Chimie Analytique

METHODES DE SEPARATION
Techniques de séparation des
mélanges hétérogènes et homogènes
 Objectifs
• Connaître les principales techniques de
séparation

• Décrire les procédés employés et leur utilité

• Connaître les outils utilisés dans ces

techniques

• Applications de ces techniques

2 TECHNIQUES DE SEPARATION
1.Séparation des constituants d’un mélange hétérogène
1.1. Décantation
1.2. Filtration
1.3. Centrifugation

2.Séparation des constituants d’un mélange homogène

2.1. Evaporation
2.2. Distillation
2.3. Chromatographie
2.4. Electrophorèse
2.5. Recristallisation

3 TECHNIQUES DE SEPARATION
1. Séparation des constituants d’un mélange hétérogène

= mélange hétérogène : C'est un mélange dont les

constituants peuvent être distingués à l'œil nu même après
agitation.

Exemples de mélanges hétérogènes :

L'eau et l'huile,
l'eau et le pétrole,
l'eau et la terre,
l'eau et la farine.
4 TECHNIQUES DE SEPARATION
1. Séparation des constituants d’un mélange hétérogène
1.1. Décantation
C’est un processus qui permet de séparer des liquides non miscibles qui n’ont
pas la même masse volumique (densité).

Dans les laboratoires on utilise couramment ce procédé lors des extractions

liquide-liquide impliquant une phase aqueuse et une phase organique.
Principe : L'extraction repose sur la différence d'affinité d'un soluté (A)
entre deux phases liquides non-miscibles

Exemple : mélange d’eau et d’huile.

L’huile flotte sur l’eau, car l’huile a
une masse volumique plus faible que
l’eau.

5 TECHNIQUES DE SEPARATION
Protocole d'extraction :

6 TECHNIQUES DE SEPARATION
1. Séparation des constituants d’un mélange hétérogène
1.2. Filtration
C’est une technique qui permet de séparer les constituants d’un mélange
lorsqu’un des constituants est sous la phase liquide et l’autre, sous la phase
solide.

Pour ce faire, on utilise un filtre. Ce

filtre permet de retenir les particules
solides.
Le liquide qui passe au travers du
filtre est appelé filtrat et le solide que
l’on recueille dans le filtre est appelé
résidu. Cette technique peut être
utilisée pour séparer de l’eau et un
composé comme du CaCO3 (poudre
blanche).

7 TECHNIQUES DE SEPARATION
1.Séparation des constituants d’un mélange hétérogène
1.3. Centrifugation

Technique de séparation qui, par l’action de la force centrifuge, permet de

séparer de deux à trois phases. Le mélange est entraîné dans un mouvement
de rotation très rapide.
Les particules solides les plus lourdes sont alors poussées vers les parois du
récipient, alors que les particules plus légères et les liquides restent en
surface

L’appareil qui sert à réaliser une centrifugation est appelé

centrifugeuse.

Exemple : séparation des globules rouges du

plasma sanguin.

8 TECHNIQUES DE SEPARATION
2.Séparation des constituants d’un mélange homogène
2.1. Evaporation
C’est un processus par lequel on élimine la partie liquide d'un mélange en le
transformant en gaz.
le constituant liquide du mélange s'évaporer naturellement à température
ambiante, ou on peut accélérer le processus en chauffant le mélange.

L'évaporation sert à :
Récupérer la partie solide d'un mélange hétérogène,
Récupérer le soluté solide d'une solution homogène,

9 TECHNIQUES DE SEPARATION
2.Séparation des constituants d’un mélange homogène
2.2. Distillation
= procédé de séparation de mélange liquides dont les températures
d'ébullition sont différentes. Sous l'effet de la chaleur ou d'une faible
pression, les substances se vaporisent successivement, et la vapeur obtenue
est liquéfiée pour donner le distillat.

Les applications usuelles de la distillation sont :

• l’élimination d’un produit en cours de réaction chimique ou d’un solvant,
• l’isolation d’un composé naturel ou de plusieurs composés, obtenus après une réaction
chimique,
• la purification d’un composé.

