QUE SON LAS VACUNAS:

La vacuna es un preparado de antígenos que una vez dentro del organismo provoca una respuesta de 
ataque, denominada anticuerpo. Esta respuesta genera memoria inmunológica produciendo, en la 
mayoría de los casos, inmunidad permanente frente a la enfermedad. La primera vacuna descubierta 
fue la usada para combatir la viruela por Edward Jenner en 1798.
VACUNAS DE ADN:

Este método de vacunación consiste en la inyección de un fragmento de  DNA purificado que 
contenga los genes específicos para  el antígeno de interés. Por ejemplo si es posible insertar el 
DNA que codifica un antígeno de virus  de  la viruela en un plásmido derivado de E. coli, un 
fragmento de DNA circular que actúa como vector. El gen de la viruela es puesto bajo control de 
una fuerte secuencia promotora de mamífero. Cuando el plásmido modificado por ingeniería 
genética se inyecta  por vía intramuscular en una animal, suele ser captado por células huéspedes y 
expresado por ellas. De este modo, el plásmido de DNA que codifique el gen para el antígeno de la 
viruela. El plásmido, a diferencia de los vectores virales, no pueden multiplicarse en células de 
mamífero. Las células huéspedes “transfectadas” expresaran el antígeno de la viruela, lo cual llevará 
al desarrollo no solo de anticuerpos neutralizantes sino también, dado que el antígeno es endógeno, 
de linfocitos T cititoxicos. Este enfoque se ha aplicado de manera experimental  para producir 
vacunas contra el herpes bovino, influenza aviar, corio meningitis linfocitica, rabia canina y felina, 
parvovirus canino, diarrea bovina, virus de la inmunodeficiencia felina, seudarobia, tuberculosis y 
en enfermedad de Newcastle.

OBJETIVOS VACUNAS DE DNA

• Proporcionar protección
• Inducir memoria inmunológica a largo plazo.
• Inducir anticuerpos neutralizantes.
• Inducir respuesta inmune efectiva 
• Producir respuesta inmunológica similar a la de infección natural

LAS VACUNAS CONTIENEN

Inmunogenos: sustancia capaz de inducir una respuesta inmunitaria y de reaccionar con las 
moléculas generadas en dicha respuesta, los 3 requisitos que debe cumplir un inmunogeno son los 
siguientes: ser reconocido como extraño al organismo, tener un elevado peso molecular y presentar 
un grado mínimo de complejidad bioquímica.
Preservativos: son sustancias agregadas a la vacuna los cuales impiden que esta se contamine con 
algún tipo de bacteria o algún tipo de infección fúngica (hongo).
Aditivos: estas sustancias son agregadas por ejemplo a las vacunas de virus vivos atenuados para 
poder estabilizar dicho virus y hacerlo mas estable para que no ocurran por ejemplo mutaciones del 
virus.
Adyuvantes: tiene una cualidad inmunopotenciadora que como su nombre lo dice aumenta la 
intensidad de la respuesta inmune.
Plásmidos: Los plásmidos son fragmentos extracromosómicos de ácidos nucléicos (ADN o ARN) 
que aparecen en el citoplasma de las células, Los plásmidos empleados en ingeniería genética se 
llaman vectores. Son muy útiles para sintetizar en grandes cantidades proteínas de interés en este 
caso inmunogenos que se requieren sean expresados en las células del organismo para producir una 
respuesta inmunitaria.

