La réaction inflammatoire aigue est une réaction rapide du système immunitaire permettant de détecter

(reconnaître) les micro-organismes étrangers (et par extension les antigènes), et de les éliminer grâce à la phagocytose.
Cette réaction, commune à tous les animaux, n’est pas spécifique : tous les antigènes sont reconnus par n’importe
quelle cellule de l’immunité.
Emil Adolf von Behring (1854-1917) est un médecin allemand et premier lauréat du prix Nobel de physiologie
ou médecine en 1901 pour avoir découvert le sérum de l'antitoxine de la diphtérie et amené une approche rationnelle
des maladies. Le document ci-contre présente une de ces expériences historiques.

A. A partir d’une analyse rigoureuse de l’expérience de Von Behring, montrez qu’il existe chez le cobaye (mais
aussi chez l’Homme …) d’autres mécanismes de l’immunité reposant cette fois-ci sur une spécificité aux
antigènes rencontrés. Précisez où se situent les acteurs de cette immunité et s’il s’agit de cellules ou de
molécules.

Vous êtes un collègue d’Emil et vous cherchez à comprendre quelles sont les caractéristiques de cette
immunité spécifique.

B. Analysez le document 3 page 306 pour identifier l’acteur principal de cette immunité.

C. Mettez en relation votre conclusion avec les informations apportées par le document 2 page 306 et proposez
un autre nom à cet acteur.

Vous souhaitez donc vérifier si les anticorps sont bien des molécules spécifiques aux antigènes et responsables
de cette immunité spécifique.

D. Montrez à l’aide des documents de votre livre que les anticorps sont bien capables de se fixer aux antigènes et
donnez le nom de la structure formée par la fixation des anticorps sur les antigènes.

Questions
Compétences évaluées
Thème 3B Activité 2 1
Autoévaluation
Notes

La méthode de double diffusion en gel
d’Ouchterlony est une méthode d'immunoprécipitation
fondée sur la diffusion d’antigènes et d’anticorps en
milieu solide (en général un gel d’agarose) à partir de
puits placés en vis à vis. Lorsque les molécules d'anticorps
rencontrent les molécules d'antigènes, la liaison antigène-
anticorps conduit à la précipitation des complexes
immuns. Les précipités se présentent sous la forme d’un
arc blanchâtre visible à l’œil nu.
Matériel :
_ Une boite de pétri contenant de la gélose (milieu de migration des
produits).
_ Un tube creux emporte-pièce (pour faire des trous dans la gélose).
_ Un papier avec une matrice de perçage (aide à placer les puits).
_ Une aiguille (pour enlever les morceaux de gélose découpés).
_ Un stylo feutre (pour numéroter les puits).
_ Une micropipette (pour faire les dépôts dans les puits) à volume
variable.
_ Des cônes pour micropipette (A USAGE UNIQUE !).
_ Un lot de tubes à hémolyse contenant différentes molécules.

E. Réalisez les étapes préparatoires au test d’Ouchterlony :

a. Préparez une boite gélosée en diluant puis en chauffant
jusqu’à ébullition 0,4g d’agar dans 30mL d’eau distillée.
Agitez régulièrement. Retirez du feu puis coulez la
gélose dans la boite de pétri. Fermez la boite et laissez
sécher la gélose.
b. La diffusion se fait dans un gel solide dans lequel il faut
réaliser des puits pour les dépôts. On réalise au total 7
puits à l’aide de l’emporte-pièce et de l’aiguille (voir
schéma ci-contre). Aidez-vous du gabarit de perçage.

On dispose du sérum d’un animal qui vient de guérir de la diphtérie. Son taux d’anticorps circulant (dans le
sang) étant particulièrement élevé, on prélève son sérum. On dispose également de cultures de différents micro-
organismes pathogènes donc de différents antigènes :
- Des antigènes de bacilles de la diphtérie
- Des antigènes de bacilles tétaniques
- Des antigènes de staphylocoques
- Des antigènes d’E. coli
- Des antigènes d’une des souches du virus de la grippe.
- Des antigènes d’une souche de coronavirus
N.B. : on ne dispose dans cette expérience que d’antigènes, c’est-à-dire de molécules isolées issues de ces
micro-organismes : les solutions utilisées sont donc inoffensives.

F. Expliquez à l’aide d’un schéma la manière dont vous allez répartir les différentes solutions dans les puits créés
à l’étape E.b.
Montrez votre proposition au professeur pour vérification.

G. Après validation, et chaque fois avec un cône propre, réalisez les dépôts suivants :
a. Déposez 30 µL du sérum avec anticorps dans le puits prévu
b. Déposez 30 µL de chaque culture contenant les antigènes dans chacun des autres puits prévus.
ATTENTION : Pensez à identifier chaque puits (écrire sous la boîte) par une lettre ou un symbole (notez la légende sur
votre copie).

H. Fermez la boîte de Pétri, en la scotchant, et marquez votre nom sur le dessus de la boîte. La lecture des
résultats se fait normalement au bout de 24h de migration.

I. Analysez les résultats obtenus et déduisez une des propriétés principales des anticorps.

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