Il existe plusieurs techniques pour la distillation

Distillation simple
Distillation fractionnée
Hydrodistillation ou Entraînement à la vapeur
Distillation sous pression réduite
10 TECHNIQUES DE SEPARATION
2. Séparation des constituants d’un mélange homogène
2.2. Distillation
Courbe de distillation

L’évolution de la température en tête de colonne

11 TECHNIQUES DE SEPARATION
2. Séparation des constituants d’un mélange homogène
2.2. Distillation
Distillation simple
= Au cours du chauffage, seul le solvant s'évapore : en refroidissant les
vapeurs on recueille le solvant pur.

Matériel :

ballon réfrigérant à eau ;

chauffe-ballon ;
thermomètre ;
erlenmeyer pour le distillat ;
support élévateur.

La distillation simple est utilisée uniquement pour séparer des liquides dont
les points d’ébullition diffèrent significativement (d’au moins 25°C)

12 TECHNIQUES DE SEPARATION
2. Séparation des constituants d’un mélange homogène
2.2. Distillation
Distillation fractionnée
= La solution à distiller est un mélange de liquides dont les températures
d'ébullition sont trop proches l’un de l’autre

Matériel :

ballon réfrigérant à eau ;

chauffe-ballon ;
thermomètre ;
colonne à distiller (colonne de Vigreux) ;
erlenmeyer pour le distillat ;
support élévateur.

13 TECHNIQUES DE SEPARATION
2. Séparation des constituants d’un mélange homogène
2.2. Distillation
Distillation fractionnée
Notion de plateau théorique

Lorsque les vapeurs montent dans la colonne de séparation,

elles se refroidissent et se condensent sur la surface interne de
la colonne. Ce liquide est ensuite chauffé t par les autres
vapeurs montantes jusqu'à être vaporisé à nouveau. Toutefois, la
composition de ces nouvelles vapeurs n'est pas la même que
celle des vapeurs initiales: elles sont plus concentrées en
composant le plus volatil.
Chaque cycle de vaporisation-condensation est appelé un
plateau théorique.
La colonne est caractériser par son nombre de plateaux
théoriques : plus celui-ci est élevé, plus la colonne sera capable
de séparer le mélange avec efficacité.
On augmente le nombre de plateaux théoriques en allongeant la
colonne, en modifiant sa surface interne grâce à différents types
de garnissages.

14 TECHNIQUES DE SEPARATION
2. Séparation des constituants d’un mélange homogène
2.2. Distillation
Hydrodistillation ou Entraînement à la vapeur
= L’hydrodistillation, aussi appelée entraînement à la vapeur, est une méthode
servant à distiller des composés sensibles à la chaleur. Ce procédé implique
l’utilisation de vapeur surchauffée qui sera injectée dans le liquide brut.

15 TECHNIQUES DE SEPARATION
2. Séparation des constituants d’un mélange homogène
2.3. Chromatographie
Généralités

Méthode de séparation des constituants d’un mélange.

Applications: Identification, dosage (quantification), purification.

Quelques noms et dates :

- 1903 : mise en évidence par Mikhail TSWETT, botaniste russe
- 1931 (KUHN et LEDERER) : chromatographie sur colonne (chromatographie
liquide-solide)
- 1938 (IZMAILOV et SCRAIBER) : chromatographie sur couche mince, TAYLOR
et UREY : chromatographie par échange d’ions
- 1941 (MARTIN et SYNGE, Nobel en 1952) : concept de chromatographie gaz-
liquide,
chromatographie de partage liquide-liquide
- 1952 : développement pratique de la chromatographie gaz-liquide
- 1955 : 1er chromatographe gaz-liquide sur le marché (chromatographie en
phase
gazeuse : CPG ou GC)
- 1965 (HALASZ, HORVATH) : Chromatographie Liquide Haute Performance
(CLHP ou
HPLC)
16 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Principe

Le principe repose sur l'équilibre de concentrations des composés présents entre

deux phases en contact : la phase stationnaire et la phase mobile (gaz ou liquide)
qui se déplace. La séparation est basée sur l'entraînement différentiel des
constituants du mélange. Ces derniers parcourent la phase stationnaire avec des
temps proportionnels à leurs propriétés intrinsèques (taille, structure, ...) ou à leur
affinité avec la phase stationnaire (polarité, ...).