ADN RECOMBINANTE:
Esta tecnología nos permite obtener fragmentos de ADN en cantidades ilimitadas, que llevará 
además el gen o los genes que se desee. Este ADN puede incorporarse a las células de otros 
organismos (vegetales, animales, etc...) en los que se podrá "expresar" la información de dichos 
genes. (De una manera muy simple podemos decir que "cortamos" un gen bacteriano y se lo 
"pegamos" al ADN de un animal, para que la célula donde se inserta este obligada a producir la 
sustancia que deseamos. 
Lo primero que se hace es identificar el gen que deseamos utilizar que esta por ejemplo en una 
bacteria, tomamos la cadena de ADN y se corta a través de unas enzimas llamadas de “restricción” 
las cuales también se utilizaran para cortar el plásmido donde queremos que se inserte este gen en 
cada una de las cadenas (el gen y el plásmido) quedaran unos bordes llamados cohesivos o 
pegajosos, reciben este nombre porque se pueden unir entre si luego de ser cortados.
Lo segundo que se debe hacer es unir el gen que esta cortado al plásmido y se realiza a traves de 
otras enzimas que reciben el nombre de ADN ligasa  que van a unir ambos trozos de ADN, el 
resultado es una molecula de ADN recombinante ya que posee fragmentos de ADN de distinta 
procedencia. 
Lo ultimo es insertarlo en el organismo donde queremos que se produzca el elemento para el cual 
ese gen codifica y se produzca una respuesta inmune eso se hace a traves de las vacunas.
VACUNAS DNA DESNUDO:
Se sabe que el ADN  de cualquier organismo vivo mantiene la información necesaria para codificar 
y producir todas las proteínas que éste necesita para su funcionamiento. Trozos de ADN constituyen 
los genes, y cada gene específico, codifica una proteína específica. En esta forma, al inyectar un 
trozo desnudo de DNA se están inyectando genes, que pueden servir como vacuna, ya que se espera 
que éste entre a las células humanas y allí ellas sinteticen las proteínas específicas del germen, las 
que a su vez van a llegar a despertar la respuesta inmunológica respectiva en los linfocitos. Esto es 
la teoría, pero la realidad es que aún hay muchos misterios por resolver para llegar a entender 
completamente el mecanismo íntimo de acción. El hecho es que el DNA desnudo es capaz de 
despertar una respuesta inmunológica.

Estas vacunas así logradas se han llamado “vacunas génicas" o "vacunas de DNA desnudo” y son 
preparadas con un trozo de DNA del germen patógeno. Luego dentro de la célula estos genes van a 
inducir que dicha célula exprese el antígeno que se desea el cual va a ser presentado al medio 
desencadenando la respuesta inmune que se necesita.
VIAS DE ADMINISTRACION:
Intranasal: por la mucosa nasal. 
Oral: Si se utilizan viales monodosis, se darán directamente en la boca.
Parental:
­intravenosa: administración de fármacos mediante la corriente sanguínea. Es muy rápida; por eso 
es la vía de elección en las urgencias. Permite administrar grandes cantidades de líquido y obtener 
concentraciones plasmáticas altas y precisas.
­intraperitoneal: no se utiliza en el ser humano
­intramuscular: tienen la particularidad de quedar depositadas en un tejido altamente vascularizado 
pero, comparado con las dos vías anteriormente expuestas, intradérmica y subcutánea, pobre en 
células presentadoras de antígenos. Por ello es necesario que el producto vacunal permanezca un 
tiempo más prolongado en el lugar de inoculación para así garantizar que se produzca una 
estimulación inmunitaria adecuada. Estas vacunas contienen adyuvantes con los que se combina en 
forma de partículas, es decir, el antígeno está absorbido en una sustancia gelatinosa (hidróxido o 
fosfato de aluminio) que actúa como depósito y lo va liberando durante un periodo de tiempo 
prolongado
Subcutánea: Introducción del preparado vacunal debajo de la piel, en el interior del tejido celular 
subcutáneo. 
Intradérmica: Introducción de una pequeña cantidad de antígeno vacunal o producto biológico en la 
dermis. 
La localización empleada es la superficie palmar del antebrazo o en la parte superior del brazo. 
MECANISMOS DE RESPUESTA INMUNE POR VACUNAS DE DNA:
Un aspecto que aun no se logra dilucidar del todo consiste en la interaccion que se da a cabo entre la 
vacuna de DNA con el sistema inmune.
Las cantidades de antigeno que se producen cuando el vector es administrado estan en el orden de 
nanogramos, por lo tanto estas cantidades tan pequeñas del antigeno hacen pensar que la respuesta 
inmune tan fuerte y constante se debe a las propiedades adyuvantes que posee el DNA y al tipo de 
celulas presentadoras de Ag transfectadas

Hay 3 mecanismos principales por el que el Ag es procesado y presentado al sistema inmune tras la 
vacunación con DNA. 

