Clase

Fosforilación Oxidativa
Dr. Dante Miranda Wilson
 ADAPTACIONES EVOLUTIVAS ANTE
LA APARICION DEL OXÍGENO

ANAEROBIOS

USO DE OXÍGENO MORIR RETIRARSE A UN

AMBIENTE ANAEROBIO

FOSFORILACIÓN
OXIDATIVA
 El ser humano vive porque es capaz de realizar
múltiples reacciones químicas, reguladas e
integradas a una velocidad compatible con la
máxima sobrevida en condiciones fisiológicas

Para realizar este trabajo químico se requiere ENERGÍA

1. Glicolisis
2. Descarboxilación oxidativa de piruvato

4.Amino ácidos 3. Oxidación de ácidos grasos

Poder Reductor
 Respiración Celular

Poder reductor:
Electrones con un alto potencial de transferencia

Transporte de electrones genera:

•∆ pH
•Potencial eléctrico
 Fosforilación Oxidativa

• Es un proceso mediante el cual la energía liberada durante la

oxidación de NADH y FADH2 es convertida en energía química
(ATP).

• Lugar: Mitocondria

•Nº y actividad reflejo de actividad metabólica

Ej. la mitad del contenido citosólico de cardiomiocitos corresponde
a mitocondrias.
Hepatocitos contienen entre 800-2000 mitocondrias.
Eritrocitos no tienen mitocondrias.
Mb externa contiene porina.
Fosforilación oxidativa:

Potencial Redox ∆E°’ ∆G°’ (Potencial de transferencia

de fosforilo)
∆Gº’ = - nf ∆Eº’
 NADH
Complejo I deshidrogenasa

FADH2
Complejo II
(succinato deshidrogenasa)

Citocromo
Complejo III reductasa

Complejo IV
 Componentes de la cadena transportadora de electrones mitocondrial

Oxidant or reductant
Enzyme complex Mass (kd) Subunits Prosthetic group Matrix side Membrane Cytosolic side
core
NADH-Q 880 7* 34 FMN NADH Q
oxidoreductase
Fe-S
Succinate-Q 140 0* 4 FAD Succinate Q
reductase
Fe-S
Q-cytochrome c 250 1* 10 Heme bH Q Cytochrome c
oxidoreductase
Heme bL
Heme c1
Fe-S
Cytochrome c 160 3* 10 Heme a Cytochrome c
oxidase
Heme a3
CuA and CuB

Sources: J. W. DePierre and L. Ernster, Annu. Rev. Biochem. 46(1977):215; Y. Hatefi, Annu Rev. Biochem. 54(1985);1015;
and J. E. Walker, Q. Rev. Biophys. 25(1992):253.
*: Subunidades codificadas por DNA mitocondrial
 NADH
FMN en Complejo I
FMN
 Centros Fe-S

Fe+3 + e- Fe+2
FMN en Complejo I

Fe+3 + e- Fe+2

Coenzima Q
Coenzima Q

Citocromo reductasa
 2 3
1 AcilCoA
Glicerol-3P
FAD
G3PDH(FAD)
Succinato Fumarato ETF (FAD)

FADH2
Oxido
Reductasa (Fe-S)

FAD UQ/UQH2
Fe-S
Hem b

Succinato
Deshidrogenasa
Complejo III
Citocromo
Reductasa
 Citocromo

Proteína de transferencia de electrones que contiene un grupo prostético Hem

QH2

Fe+2-Cit c

Citocromo
Oxidasa
Citocromo Oxidasa (grupos Hem y Cu)
Citocromo c es una estructura altamente conservada:

•Presente en todo organismo con mitocondria

•cit c de cualquier especie eucariótica reacciona in vitro con la citocromo
oxidasa de cualquier especie.
•Los potenciales de reducción de los cit c estudiados están cercanos a
los +0,25 v.
•Los espectros de absorción son indistinguibles.
•cit c de procariótes se parecen a cit c de eucariótes.
•26 de 104 aa se han mantenido invariables por más de 1,5 billones de
años (aa ligandos de hem, gli)
Resumen:
Inhibidores Fosforilación Oxidativa
 Inhibidores Fosforilación Oxidativa

Name Function Site of Action

Rotenone e- transport inhibitor Complex I
Amytal e- transport inhibitor Complex I
Antimycin A e- transport inhibitor Complex III
Cyanide e- transport inhibitor Complex IV
Carbon Monoxide e- transport inhibitor Complex IV
Azide e- transport inhibitor Complex IV
2,4,-dinitrophenol Uncoupling agent transmembrane H+ carrier
Pentachlorophenol Uncoupling agent transmembrane H+ carrier
Oligomycin Inhibits ATP synthase ATP synthase
Regulación Fosforilación Oxidativa

ADP cerca del

+ ADP agotamiento
 SINTESIS DE ATP

1961: Teoría Quimiosmótica propuesta por Peter Mitchell

Evidencias:

• Transporte de electrones genera gradiente de H+ ,pH lado citosólico

1,4 unidades menor que pH matriz.
• Potencial de membrana es de +0,14 v.
• ATP es sintetizado cuando existe una gradiente de protones en
ausencia de transporte de electrones.
Ej.

