La fluorescence

I. La fluorescence :

I. 1. Définition :

Le phénomène de fluorescence correspond à un processus dans lequel un atome absorbe de

l'énergie, généralement de la lumière à une certaine longueur d'onde, et réémet immédiatement (ou
dans un intervalle de quelques nanosecondes) de la lumière à une autre longueur d'onde.

La fluorescence représente une autre forme de photoluminescence que la phosphorescence.

Les molécules qui fluorescent sont en majoritéś cycliques et rigides. On les appelle « des
fluorophores » ou « fluorochromes ». Ceux-ci sont caractérisés par plusieurs paramètres tels :

 Les longueurs d'onde de leurs pics d'excitation et d'émission ;

 La durée de vie de leur état excité ;
 L'efficacité de leur fluorescence (c'est-à-dire le nombre de photons émis rapporté au nombre
de photons absorbés (1).

I. 2. Histoire :

Aux environs de l'an 1000 existait chez l'empereur de Chine, un tableau magique sur lequel un
bœuf apparaissait chaque soir. Ce fut le premier exemple, dans l'histoire, d'un matériau fabriqué par
l'Homme capable d'émettre de la lumière luminescente. Ce procédé fut retrouvé par hasard par le
cordonnier et alchimiste bolonais Vincenzo Cascariolo (1571-1624) en 1603.

Le terme dérive du minéral fluorite qui a la particularité de présenter très fréquemment une

fluorescence, mais aussi une triboluminescence, voire une thermoluminescence, sans être
phosphorescente.

C'est Stokes qui invente le mot fluorescence en 1852. Il publie dans Philosophical Transactions

of the Royal Society ses observations sur un phénomène qu'il propose de nommer fluorescence (à la
place de réflexion dispersive), dans un article intitulé On the change of refrangibility of light. Le
terme est introduit en 1853(2).

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https://www.futura-sciences.com/sciences/definitions/physique-fluorescence-859.25/12/2020.23.15h
2()
https://fr.wikipedia.org/wiki/Fluorescence.25/12/2020.23.21h

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 La fluorescence

I. 3. Principe :

La fluorescence est la propriété de certains atomes et molécules qui leur permet d’absorber la
lumière à une longueur d'onde particulière (excitation : Ex) suivie d’une brève émission (Em) de
lumière à une longueur d'onde plus longue (Figure 1). La distance entre les pics d’excitation et
d’émission est appelée déplacement de Stokes (ou Stokes shift) et dépend du fluorophore
(Figure 1).

La fluorescence implique une source de lumière externe pour exciter l’échantillon à une
longueur d'onde particulière. Lorsque la molécule est excitée à la longueur d'onde appropriée, elle
passe d’un état fondamental à un état excité. Lorsque la molécule retourne à l’état fondamental, de
l’énergie est libérée sous forme de chaleur (perte d’énergie) et de lumière à une longueur d'onde
plus longue différente d’énergie plus faible (Figure 1) (3).

Figure N° 01 : Les étapes de la fluorescence (4)

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https://fr.moleculardevices.com/technology/fluorescence#gref.27/12/2020.23.05h
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https://fr.moleculardevices.com/technology/fluorescence#gref.27/12/2020.23.05h

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 La fluorescence

I. 3. 1.Comment fonctionne la détection de la fluorescence ?

Un lecteur de microplaques avec détection de l’intensité de la fluorescence (IF) utilise une

source de lumière, généralement une lampe flash Xénon ou une LED, pour exciter un fluorophore
(molécule fluorescente) à une longueur d'onde particulière. La longueur d'onde requise pour exciter
l’échantillon peut être sélectionnée en utilisant un filtre d’une longueur d'onde spécifique ou un
monochromateur réglé à la longueur d'onde requise. Le fluorophore émet alors une lumière d’une
longueur d'onde différente, sélectionnée par un second filtre ou monochromateur. La fluorescence
émise est détectée par un tube photomultiplicateur (TPM), et l’intensité de la fluorescence de
l’échantillon est exprimée en unités de fluorescence relative (5).

I. 4. Types de Fluorescence : On distinct deux types comme suit :

I. 4. 1. Fluorescence naturelle :

Les acides aminés aromatiques (phénylalanine, etc.), certaines vitamines du groupe B, par

exemple, les polyphénols (catéchine, acide gallique, etc.), le quartz ou encore la chlorophylle sont
des fluorophores naturels.

Dans une comète, les ions CO+ (le monoxyde de carbone (CO) est, après l'eau, l'élément le plus

abondant dans les comètes), après avoir absorbé la lumière du Soleil, réémettent par fluorescence
une lumière bleue qui donne sa couleur à la queue d'ions.

I. 4. 2. Fluorescence artificielle :

Dans les lampes fluorescentes (comme dans les lampes fluocompactes), un gaz émet de la

lumière ultraviolette lorsqu'il est traversé par une décharge électrique (6). Un revêtement
de phosphore absorbe cette lumière ultraviolette et la transforme par fluorescence en lumière
visible. Les vêtements à haute visibilité, les surligneurs fluorescents ou encore la spectroscopie de
fluorescence X exploitent aussi le phénomène de fluorescence (7).

I.5. Minéraux pouvant présenter une fluorescence :

Adamite, albite, allophane, alunite, amblygonite, analcime, andalousite, anglésite, anhydrite, ankérit
e, anthophyllite, aragonite, autunite, bénitoïte, berlinite, calcite, célestine, cérusite, chamosite, charl

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https://fr.moleculardevices.com/technology/fluorescence#gref.27/12/2020.23.05h
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https://www.futura-sciences.com/sciences/definitions/physique-fluorescence-859.25/12/2020.23.15h
7()
https://www.futura-sciences.com/sciences/definitions/physique-fluorescence-859.25/12/2020.23.15h

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esite, charoïte, colémanite, corindon, cristobalite, cryolite, danburite, datolite, diaspore, diopside, di
sthène, dolomite, épidote, érythrite, fluorite, fluorapatite, gypse, halite, haüyne, hémimorphite, heul
andite, jadéite, laumontite, lussatite, manganaxinite, magnésioaxinite, magnésite, mélanophlogite, m
ellite, microcline natrolite, okénite, oligoclase, opale, pectolite, périclase, phlogopite, phosgenite, pr
ehnite, quartz, rhodonite, scheelite, scolécite, smithsonite, sodalite, sphalérite, spinelle, spodumène, 
strontianite, thénardite, topaze, torbernite, trémolite, tridymite, uvarovite, variscite, wollastonite, wu
lfénite, zoïsite(8).

I.6. Applications de la fluorescence

1) Dosages du calcium (GPCR)

2) Tests cAMP (GPCR)
3) Tests apoptose Caspase-3
4) Tests de prolifération cellulaire
5) Tests de cytotoxicité
6) Test de cardiotoxicité EarlyTox
7) Kits de test de viabilité cellulaire EarlyTox
8) Quantification des protéines par fluorescence
9) Analyse des nanoparticules
10) Flux de calcium neuronal
11) Quantification des acides nucléiques
12) Détection du tryptophane (9).

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https://fr.wikipedia.org/wiki/Fluorescence.25/12/2020.23.21h
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https://fr.moleculardevices.com/technology/fluorescence#gref.27/12/2020.23.05h