K = CS/CM K : Coefficient de distribution

CS : Concentration de l’analyte A dans la phase stationnaire
CM : Concentration de l’analyte A dans la phase mobile

Chromatographie : partition phase stationnaire - phase mobile

Extraction : partition entre deux phases liquides non miscibles
Cristallisation : partition entre phase liquide - phase cristalline
Distillation : partition entre phase liquide - phase gazeuse
Sublimation : partition entre phase solide - phase gazeuse

17 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Classification des méthodes chromatographiques

On distingue les différentes méthodes chromatographiques selon la nature

des phases.

Phase stationnaire :
- dans une colonne au travers de laquelle progresse la phase mobile par gravité ou
sous l’action d’une différence de pression = chromatographie sur colonne
-sur une surface plane = chromatographie sur couche mince (CCM)

Phase mobile : phase qui se déplace sur ou à travers la phase stationnaire,

entraînant avec elle l’analyte. Le processus d’entraînement de cet analyte est appelé
élution. La phase mobile peut être un liquide ou un gaz

METHODES
PHASE MOBILE PHASE METHODE MECANISMES CHROMATOGRAPHI
STATIONNAIRE CHROMATOGRAPHIQUE QUES
Gaz Solide C.G.S
Adsorption C.G.S et C.L.S
Gaz Liquide C.G.L
Partition C.G.L et C.L.L
Liquide Solide C.L.S
Echanges d’ions C.L.S
Liquide Liquide C.L.L
Perméations C.L.S
18 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Chromatographies en phase liquide (CPL)
La phase mobile est un liquide. On distingue :

- La chromatographie de partage (CLL)

La phase stationnaire est un liquide immobilisé sur un support solide inerte : soit
imprégnée dans un solide poreux (risques de lessivage), soit greffée sur le solide
(phase greffée). La séparation repose sur le coefficient de partage du soluté dans
les deux phases liquides.
- La chromatographie d’exclusion, ou permutation de gel, ou tamisage moléculaire
(CLS)
La phase stationnaire est un solide poreux : les grosses particules sont exclues de
la phase fixe, les petites particules incluses diffusent dans les pores du gel et sont
donc retardés.

19 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Chromatographies en phase liquide (CPL)

- La chromatographie d’adsorption (CLS) (la plus ancienne et la plus générale)

La phase stationnaire est un adsorbant solide polaire (silice ou alumine) :
chromatographie sur colonne ou CCM. L’analyte adhère à la phase stationnaire
par physisorption et chimisorption ---> coefficient d’adsorption. La phase
stationnaire peut être modifiée pour être apolaire : chromatographie d’adsorption
en phase inverse.

20 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Chromatographies en phase liquide (CPL)

-La chromatographie par échange d’ions (CLS) ou chromatographie ionique

La phase stationnaire est une résine échangeuse d’ions (polymère porteur de
groupements ionisés, négativement pour séparer des cations, positivement pour
séparer des anions) : interactions électrostatiques.
- La chromatographie d’affinité (CLS)
la phase stationnaire est ici un substrat inerte sur lequel est greffé un “effecteur”
qui présente une affinité pour un soluté de l’échantillon à analyser (affinité
enzyme-substrat, ligand-récepteur, antigène-anticorps).

21 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Chromatographies en phase gazeuse (CPG)
La phase mobile est un gaz vecteur. On distingue :
- Chromatographie de partage (CGL)
- La chromatographie gaz-liquide : la phase stationnaire est un liquide immobilisé
sur un support solide par imprégnation ou par greffage.
- Chromatographie d’adsorption (CGS)
- La chromatographie gaz-solide : la phase stationnaire est un solide poreux,
réservé à
l’analyse de mélanges de gaz ou de liquides à bas points d’ébullition.
Eventuellement, la phase mobile peut être un fluide à l’état supercritique (ex CO2
à 50°C et 150 bars)

22 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Choix de la technique

Les différentes techniques sont complémentaires plutôt que concurrentes.