1­ Transfeccion de CPA: Se sabe que las CPA son un potente estimulo para el 
desencadenamiento de una respuesta inmune, también se sabe que pueden ser transfectadas in vivo 
por DNA para generar una fuerte respuesta por LTc, tan solo se necesitan 100 CPA para activar el 
sistema inmune y esta cantidad no es difícil de transfectar si se considera que el 8% de las células de 
la epidermis corresponden a células dendríticas, la transfección se realiza mediante el bombardeo de 
partículas de oro recubiertas por el plásmido, se administran aproximadamente 100 millones de 
“proyectiles” para activar a las CPA y se requiere que solo 100 de estos alcancen su objetivo, se han 
hecho experimentos en modelos de ratón quiméricos en los que queda claro que la presentación de 
antígeno luego de la vacunación se lleva a cabo principalmente por células de la medula ósea, es 
decir células presentadoras de Ag.
2­ Activación de respuesta inmune por transfección de celulas carentes de MHC II: la mayor 
parte de las células transfectadas tras la inyeccion de DNA consisten en celulas musculares y 
queratinocitos, Ambos participan activamente en la activacion de la respuesta inmune contra la 
proteina (Ag) transgenico pero es difícil pensar que lo hagan presentando el Ag directamente a los 
Linfocitos ya que estas celulas carecen de MHC II y también de moleculas como CD80/86 
necesarias para activar el sistema. El papel que estas celulas desempeñan es a través de la síntesis y 
secrecion de proteinas que aumenta la magnitud de la respuesta.
3­ Activacion cruzada o “cross­priming”:  es sabido que los péptidos adquiridos de manera 
exogena por las CPA son presentados al medio a traves de MHC II, aunque se considera que este 
tipo de proteinas son excluidas del MCH I existe evidencia de que este fenomeno puede ocurrir in 
vivo durante este proceso las CPA introducen péptidos o proteinas sintetizados por otras celulas y 
las presentan a linfocitos a traves de MHC clase I y II esto contribuye que las celulas somaticas 
actúen como reservorios de Ag contribuyendo a aumentar la intensidad de la respuesta inmune 
hacia la proteina.

APLICABILIDAD EN ENFERMEDADES: BRUCELOSIS BOVINA:
Etiologia:
Es una enfermedad infectocontagiosa producida por la bacteria Brucella abortus que afecta 
principalmente al ganado bovino, causando esterilidad en machos y abortos en hembras preñadas. 
Es una bacteria que se encuentra en la sangre, secreciones y en la leche de vaca. Provoca zoonosis al 
ser humano.
Patogenie:
Animales se infectan  directamente a través de la mucosa oronasal, ingestión de alimentos 
contaminados por microorganismo viables, por secreción vaginal de las hembras  poco después de 
abortar y por segregación de leche infectada con brucella.
El hombre se infectan por contacto directo con animales infectados o sus productos como: manejo 
de sangre, orina, fetos abortados, etc
Manifestaciones clinicas:
Los síntomas y signos más típicos en el hombre es fiebre, cefalea, escalofríos, dolores musculares, 
pérdida de apetito, etc.
Prevención:
Cuenta con dos tipos de Vacuna de bacterias atenuadas: Cepa 19 y Cepa RB 51.
Estas vacunas se obtienen a partir de bacterias que han perdido parcialmente su virulencia como 
resultado de inoculaciones en medio de cultivos, pero que conservan su capacidad antigénica. 
Aunque estas vacunas no son totalmente avirulentas, conservan su capacidad de replicarse, y 
consecuentemente, pueden provocar la infección.

