. (5-10)
Facteur dilution (0,5 à 0,8)
Agitation pendant l’essai - ≈ 100 rpm
Mesure densité cellulaire
Suivi temp. et pH – début/fin
Calcul CI15 et CI25
Calcul CSEO-CMEO
6.1.3 Groupes contrôles
Commentaires :
¾ Algue verte (Selenastrum capricornutum), inhibition de la croissance – CEAEQ

• 1/10 analyses jusqu'à concurrence de 1/semaine si le laboratoire effectue plus de 10
analyses par 2 semaines
Commentaires :
C NC

Commentaires :
C NC

• Densité cellulaire dans les cuvettes des contrôles à la fin de l’essai entre les limites
de ± 2s de la moyenne « historique » des densités cellulaires des contrôles*. La
densité cellulaire moyenne des contrôles devrait se situer approximativement à
2,5 X 106 cell./ml
• La variation entre les replicats est inférieure ou égale à 20 % dans le groupe contrôle
et essai effectué à la fréquence requise. Tous les résultats situés à l’extérieur des
limites de ± 3s doivent être rejetés. Si le résultat se situe entre les limites de ± 2s et
± 3s, il peut être acceptable selon le cas, s'il est démontré qu’il ne s’inscrit pas à
l’intérieur d’une tendance hors contrôle
• Respect des conditions d'essai (température, éclairement, etc.)
* Les limites de ± 2s et ± 3s sont établies à partir de la moyenne « historique » des densités
cellulaires des groupes contrôles sur une période suffisamment prolongée pour que la valeur
soit représentative des différentes conditions d’application de la méthode à l’intérieur d’un
même laboratoire
Commentaires :
4.4.5 Cériodaphnie (Ceriodaphnia dubia)

• Méthode d’élevage documentée
¾ Registre de suivi pour l’élevage
• Provenance des organismes
• Densité d’organismes par contenant d’élevage
• Fréquence des renouvellements d’eau
• Type d’alimentation, quantité et fréquence
• Nombre moyen de néonates par ponte
• Pourcentage de mortalité chez les femelles
• Présence d’éphippies
Commentaires :
Suivi physico-chimique de l’élevage – Cériodaphnie C NC

Température 1/jour 25 ± 1 °C
Oxygène dissous* 2/semaine 90-100 % de saturation
pH* 2/semaine 6,5-8,5
Intensité lumineuse – surface des 1/2 semaines 500-600 lux
contenants
• Le chlore doit également être contrôlé par un traitement adéquat de l’eau (filtration
sur charbon activé et/ou aération vigoureuse)
* Les vérifications d’oxygène dissous et de pH peuvent être faites au moment des renou-
vellements d’eau et occasionnellement dans les contenants d’élevage
Commentaires :
SURVIE ET REPRODUCTION AVEC LA CÉRIODAPHNIE (EC – édition courante)
Pas de pré-aération sauf si O2 ≤ 40 %; 20 minutes max.
25 ± 1 °C
Durée 8 j ou moins; 3 portées
100-600 lux à la surface
Récipient d’essai; bécher 30 ml couvert
Volume essai : min. 15 ml
1 cériodaphnie/ contenant de 15 ml
10 cériodaphnies par concentration
Technique de renouvellement du milieu au 24 h
Eau contrôle et dilution 25 ± 1 °C; ≥ 90 % O2
Min 5 conc. + 1 témoin (recommandé 7)
Alimentation tous les jours 0,1 ml YCT + 0,1 ml suspension algues
Mesures Temp., pH, O2 début-fin 24 h; cond. début 24 h
Graphique CIp recommandé
Commentaires :
¾ Cériodaphnie (Ceriodaphnia dubia), inhibition de la reproduction

• 1/5 analyses jusqu'à concurrence de 2/mois si le laboratoire effectue plus de 10 ana-
lyses par mois
Commentaires :
C NC

Commentaires :
C NC

• Pourcentage de mortalité des génitrices dans l’élevage inférieur à 20 %
• Les génitrices doivent avoir produit au moins 15 jeunes en moyenne au cours de la
semaine précédant l’essai et la dernière couvée doit compter au moins 6 individus
• Pas d’éphippies dans l’élevage
• Taux de mortalité inférieur ou égal à 20 % chez les femelles des groupes témoins
• Minimum de 15 jeunes survivants à la fin de l’essai dans les témoins
• Au 9e jour, minimum de 60 % des adultes de première génération doit avoir produit
un minimum de 3 couvées
Commentaires :
5 TRAÇABILITÉ DE L’INFORMATION (4.12, 5.8 et 5.10) C NC