Le choix de l’une ou l’autre dépend :

- de la nature du soluté : gaz, liquide volatil, liquide peu volatil, solide,

macromolécule, espèce organique, polaire, ionique,…
- du but de l’analyse : identification de composants d’un mélange,
nécessité ou non de “coupler” la chromatographie avec une méthode
spectroscopique ou avec la spectrométrie de masse (CPG/SM ou
GC/MS), contrôle de pureté, purification de produits (colonnes
préparatives), suivi de réaction en continu pour optimiser des
paramètres, dosages (quantification)…

23 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Chromatogramme

Diagramme montrant l’évolution du signal du détecteur (÷ à la concentration en

soluté) en fonction du temps d’élution (plus rarement du volume d’élution)

Elution : entraînement d’un soluté à travers la phase

stationnaire par le mouvement de la phase mobile.
En CLS (colonne ou CCM), la phase mobile peut être
appelée éluant
L’analyse du chromatogramme permet une analyse :
- qualitative : identification / position du pic
- quantitative : aire des pics

Chromatogramme:
24 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Chromatographie en phase liquide (CPL)
C’est une technique d’analyse qui consiste à séparer les espèces contenues dans
un échantillon entre une phase mobile (liquide) et une phase stationnaire (liquide
ou solide). Chaque soluté injecté sur la colonne est soumis à deux effets
antagonistes : un effet d'entraînement par la phase mobile dans laquelle il est
soluble et un effet de rétention par la phase stationnaire avec laquelle il interagit
La séparation et le temps de migration des composés à séparer dépendent des
différences d'affinités de ces composés pour les phases mobile et stationnaire.

Schéma de principe

25 TECHNIQUES DE SEPARATION
 Chromatographie en phase gazeuse (CPG)

L’échantillon est vaporisé et injecté au sommet de la colonne. L’élution est

assurée par un flux de gaz inerte appelé gaz vecteur (phase mobile). Il n’y a pas
d’interaction entre l’analyte et la phase mobile en CPG.

Schéma de principe

26 TECHNIQUES DE SEPARATION
Chromatographie sur couche mince (CCM)
= est une technique complémentaire de la CLHP, ayant sa propre spécificité. Bien que la
mise en œuvre de ces deux techniques soit différente,
Le principe de la séparation et la nature des phases restent les mêmes. Méthode sensible,
de faible coût, pouvant être automatisée, elle est devenue désormais indispensable sachant
aussi qu’il est possible de mener plusieurs séparations en parallèle.

La séparation des constituants de l’échantillon est réalisée sur une fine couche de phase
stationnaire, généralement à base de gel de silice,déposée sur une plaque rectangulaire de
verre, de plastique ou d’aluminium.
Le principe de la séparation entre phases est semblable à celui de la CLHP, mais la
conduite de l’expérience de CCM est différente. On distingue trois étapes.

27 TECHNIQUES DE SEPARATION
- Saturer une cuve chromatographique avec l’éluant :
Ex : Toluène / Ethoxyéthane / Acide éthanoïque / Méthanol (60/30/9/1 mL).

- Sur la même plaque chromatographique, faire un dépôt de solution à séparer.

- Développer le chromatogramme.

- Révéler en exposant la plaque sous une lampe UV.

28 TECHNIQUES DE SEPARATION
Chromatographie d’exclusion stérique (CES)
= est une méthode de chromatographie en phase liquide permettant de séparer des
macromolécules en fonction de leur volume hydrodynamique. Elle est notamment utilisée
pour faire l'étude de polymères.
Domaine d’application
– Macromolécules naturelles et synthétiques : polypeptides, protéines, sucres, polymères
Mécanismes
– Méthode fondée sur la différence de pénétration des molécules de l’échantillon
dans les pores de la phase stationnaire
– La séparation des molécules s’effectue donc en fonction de leur taille et de leur
forme
– Les molécules sont entraînées par la phase mobile à travers la phase stationnaire
constituée de grains poreux
– La phase stationnaire est aussi appelé GEL

por
es

29 TECHNIQUES DE SEPARATION 29
2.4. Electrophorèse
L'électrophorèse est une méthode de séparation de particules
chargées électriquement par migration différentielle sous l'action d'un champ
électrique.

Schéma d’un dispositif d’électrophorèse sur bandelette

2.5. Recristallisation

La recristallisation est une méthode de purification d'un produit solide. Elle

permet de séparer un solide de ses impuretés après une réaction ou une
extraction. Le principe de la recristallisation repose sur la différence de
solubilité d’un composé dans un solvant à chaud et à froid.

30 TECHNIQUES DE SEPARATION 30