Introduction rapport de stage

1er jour : arrivée à 9h30

1. Lecture des protocoles fait et créés par l’Inserm en Anglais.

11 heure, présentation et formation en salle de culture par Azouz :

• Normes hygiènes (blouse, charlotte, surchaussure, et gants)
• Les hottes spécifiques pour les manipulations
• Les produits d’entretiens pour le nettoyage des matériels
• Les systèmes de compteurs pour le CO2 , alarme selon la quantité de CO2
dans l’air.
• Le tapis d’entrée dans le Sas avant la porte pour être dans la salle de culture
(tapis avec produit collant pour enlever les saletés de sous les semelles)
• Les différentes poubelles pour les différentes utilisations poubelle déchets
biologique (cônes, gants, les boîtes PD3 ou PD6,…), poubelle déchets
papiers (Sopalin avec produit de nettoyage (PhagoSpray, Ethanol), ou
emballage des pipettes), poubelle de verre (lâmes en verre, autres….)
poubelle à pipette (pipette de 5ml, 10ml,…)

L’après midi : Participation d’un séminaire en Anglais sur des projets métaboliques
pour un entraînement sur les Thèses.

Manipulation en Cardiologie avec Albin (secteur cardiaque) pour un

Changement de Milieu et Sarah (secteur cardiaque et neuronale)

Durant ce stage je vais devoir apprendre à m’occuper de mes propres cellules

(cardiomyocytes)
Donc pour cela on doit suivre un protocole précis créé par eux même.La création
du protocole des hIPSc à était créé en 2017.
Les hIPSc sont des cellules qui ont étaient congelés à l’azote, pour être décongelés
par la suite etpouvoir commencer 30 jours plus tard les manipulations. Les hIPSc
sont des cellules issus d’un prélèvement de sang ou de peau qui ont étaient
reprogrammés dans un état pluripotent ce qui permet un développement d’une
source illimité comme les cellules Cardiaques et Neuronales à l’Inserm.
Les cardiomyocytes sont des cellules très fragiles du fait que leur membrane soit
bien plus fine et par les contractions qu’elles ont.
 1ère activité : Différentiation cardiaque

La différentiation cardiaque permet la transformation de cellules hIPScs en cellules

cardiaque d’après un protocole fait par l’Inserm eux-mêmes.
Le protocole pour les différentiations cardiaques à était mis en place en 2017 ce qui
est récent en terme de science.

Les cellules hIPSCs sont des cellules indifférenciées qui sont issues d’une prise de
sang, d’urine, où un bout de peau,…
On peut les transformer en cellules cardiaques ou neuronales comme au
Laboratoire, ou alors en cellules de foie, cœur, estomac selon le protocole qu’on
utilise.
Il existe 2 lignés de nos cellules : les RDES qui sont une lignés de patients saints
n’ayant aucune maladie pathogènes , et les CPVT qui sont issues de patients
souffrant de pathologies cardiaque comme la : « Tachycardie Ventriculaire
Polymorphe Cathécolaminergique ».
Les CPVT sont des patients atteints de tachycardie ventriculaire qui est une
défaillance des battements de coeur qui sont soit trop long, trop rapide ou alors
irréguliers qui font des défaillances sur le pompage du sang au coeur.
Les demandes sont faites par le CHU Lapeyronie car ils sont en partenaire avec
pour permettre de trouver des résultats pour des traitements adéquats aux patients
atteints de maladies cardiaques.
 2ème activité : Passage des hIPSCs

Le but d’un passage est de permettre de lancer une différentiation de cellules

indifférenciés qui sont arrivés à terme de confluence.
Pour cela nous allons donc réaliser un protocole qui demande une dissociation
mécanique et enzymatique.
En premier temps nous réalisons une dissociation enzymatique avec du Tryple qui
est une enzyme expresse pour permettre un meilleur développement des cellules.
Nous le mettons à l’incubateur à 37°C pour permettre un décollement des cellules
sur le Matrigel se trouvant au fond des Flasks.
Puis nous prenons une P1000 pour faire des aller retour pour bien décoller les
cellules.
Après nous récupérons les cellules dans un Falcon pour ensuite centrifuger.
Durant ce temps nous allons compter les cellules sur une Lame de Malasset.
Nous allons donc poser un calcul pour le nombre de cellules que nous retrouvons
dans la solution mise dans la Centrifugeuse.
Le calcul est : Nbre Cellules x Facteur Dilution x Conversion Ml à µl x Volume final