• Vérification de l’application des procédures ou instructions
• Enregistrement des observations, données et calculs au moment où ils sont effectués
et qu’ils peuvent être reliés à l’opération concernée
• Modification des enregistrements originaux de façon à ne pas rendre illisible
l’original, valeur correcte inscrite à côté et initiales pour autorisation des change-
ments
• Calculs et transferts de données vérifiés de façon systématique
Commentaires :
C NC
5.1 REGISTRE D’ENTRÉE DES ÉCHANTILLONS

• Numéro de projet (le cas échéant)
• Identification de l'échantillon
• Numéro de laboratoire
• Identification du demandeur
• Nombre de contenants et volume des échantillons
• Paramètres demandés
• Commentaires appropriés
Commentaires :
C NC
5.2 FORMULAIRE DE DEMANDE D’ANALYSE

• Date du prélèvement
• Identification de l'échantillon
• Identification du point de prélèvement
• Identification du préleveur et adresse
• Identification du demandeur
• Nature de l'échantillon
• Paramètres demandés
• Mode de conservation
Commentaires :
C NC
5.3 FEUILLE DE TRAVAIL
¾ Truite arc-en-ciel, Létalité CL50 96 h

• Date d’analyse
• Température, pH, oxygène dissous et conductivité de l'échantillon avant le début de
l'essai
• Traitement de l’échantillon
• Lot et âge des poissons
• Longueur à la fourche et poids frais moyen
• Densité de chargement
• Série de dilutions (% V/V)
• pH et oxygène dissous à 0 et 96 heures dans le contrôle et toutes les concentrations
• Mortalité à 24, 48, 72 et 96 heures
• Résultats exprimés en pourcentage de mortalité dans chacune des concentrations et
le contrôle
• Imprimé des calculs de CL50 produit à l'aide d'un programme informatique, le cas
échéant
Commentaires :
C NC
¾ Daphnie, létalité CL50 48 h

• Date d'analyse
• Lot d'organismes
• Température, pH, oxygène dissous, conductivité et dureté de l'échantillon avant le
début de l'essai
• Traitement de l'échantillon
• pH et oxygène dissous au début et à la fin de l’essai dans le contrôle et dans chaque
solution d'essai
• Température dans quelques solutions d'essai au début et à la fin de l'essai
• Résultats exprimés en pourcentage de mortalité et d'immobilité pour chacune des
concentrations et pour le contrôle
• Imprimé des calculs de CL50 produit à l'aide d'un programme informatique, le cas
échéant
Commentaires :
C NC
¾ Tête-de-boule, létalité CL50 96 h

• Date d'analyse
• Température, pH, oxygène dissous, conductivité et apparence de l'échantillon avant
le début de l'essai
• Lot et âge des poissons
• Alimentation en cours d’essai (type, quantité, etc.)
• pH et oxygène dissous à 0, 48 et 96 heures dans le contrôle et toutes les concen-
trations
• Température dans le témoin et dans trois concentrations d’essai au début et à la fin
de l'essai
• Mortalité à 24, 48, 72 et 96 heures
• Résultats exprimés en pourcentage de mortalité dans chacune des concentrations et
pour le contrôle
• Imprimé des calculs des paramètres de mesure produit à l'aide d'un programme
informatique
Commentaires :
C NC
¾ Tête-de-boule, inhibition de la croissance CI25 7 j et CL50 7 j

• Date d'analyse
• Température, pH, oxygène dissous, conductivité, dureté et apparence des échantil-
lons originaux avant le début de l'essai
• Nombre d’échantillons utilisés si plus d’un prélèvement ou nombre de sous-
échantillons si un seul prélèvement
• Lot et âge des larves
• Alimentation en cours d’essai (type, quantité, fréquence)
• pH, oxygène dissous et température au début et à la fin de chaque période de 24 h
pour le témoin et pour trois concentrations
• Conductivité au début de chaque période de 24 h dans le témoin et dans trois
concentrations
• Renouvellement des solutions d’essai (fréquence et pourcentage)
• Nombre de larves par contenant et mortalité à chaque jour
• Poids sec moyen après 7 jours pour chacun des replicats de chaque traitement
• Résultats exprimés en pourcentage d’inhibition de la croissance et pourcentage de
mortalité dans chacune des concentrations et le contrôle
• Initiales de l’analyste
informatique
Commentaires :
C NC
¾ Algue verte Selenastrum (MENV), inhibition de la croissance CI15 96h et CI50 96 h