Exp por Stoeckenius y Racker

 • NADH deshidrogenasa, citocromo reductasa y citocromo oxidasa
bombean protones fuera de la matriz.
• La fosforilación oxidativa no ocurre en preparaciones solubles o
suspensión de membranas.
• Sustancias que disipan la gradiente de protones desacoplan la
oxidación de la fosforilación.

Exp usando radionuclidos y fracciones F1 aisladas revelaron:

Enz:ADP + Pi Enz:ATP
Esto indicaba que la síntesis de ATP por F1 no requería energía y que el
movimiento de protones serviría para liberar el ATP sintetizado.
Complejo V: ATP Sintasa

Cataliza la síntesis de ATP usando la energía de la gradiente de protones

cuando regresan a la matriz a través de la ATP sintasa.

ATP sintasa se pudo observar mediante estudios de microscopía

electrónica evidenciándose como partículas pequeñas unidas a la
membrana interna de la mitocondria.

Al remover por agitación la partícula sobresaliente se perdía la capacidad

de síntesis de ATP y se mantenía el transporte de electrones.
 ATP sintasa
Complejo V

F1: αβγδε
(α3,β3,γ,δ,ε)

Fo: a,b,c
Matriz mitocondrial
Movimiento de protones a través de subunidad c de complejo Fo
 Evidencia experimental que demuestra la rotación de subunidades
Gamma.

•Mutación de aspártico por asparagina en gamma impide el movimiento

de protones.
Estudios de cristalografía de ATP sintasa (F1) en presencia de
ADP y de análogo de ATP no hidrolizable revelaron que ADP se unía a una
subunidad beta, el análogo de ATP a otra subunidad beta, mientras que la
tercera subunidad estaba vacía.
Se pudo inferir entonces que cada subunidad beta tiene una diferente
conformación dependiendo de la presencia del sustrato.

El movimiento de la subunidad gamma sería la que induciría el cambio

conformacional.
Estequiometría de síntesis de ATP por H+ transportados

CI: 4 H+ /2e 2H+ /e

CIII: 4 H+ /2e 2H+ /e

CIV: 4 H+ /4e H+ /e

2,5 ATP por cada NADH

1,5 ATP por cada FADH2
Transporte de ATP al citosol:
ATP-ADP translocasa
Transporte de NADH citosólico:
por glicerol 3-fosfato
Transporte de NADH:
por malato-aspartato

Malato/α-cetoglutarato
antiporter
Transportadores mitocondriales
Reaction sequence ATP yield per glucose molecule
Glycolysis: Conversion of glucose into pyruvate (in the cytosol)

Phosphorylation of glucose -1
Phosphorylation of fructose 6-phosphate -1
Dephosphorylation of 2 molecules of 1,3-BPG +2
Dephosphorylation of 2 molecules of phosphoenolpyruvate +2
2 molecules of NADH are formed in the oxidation of 2 molecules of glyceraldehyde 3-phosphate

Conversion of pyruvate into acetyl CoA (inside mitochondria)

2 molecules of NADH are formed

Citric acid cycle (inside mitochondria)

2 molecules of guanosine triphosphate are formed from 2 molecules of succinyl CoA +2

6 molecules of NADH are formed in the oxidation of 2 molecules each of isocitrate, α-ketoglutarate, and
malate
2 molecules of FADH2 are formed in the oxidation of 2 molecules of succinate

Oxidative phosphorylation (inside mitochondria)

2 molecules of NADH formed in glycolysis; each yields 1.5 molecules of ATP (assuming transport of NADH +3
by the glycerol 3-phosphate shuttle)
2 molecules of NADH formed in the oxidative decarboxylation of pyruvate; each yields 2.5 molecules of +5
ATP
2 molecules of FADH2 formed in the citric acid cycle; each yields 1.5 molecules of ATP +3
6 molecules of NADH formed in the citric acid cycle; each yields 2.5 molecules of ATP + 15
+ 30
net yield per molecule of glucose
Source: The ATP yield of oxidative phosphorylation is based on values given in P. C. Hinkle, M. A. Kumar, A. Resetar, and D. L. Harris,
Biochemistry 30(1991):3576.
Note: The current value of 30 molecules of ATP per molecule of glucose supersedes the earlier one of 36 molecules of ATP. The stoichiometries
of proton pumping, ATP synthesis, and metabolite transport should be regarded as estimates. About two more molecules of ATP are formed per
molecule of glucose oxidized when the malate-aspartate shuttle rather than the glycerol 3-phosphate shuttle is used.
 Adaptación al frío por proteína desacoplante
UCP-1

+
NE

Rβ Ac. Grasos
TG
cAMP PKA

La vía de disipación de protones es activada por ácidos grasos liberados de triglicéridos en

respuesta a señales hormonales, tal como agonistas β-adrenérgicos.
 Molécula desacoplante:

H+

Bajo pH
Alto pH
Generación de radicales de oxígeno asociado al transporte de electrones

Efectos en envejecimiento por modificación de macromoléculas

y DNA mitocondrial
Enfermedades mitocondriales:
Origen hereditario. Mutaciones en tRNA que afectan la síntesis de proteínas
llevando a la disminución de Complejo I y Citocromo c Oxidasa:

Neuropatía óptica
MELAS ( encefalopatía mitocondrial con acidosis láctica)
Mecanismos defensivos: