Solution de la série de TD 01 de TAB/M1Biochimie

Année 2020/2021

Solution 1 :

Connaissant les dimensions de la colonne, on peut déterminer alors son volume :

𝑑 2 1,5
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑑 𝑢𝑛 𝑐𝑦𝑙𝑖𝑛𝑑𝑟𝑒 = 𝜋. 𝑟 . ℎ = 𝜋. ( ) . ℎ = 3,14. ( ) . 90 = 159 𝑐𝑚3
′ 2
2 2
 Volume total de la colonne Vt=159 cm3 =159 mL

Et on donne Vm=V0=45,9 mL

Ces valeurs nous permettent de calculer le coefficient de partage kav de chaque molécule sachant
que Ve est le volume d’élution correspondant :

𝑉𝑒 − 𝑉0 𝑉𝑒 − 45,9 𝑉𝑒 − 45,9
𝑘𝑎𝑣 = = =
𝑉𝑡 − 𝑉0 159 − 45,9 113,1

et de compléter le tableau donné :

PM (Da) Ve (mL) Log PM kav
SAB 68000 48 4,83 0,018
Ovalbumine 45000 54 4,65 0,072
Pepsine 35000 56,7 4,54 0,095
Hémoglobine 17000 67,5 4,23 0,190
Cytochrome C 13000 70 4,12 0,213
-amylase ? 50 ? 0,036

Ce qui nous permet de tracer un des 2 graphes ou courbes d’étalonnage cités dans le cours
Ve =f(logPM) ou kav=f(logPM).

1
 Résultat :

ou 0,036
50

4,75 4,8

Remarques :
Je vous laisse le soin de déterminer les échelles appropriées aux 2 graphes
Il est intéressant de remarquer que les deux graphes doivent donner des résultats
semblables

Solution 2 :

Sachant que le gel utilisé sépare les molécules de masse comprise entre 4.104 et 4.105 Da, ce
qui veut dire que le Bleu Dextran est totalement exclu Vm ou V0 =Ve(Bleu Dextran)=50 mL
et que la lactoglobuline est totalement incluse Vt=Ve(lactogluboline)=130 mL.

La méthode graphique de l’exercice 1 ne peut pas être utilisée dans ce cas parce que ne dispose
que de 2 points. On va alors appliquer une méthode mathématique (de calcul seulement).

Sachant que la relation qui lie le logarithme de la masse moléculaire MM au volume d’élution
Ve est de la forme y=ax+b  Ve = a.log MM + b

Et on peut alors poser 2 équations à 2 inconnues telles que :

fibrogène : 𝑉𝑒 = 60 = 𝑎. log(3,5. 105 ) + 𝑏 = 𝑎(5,53) + 𝑏 (1)

catalase : 𝑉𝑒 = 75 = 𝑎. log(2,3. 105 ) + 𝑏 = 𝑎(5,36) + 𝑏 (2)

−15
(2) –(1) : 15 = -a(0,17)  𝑎 = 0,17 = −88,2

(1) : b = 60-(-88,2)(5,53)= 547,9

 molécule X : Ve=110 = -88,2 logMM + 547,9

2
 110 − 547,9
⇒ log 𝑀𝑀 = = 4,96
−88,2

Log MM= 4,96  MM = 104,96 Da

Autre méthode :

𝑉𝑒 − 𝑉0 𝑉𝑒 − 50 𝑉𝑒 − 50
𝑘𝑎𝑣 = = =
𝑉𝑡 − 𝑉0 130 − 50 80
60−50
fibrinogène (MM=3,4 105 et Ve=60 mL) : 𝑘𝑎𝑣 = = 0,125
80
75−50
catalase (MM=2,3 105 et Ve=75 mL) : 𝑘𝑎𝑣 = = 0,31
80
De même, on peut poser les 2 équations à 2 inconnues telles que :
y=ax+b  kav=a.log MM+b

fibrinogène : log(3,4. 105 ) + 𝑏 (1)

0,125 = 𝑎. ⏟
5,53

Catalase : log(2,3. 105 ) + 𝑏 (2)

0,31 = 𝑎. ⏟
5,36

(2) – (1) : 0,185=-a. (0,17) a= -1,09

(1) : b=0,185 –(5,53)(-1,09)  b=6,14

 molécule X : Kav = -1,09 logMM + 6,14

110−50
Or Ve(X)=110 mL 𝐾𝑎𝑣 = = 0,75
80

0,75−6,14
0,75 = -1,09 logMM + 6,14 ⇒ 𝑙𝑜𝑔𝑀𝑀 = = 4,95
−1,09

 MM=104,95 Da