Nuevas tendencias en vacunas:
Vacunas ADN para brucella: Inmunización altamente efectiva.
Modo de acción:
Se inocula en el animal que se desea inmunizar, segmentos del gen de la bacteria brucella spp que 
codifica para la proteína de interés.
Las células absorben ese ADN y lo usan para producir proteínas de la brucella.
Proteínas estimulan a organismo para producir una respuesta inmunitaria de defensa contra 
enfermedad.
Mecanismos celulares involucrados en la respuesta inmune:
Las vacunas ADN tiene la cualidad de expresar antígenos de proteína nativas in vivo para 
reconocimiento de células B y presentar moléculas MHC I y II para estimular a linf Th y linf Tc que 
son capaces de destruir células infectadas con brucella.
Ventaja vacuna ADN
Confiere una mayor efectividad y protección contra brucellosis  que las vacunas de bacterias 
atenuadas (Cepa 19 Y Cepa RB 51) sin el riesgo de infección.
El inmunogeno se expresa in vivo en el animal.
Se inyecta el gen que codifica para antígeno de ese patógeno.
La cepa 19 y cepa RB 51 no ofrece garantías de seguridad en su administración y no permite la 
completa erradicación del microorganismo patógeno. 
VENTAJAS Y DESVENTAJAS VACUNAS DNA:
La expresión in vivo del antígeno patógeno de interés induce una fuerte inmunidad, tanto humoral 
como celular, siendo esta última de mayor memoria y eficacia. 
Inducen una respuesta duradera con tan solo una inoculación.
Métodos Inoculación: oral y  mediante pistolas genéticas 
Memoria inmunológica: respuesta inmune duradera: generan respuestas capaces de durar toda la 
vida.
La expresión antigénica en células de músculo es larga y puede inducir inmunidad de larga duración 
sin necesidad de reinmunizaciones. 
Los plásmidos DNA empleados llevan su propio adyuvante en forma de repeticiones CpG por lo 
que se pueden evitar adyuvantes tóxicos y minimizar sus daños aumentando así la calidad del 
producto. 
Las vacunas DNA son una tecnología aplicable a muchas enfermedades/patógenos posibles 
("transdisease technology") por lo que cualquier avance en una vacuna contra una enfermedad 
específica, es rápidamente exportable a otras. 
El uso de plásmidos de expresión transitoria (Estepa et al, 1994) evita los efectos adversos asociados 
a otros vectores. 
Se pueden usar para vacunar grandes cantidades de peces de todas las especies y tamaños. 
Se puede inducir una respuesta inmune aún cuando la expresión del antígeno se restringe a células 
musculares con un promotor específico de miocitos, lo que confirma la importancia del transfer de 
antígeno de estas a CPAs.

 Pueden inducir la presentación de  antígenos a través de las vías tanto del complejo mayor de 
histocompatibilidad (CMH) de clase I como del CMH clase II, lo que   lleva a     la activación de 
células T cooperadoras CD4+ y citotóxicas CD8+ .( Estimuladora más potentes para la generación 
de linfocitos citotóxicos).

 El desarrollo y la producción de vacunas de DNA son relativamente fáciles y de bajo costo ya que 
se utiliza un proceso genérico para su producción. 

Son muy estables, lo que facilitaría el almacenamiento y distribución de estas vacunas (cuadro I). 
Estas características explican el gran interés generado por las vacunas de DNA, las cuales se han 
probado con éxito contra un numero creciente de enfermedades.

Se consideran seguras, Estos estudios indican que el riesgo de integración de DNA plasmídico esta 
varios ordenes de magnitud inferior a la frecuencia de mutación espontánea del genoma, lo que 
representa un riesgo no significativo 

DESVENTAJAS

Existe riesgo de integración de el ADN vacunal al genoma del receptor.

Riesgo de generar tolerancia inmunológica

Riesgo de integración al genoma de células germinales

Aplicables solamente a antígenos proteico