• Date d'analyse
• Température, pH, oxygène dissous, conductivité et apparence de l'échantillon avant
le début de l'essai
• Âge de la culture
• Compte cellulaire de la culture
• Compte cellulaire de l’inoculum
• Compte de l’isoton au début et à la fin
• Température dans l’incubateur au début et à la fin
• pH au début et à la fin de l’essai dans le contrôle et dans quelques concentrations
• Compte cellulaire après 96 heures dans chaque concentration et le contrôle
informatique
Commentaires :
C NC
¾ Algue verte Selenastrum (Env. Canada), inhibition de la croissance CI25 72 h et CI50

72 h
• Date d'analyse
• Température, pH, oxygène dissous, conductivité et apparence (couleur, turbidité,
etc.) de l'échantillon avant le début de l'essai
• Âge de la culture
• Compte cellulaire de la culture
• Compte cellulaire de l’inoculum
• Compte de l’isoton au début et à la fin
• Type et nombre de microplaques utilisées et configuration
• Usage de pellicule d’étanchéité
• Scellage des microplaques individuelles
• Estimation des pertes par évaporation
• Température dans l’incubateur au début et à la fin
• Compte cellulaire (ou absorbance) après 72 heures dans chaque concentration et le
témoin normalisé ainsi que dans la microplaque de contrôle de qualité
informatique
Commentaires :
C NC
¾ Cériodaphnie, inhibition de la reproduction CI25 7 j et CL50 7 j – CSEO-CMEO

• Date d'analyse
• Température, pH, oxygène dissous, conductivité, dureté et apparence de
l'échantillon avant le début de l'essai
• Nombre d’échantillons utilisés
• Lot et âge des cériodaphnies
• Alimentation en cours d’essai (type, quantité, fréquence)
• Température, pH et oxygène dissous au début et à la fin de chaque période de 24 h
dans le témoin et dans trois concentrations
• Conductivité au début de chaque période de 24 h dans le témoin et dans trois
concentrations
• Renouvellement des solutions d’essai (fréquence et pourcentage)
• Nombre de cériodaphnies de première génération vivante tous les jours
• Nombre de néonates vivantes tous les jours
• Résultats exprimés en pourcentage d’inhibition de la croissance et pourcentage de
mortalité dans chaque concentration et le contrôle
informatique
Commentaires :
C NC
5.4 CERTIFICAT D’ANALYSE
Section « en-tête »
• Un titre
• Le nom et l'adresse du laboratoire
• Un numéro de dossier et un numéro de laboratoire
• Le nom et l’adresse du client
• Le nom du projet
• Les dates de prélèvement, de réception et d'analyse
• Le nom du préleveur
• L'endroit du prélèvement
• Le mode de conservation
• La méthode d'échantillonnage
• L'identification de l'échantillon
• La nature de l'échantillon
• L’apparence de l’échantillon
• La signature du superviseur du laboratoire et la date d’émission du rapport
• La numérotation de chacune des pages et le nombre total de pages
• Un avertissement selon lequel le certificat ne doit pas être reproduit, sinon en entier,
sans l’autorisation écrite du laboratoire
• Toute divergence, ajout ou suppression par rapport à la méthode d’analyse utilisée
• Un tableau contenant la gamme de dilution et le pourcentage d’effet de chacune des
mesures biologiques à chacune des concentrations
Section « caractéristique de l’échantillon »
• Caractéristiques physico-chimiques de l’échantillon avant le début de l’essai (ex. :
pH, oxygène dissous, etc.)
Section « résultat »
• Résultats du ou des paramètres d’effets pertinents à un essai donné exprimé dans
l’unité approprié
• Intervalle de confiance à 95 % du résultat si celui-ci est calculable
• L'équivalent du résultat exprimé en unité toxique pour les échantillons liquides
complexes
Section « conditions d’essai »
• Le type d'essai
• Le traitement de l’échantillon (s’il y a lieu)
• L'espèce utilisée et sa provenance
• L'état des organismes (âge, taille, etc.), selon la méthode
• Le nombre d’organismes par concentration, le nombre de replica
• L'environnement d'essai
• Les principales conditions d'essai (valeurs physico-chimiques minimales et maxi-
males, alimentation s’il y a lieu, eau de dilution, etc.)
• Le toxique de référence ou l’échantillon de référence utilisé
• Le résultat le plus récent de contrôle de la qualité
• La moyenne et les limites de ± 2s du diagramme de contrôle
• La méthode de calcul utilisée si le résultat est calculable
• La référence de la méthode utilisée
Commentaires :
5.4 TRANSCRIPTION ET SUIVI DES DONNÉES POUR LES ÉCHANTILLONS
Critères N° 1 N° 2 N° 3 N° 4 N° 5
C NC C NC C NC C NC C NC
N° échantillon
Nom du client
Date de
prélèvement
Date de
réception
Date
d’analyse
Paramètres
demandés
Feuille
de travail
Imprimé
informatique
Groupe
contrôle
Toxique de
référence
Rapport
Commentaires :
5.4 TRANSCRIPTION ET SUIVI DES DONNÉES POUR LES ÉCHANTILLONS
Critères N° 1 N° 2 N° 3 N° 4 N° 5
C NC C NC C NC C NC C NC
N° échantillon
Nom du client
Date de
prélèvement
Date de
réception
Date
d’analyse
Paramètres
demandés
Feuille
de travail
Imprimé
informatique
Groupe
contrôle
Toxique de
référence
Rapport
Commentaires :
PRÉPARATION DE LA RÉUNION DE CLÔTURE

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• Manipulation des échantillons

1.4 CONDITIONS AMBIANTES

2.1 EAU DÉMINÉRALISÉE

2.2 EAU POUR LA DÉTENTION, L’ÉLEVAGE, LA CULTURE ET LES ESSAIS DE TOXICITÉ

2.3 TOXIQUE DE RÉFÉRENCE

2.4 AUTRES RÉACTIFS

3.1 INVENTAIRE DES ÉQUIPEMENTS

3.10 ÉQUIPEMENT POUR LE TRAITEMENT ET LE CONDITIONNEMENT DE LA

3.11 AUTRES ÉQUIPEMENTS

¾ INCUBATEUR OU ENCEINTE (193, 194)

• Agitation à 100 tours/minute

• Compteur de particules (coulter ou autre) permettant le dénombrement cellulaire dans

¾ MICROSCOPE (193, 194)

• Micropipette à multicanaux de capacité de 10 à 100 µl et 100 à 1000 µl

3.12 LAVAGE DE LA VERRERIE

4.4.1 Truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss)

Suivi physico-chimique – Truite arc-en-ciel C NC

Paramètre Fréquence Critère de qualité

6.1 ÉLÉMENTS DE CONTRÔLE DE LA QUALITÉ

6.1.1 Essais avec toxique de référence ou échantillon de référence

¾ Truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss)

6.1.2 Diagramme de contrôle

6.1.4 Critères d’acceptabilité

4.4 ORGANISMES VIVANTS C NC

4.4.2 Daphnie (Daphnia magna)

Paramètre Fréquence Critère de qualité

6.1 ÉLÉMENTS DE CONTRÔLE DE LA QUALITÉ

6.1.1 Essais avec toxique de référence ou échantillon de référence

¾ Daphnie (Daphnia magna)

6.1.3 Diagramme de contrôle

¾ Daphnie (Daphnia magna)

6.1.4 Critères d’acceptabilité

4.4 ORGANISMES VIVANTS C NC

4.4.3 Tête-de-boule (Pimephales promelas)

¾ Registre de suivi pour l’élevage

Suivi physico-chimique de l’eau d’élevage – Tête-de-boule C NC

Paramètre Fréquence Critère de qualité

6.1 ÉLÉMENTS DE CONTRÔLE DE LA QUALITÉ

6.1.1 Essais avec toxique de référence ou échantillon de référence

¾ Tête-de-boule (Pimephales promelas), inhibition de la croissance

6.1.3 Diagramme de contrôle

¾ Tête-de-boule (Pimephales promelas), inhibition de la croissance

6.1.4 Critères d’acceptabilité

¾ Tête-de-boule (Pimephales promelas), inhibition de la croissance

6.1 ÉLÉMENTS DE CONTRÔLE DE LA QUALITÉ

6.1.1 Essais avec toxique de référence ou échantillon de référence

¾ Tête-de-boule (Pimephales promelas), létalité

6.1.4 Diagramme de contrôle

¾ Tête-de-boule (Pimephales promelas), létalité

6.1.4 Critères d’acceptabilité

¾ Tête-de-boule (Pimephales promelas), létalité

4.4.4 Algue verte (Selenastrum capricornutum)

6.1 ÉLÉMENTS DE CONTRÔLE DE LA QUALITÉ

6.1.1 Essais avec toxique de référence ou échantillon de référence

¾ Algue verte (Selenastrum capricornutum), inhibition de la croissance – Env.

6.1.5 Diagramme de contrôle

¾ Algue verte (Selenastrum capricornutum), inhibition de la croissance – Env.

6.1.4 Critères d’acceptabilité

¾ Algue verte (Selenastrum capricornutum), inhibition de la croissance – Env.

6.1 ÉLÉMENTS DE CONTRÔLE DE LA QUALITÉ

6.1.1 Essais avec toxique de référence ou échantillon de référence

¾ Algue verte (Selenastrum capricornutum), inhibition de la croissance – CEAEQ

6.1.7 Diagramme de contrôle

¾ Algue verte (Selenastrum capricornutum), inhibition de la croissance – CEAEQ